遼寧地區(qū)豬場呼吸道病原菌的分離鑒定與耐藥分析

王 哲，王一瓊*，王 冰

(1. 撫順市動物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 撫順 113006；2. 遼省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，遼寧 沈陽 110164)

近幾年，隨著我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，養(yǎng)殖數(shù)量呈現(xiàn)逐年升高的趨勢，尤其在遼寧、河北、山東、河南、陜西、山西等許多地區(qū)生豬的養(yǎng)殖數(shù)量較大，已經(jīng)形成集約化、規(guī)?；酿B(yǎng)殖模式[1，2]。 在豬的養(yǎng)殖過程中，豬細菌性呼吸道疾病成為臨床中重要的常見疾病。 豬細菌性呼吸道疾病發(fā)病率一直有增無減，引起豬細菌性呼吸道疾病的因素復(fù)雜，各個階段豬容易感染，尤其對仔豬危害較嚴(yán)重，發(fā)病率高達80%以上，死亡率高達60%以上[3，4]。 相關(guān)研究表明，引起規(guī)?；B(yǎng)殖場及散養(yǎng)戶中不同階段的豬呼吸道疾病因素有許多，臨床中以病毒、細菌、寄生蟲等多種病原傳染性因素比較常見，還有一些非傳染性因素(環(huán)境衛(wèi)生、環(huán)境應(yīng)激及飼養(yǎng)管理方式) 也是引起豬呼吸道疾病的重要因素[5，6]。 引起豬細菌性呼吸道疾病的病原主要有副豬嗜血桿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌及支氣管敗血波氏桿菌等，該病嚴(yán)重影響豬的健康生長，也是豬死亡的重要因素之一，且在臨床中常以多種病原菌和病毒混合感染為主[7，8]。 目前，臨床中豬細菌性呼吸道疾病主要通過抗生素進行預(yù)防與治療，在養(yǎng)豬過程中隨著抗生素的不合理使用，導(dǎo)致多種豬細菌性呼吸道疾病產(chǎn)生嚴(yán)重耐藥性，且出現(xiàn)多種耐藥菌株，嚴(yán)重降低其多種抗菌藥物的治療效果[9]。

1 材料與方法

1.1 病理來源

2022—2023 年采集規(guī)?；B(yǎng)殖場(戶)中不同階段的豬患呼吸道癥狀的咽拭子、鼻拭子、肺臟、肝臟及腎臟等病料組織348 份。

1.2 細菌分離與培養(yǎng)

對采集的采集規(guī)?；B(yǎng)殖場(戶) 中不同階段的豬患呼吸道癥狀的咽拭子、鼻拭子、肺臟、肝臟及腎臟等病料組織進行處理后，在無菌的條件下分區(qū)劃線接種于7%綿羊脫纖血培養(yǎng)基上，在37 ℃培養(yǎng)18 ～24 h 后，挑取7%綿羊脫纖血培養(yǎng)基上的菌落分別接種于巧克力培養(yǎng)基上、淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基、多殺性巴氏桿菌鑒別培養(yǎng)基及腦心浸液培養(yǎng)基，分別在37 ℃培養(yǎng)條件下鑒別培養(yǎng)12 ～18 h 后，在無菌條件下，分別挑取4 種不同的病原菌菌落，分別接種營養(yǎng)肉湯中，37 ℃條件下震蕩培養(yǎng)12 h，取營養(yǎng)肉湯中純化的病原按照革蘭氏染色說明書進行染色鏡檢，分別觀察4 種不同病原菌的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)。

1.3 生化試驗鑒定

參照革蘭氏陰性菌生化鑒定試劑盒，將臨床中分離的4 種不同的呼吸道病原，在無菌條件下分別接種到營養(yǎng)肉湯中，37 ℃條件下震蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期，用無菌營養(yǎng)肉湯調(diào)整4種呼吸道病原菌的菌液濃度為0.5 個麥?zhǔn)蠞岫龋?7 ℃培養(yǎng)12 ～18 h 后，參照說明書對4種分離的病原菌進行生化特性鑒定。

1.4 藥敏試驗

將分離的4 種呼吸道病原菌，在無菌條件下調(diào)整菌液濃度為0.5 ～1 個麥?zhǔn)蠞岫取?參照美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI) 2013 年推薦的藥敏試驗法標(biāo)準(zhǔn)進行藥敏試驗和結(jié)果判定。

2 結(jié)果

2.1 細菌分離培養(yǎng)

臨床中分離的4 種呼吸道病原菌分離菌株分別于巧克力培養(yǎng)基、淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基、多殺性巴氏桿菌培養(yǎng)基及腦心浸液培養(yǎng)基上長出典型的菌落形態(tài)，通過革蘭氏染色顯微鏡觀察分離的4 種呼吸道病原菌形態(tài)。 結(jié)果顯示，臨床中分離的4 種呼吸道病原菌分離菌株培養(yǎng)特性與形態(tài)學(xué)與《伯杰細菌鑒定手冊》 報道的副豬嗜血桿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌及支氣管敗血波氏桿菌菌株培養(yǎng)特性和形態(tài)學(xué)基本上一致。

2.2 細菌生化試驗

參照革蘭氏陰性菌試劑盒說明書，4 種不同的病原特性與《伯杰細菌鑒定手冊》 報道的副豬嗜血桿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌及支氣管敗血波氏桿菌菌株生化特性基本一致。 結(jié)果如表1 可知，臨床中分離的4種病原菌的副豬嗜血桿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌及氣管敗血波氏桿菌檢測率分別為12.2% (40 株)、11.5% (39 株)、7.8% (26 株)、6.0%，(21 株)，其中副豬嗜血桿菌和豬胸膜肺炎放線桿菌檢出率較高。

表1 分離菌株統(tǒng)計結(jié)果

2.3 藥敏試驗

對分離的4 種菌株進行藥敏試驗并分析其耐藥性，結(jié)果見表2。 分離的副豬嗜血桿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌及支氣管敗血波氏桿菌均對頭孢噻呋、頭孢噻肟、氟苯尼考等7 種藥物敏感，對阿莫西林、氨芐西林、新霉素等7 種藥物耐藥。 說明臨床分離的副豬嗜血桿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌及支氣管敗血波氏桿菌對臨床中常用的藥物產(chǎn)生不同的耐藥性。

表2 藥敏試驗結(jié)果

3 討論

國內(nèi)外研究表明，豬的細菌性呼吸道疾病是養(yǎng)豬中常見的疾病之一，豬細菌性呼吸道疾病發(fā)病率在50% ～80%，尤其患呼吸道疾病對仔豬的危害比較大，且仔豬副豬嗜血桿菌病的感染率、死亡率均較高[4-7]。 當(dāng)豬抵抗力下降時，外界環(huán)境中細菌容易進入豬體內(nèi)，并在腸道中定植，改善養(yǎng)殖環(huán)境對減少疾病具有重要意義[10-12]。 本試驗研究表明，349 份病料中多殺性巴氏桿菌、副豬嗜血桿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血波氏桿菌等菌株的檢出率分別為7.8% (26 株)、12.2% (40 株)、11.5% (39 株)、21 株(6.0%)，說明該地區(qū)4 種病原菌是引起豬細菌性呼吸道疾病的主要病原。 本次分離的菌株對臨床中常用的藥物產(chǎn)生不同的耐藥性，臨床中分離得到副豬嗜血桿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌及支氣管敗血波氏桿菌對頭孢噻呋、頭孢噻肟、氟苯尼考等7 種藥物敏感，對阿莫西林、氨芐西林、新霉素等7 種藥物耐藥。 因此，在臨床治療豬細菌性呼吸道疾病時，應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果選擇敏感藥物交替使用。