定安母豬流產病原檢測

王 弘，黃承峰，張 艷，劉海隆*

(1. 海南省定安縣龍門農業服務中心，海南 定安 571226；2. 海南省農業科學院畜牧獸醫研究所，海南 海口 571100)

定安豬是海南省地方優良畜禽品種之一，主要產于海南省定安縣雷鳴、龍門、龍河等鎮，分布于全縣各地，目前是海南豬中群體規模最大的類群，飼養的群眾基礎好[1]，但其體型小、生長發育慢，當地一般利用定安母豬與杜洛克公豬雜交[2]，生產二元黑豬。 定安母豬經過長期的選育留種，非常適應當地自然條件和經濟條件，具有敏捷、覓食性強、耐粗飼、耐熱、抗逆性強、繁殖力較強等優點[3-4]，雖然如此，如果飼養條件太過于粗獷，飼養管理不當及疫病預防措施不到位的話，也經常會發生懷孕母豬產死胎及流產的現象，大幅降低了定安母豬的繁育利用水平。

引起妊娠母豬流產、產死胎的原因很多:除了產科性疾病、飼養管理不當、損傷性、藥物性等原因外，大部分感染性因素占主導地位。 比如，藍耳病、細小病毒病、日本乙型腦炎、豬衣原體病、豬瘟、鉤端螺旋體病、豬偽狂犬病等，這些都可能造成母豬流產、死胎[5-8]。 為了解定安母豬發生流產、死胎主要病因，筆者從當地32 個養殖場及養殖戶總共收集到267 例定安母豬無明顯臨床癥狀或輕微癥狀發生流產及產死胎的案例，開展了豬圓環病毒2 型(PCV2)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬細小病毒(PPV)、豬偽狂犬病病毒(PRV) 及豬乙型腦炎病毒(JEV) 5 種主要病毒性繁殖障礙疫病病原的檢測，并分析其病原感染情況，以期為有效防控定安母豬繁殖障礙疫病提供科學參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

定安母豬流產胎兒或流產未成形的組織排泄物，在2021 年11 月份至2022 年10 月份采自海南省定安縣32 個定安母豬養殖場及養殖戶。 樣品信息見表1。

表1 樣品采集信息表

1.2 主要儀器設備

全自動核酸提取儀(型號VNP -32P)，南京諾唯贊生物科技股份有限公司制造；全自動樣品快速研磨機(型號JXFSTPRP -32)，上海凈信實業發展有限公司制造；熒光定量PCR 儀(型號CFX-96 touch)，美國Bio-Rad 制造。

1.3 主要試劑

病毒 DNA/RNA 提取試劑盒 ( 批號20220120)，購自上海凡濟生物科技有限公司；反轉錄試劑購自大連寶生物工程有限公司；豬圓環病毒2 型 (PCV - 2) 核酸檢測試劑盒(熒光PCR 法，批號20220225)，上海帛科生物技術有限公司；豬藍耳病病毒通用型(PRRSV-U) 核酸檢測試劑盒(熒光PCR 法，批號20220310)，上海初態生物科技有限公司；豬細小病毒(PPV) 核酸檢測試劑盒(熒光PCR 法，批號20220120)，上海初態生物科技有限公司；豬偽狂犬病病毒檢測試劑盒(熒光PCR 法，批號20220320)，深圳子科生物技術有限公司；日本乙型腦炎病毒(JEV) 核酸檢測試劑盒(熒光PCR 法，批號20220408)，上海初態生物科技有限公司。 以上試劑盒均符合國家要求，其引物的設置也是根據國家標準、行業標準等標準要求設計的特異性引物和引物序列。

1.4 方法

現場采集母豬的流產排泄物或成形的胎兒，20 ℃保存，冷藏送至實驗室檢測。 將流產胎兒的臟器或母豬流產的組織樣品，加入一定比例的生理鹽水，在組織研磨器內充分研磨并保證漿液均勻，反復凍融3 次，4 ℃、12 000 r/min 離心5 min 后取上清，按照病毒基因組DNA/RNA 提取試劑盒使用說明書對樣品上清進行DNA/RNA 提取。 RNA 病毒反轉錄成cDNA，所獲得的DNA/cDNA 按照各種疾病的病原試劑盒使用說明直接進行熒光PCR 檢測。

2 結果與分析

2021 年11 月至2022 年10 月，在海南省定安縣32 個養殖場及養殖戶共采集到267 份定安母豬流產臨床病例，在不同的月份及母豬妊娠的不同階段流產發生率不同，見圖1、圖2。 經過實驗室檢測，最終有98 份病例樣品檢出了至少一種病原，病原的檢出率為36.70%(98/267) 。5 種病毒性繁殖障礙疫病病原的檢測結果見表2，其中有不少樣品中可以檢出2 種或2 種以上病原，5 種病原單獨感染和混合感染的情況中見圖3、圖4。

圖1 定安母豬不同月份流產病例分布

圖2 定安母豬不同妊娠階段流產病例分布

圖3 定安母豬5 種繁殖障礙疫病病原單一感染情況

圖4 定安母豬5 種繁殖障礙疫病病原混合感染情況

表2 5 種病毒性繁殖障礙疫病病原檢測結果

由表1 數據分析可得圖1、圖2，可知定安母豬流產病例樣品主要發生在海南氣溫相對較低、天氣冷熱變化較大的月份，2021 年11 月至2022 年3 月，共采集到169 例，占比63%(169/267)。 另外定安母豬懷孕2 個月以后，在妊娠后期發生流產的樣本占比77% (206/267)。

由表2 可知，定安母豬發生流產、死胎的病例5 種病毒性繁殖障礙疫病病原檢出率從高到低依次為 PRRSV ( 17.98%)、PCV2(11.61%)、JEV (9.74%)、PRV (6.37%)、PPV (4.49%)。

由圖3 可知，定安母豬5 種繁殖障礙疫病病原單一感染共65 例，占總感染數的66.33%(65/98)，占比最高的是PRRSV (20.41%，20/98)，其次分別是PCV2 (13.27%，13/98)、JEV (12.24%，12/98)、PRV (11.22%，11/98)、PPV (9.18%，9/98)。

由圖4 可知，定安母豬5 種繁殖障礙疫病病原混合感染共33 例，占總感染數的33.67%(33/98)。 混合感染情況以雙重病原感染較為常見，共30 例，占總感染數的30.61% (30/98)，其中以PRRSV ＋PCV2、PRRSV ＋JEV 感染病例較多，分別占總感染數的12.24%(12/98)、8.16% (8/98)。 多種病原混合感染情況僅發現3 例。

3 討論

妊娠母豬無癥狀或輕微臨床癥狀發生流產，不但減少了豬場產仔數，還會損害母豬健康，縮短利用年限，使養豬場生產成本加大，養殖效益降低[9]，而且很難分析病因、病情及做出正確的治療。 對此要采取何種預防措施?是否要及時淘汰母豬? 給養殖場及養殖戶帶來巨大困擾。 從樣本采集信息初步分析，定安母豬流產死胎病例絕大多數發生在海南當地氣溫相對較低、冷熱變化較大的11 月到次年的3月。 定安母豬妊娠后半階段(懷孕2 個月之后) 較前半階段更容易出現流產、死胎的情況，這可能是因為在妊娠的早期和中期流產的胚胎被吸收或者流產組織物被母豬采食掉而不易被察覺，在養殖過程也會被認為是配種不成功，最終會導致母豬出現不規律發情[10]，降低母豬利用率。

傳染性因素是引起母豬流產的主要原因，但是母豬流產病原的確診存在很大的困難，很多流產病例的致病原在流產發生時已不存在。本次病原檢測檢出率僅為36.70% (98/267)，說明剩余病例還有很多其他病原存在或者檢測不出任何病原及其他非傳染因素導致流產。

從樣品檢測的結果來看，采集的病例樣品PRRSV、PCV2、JEV、PRV、PPV 5 種主要病毒性繁殖障礙疫病病原以單一病原感染為主，說明各養殖場及養殖戶母豬免疫程序存在不合理或者免疫失敗的現象。 據報道規模化養豬場中，免疫失敗引起的疾病性流產是母豬流產的主要原因之一[11]。 混合感染情況以雙重感染較為常見，三重感染情況僅出現3 例，綜合分析PRRSV、PCV2、JEV 是目前引起定安母豬流產死胎的主要病毒性病原，提示養殖戶要做好母豬流產的記錄工作，注意觀察母豬產死胎的現象，及時送檢，確定母豬流產是否為傳染性流產還是非傳染性流產，按照科學的免疫流程做好免疫預防工作，將養殖場的衛生管理工作做到位，夏天減少蚊蟲滋擾，冬季做好保溫措施，減少母豬流產的發生率。

4 結論

本研究結果表明，定安母豬流產及死胎大部分發生在海南氣溫相對較低的月份及母豬妊娠后期。 PRRSV、PCV2、JEV、PRV、PPV 5種病原從高到低依次均有檢出，病原以單一感染為主，混合感染以雙重感染為主，多種病原感染少見。 PRRSV、PCV2、JEV 是目前引起定安母豬流產死胎的主要病毒性病原。