微小RNA-122、HOMA-IR 水平的表達與妊娠期糖尿病及妊娠結局的關系

崔利娜 姜得悅 辛雅萍

（鄭州大學第二附屬醫院內分泌科 河南鄭州 450014）

妊娠期糖尿病（Gestational Diabetes Mellitus,GDM）作為妊娠期最常見的并發癥之一，也是威脅母嬰生命安全的常見原因之一，易導致孕婦早產、畸形，甚至流產、難產。近年來GDM 發病率呈上升趨勢，給家庭和社會帶來沉重負擔。然而，除了一些研究表明妊娠期胰島素抵抗可能引發GDM 外，其發病機制仍未明確，但多數學者認為胰島素抵抗在GDM 的發生、發展中起著重要作用[1～2]。微小核糖核酸（miRNA）屬于內源性非編碼RNA，在自然界廣泛存在于真核生物中。作為一類非編碼微小RNA，miRNA 轉錄后其水平與許多疾病的病理生理過程密切相關。近些年，多項研究均發現，miRNA 與多種代謝性疾病如肥胖、多囊卵巢綜合征（Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS）及糖尿病的發生、發展有密切關系[3～5]。進一步研究發現，miRNA 是胰島素抵抗中必不可少的生物調節因子之一，許多miRNA已被證明是GDM 的有效診斷標志物。有研究表明miR-330-3p 在GDM 中表達上調，并與患者的胰島素抵抗有關，也有其他研究進一步探討了miRNA在GDM 中的作用。還有學者發現miR-494 可保護胰島β 細胞功能，通過靶向磷酸酶基因（PTEN）調控GDM，miR-409-5p 已被證明在多種腫瘤中作為癌基因發揮作用。有研究發現miR-409-5p 在乳腺癌中表達上調，抑制其表達可顯著抑制乳腺癌細胞的生長，也表明miR-409-5p 與糖尿病的發生有關。同時有研究證實miR-122 能夠在肝臟中高水平表達[6]，而肝臟又是糖脂代謝的核心，也是胰島素抵抗的關鍵位置。目前臨床已經有關于miR-122 與胰島素抵抗的報道，但尚存爭議。本研究旨在探討miR-122 表達水平、胰島素抵抗指數（HOMA-IR）與妊娠糖尿病及妊娠結局的關系，并分析miR-122 表達水平與HOMA-IR 的相關性。現報道如下：

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年4 月至2020 年10 月在我院診治的孕24～32 周GDM 孕婦52 例作為觀察組，另選取同期在我院產檢且口服葡萄糖耐量試驗（Oral Glucose Tolerance Test,OGTT）正常的孕24～32 周孕婦45 例作為對照組。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。本研究經醫院醫學倫理委員會審批（倫理號：2018012）。見表1。

表1 兩組一般資料比較（±s）

表1 兩組一般資料比較（±s）

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1.2 入組標準

1.2.1 納入標準 符合《妊娠合并糖尿病診治指南（2014）》中GDM 診斷標準[7]，妊娠24～28 周行75 g OGTT 檢查，空腹、口服葡萄糖后1 h、口服葡萄糖后2 h 的血糖閾值分別為5.1 mmol/L、10.0 mmol/L、8.5 mmol/L，任何一個時間點血糖值達到或超過上述閾值即診斷為GDM；年齡20～36 歲；孕24～35 周；單胎妊娠；自然受孕；簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準 妊娠前既有糖尿病者；入組前接受降糖藥物治療者；接受藥物治療或輔助生殖技術（ART）后妊娠者；同時合并有妊娠高血壓疾病、妊娠合并心臟病、先兆子癇等妊娠合并癥者；雙胎或多胎妊娠者；PCOS 者；合并有血液系統疾病、全身感染性疾病、自身免疫性疾病及內分泌系統其他疾病者；入組前2 周內有糖皮質激素使用史者；肝、腎等重要臟器功能不全者。

1.3 測定方法

1.3.1 糖代謝及HOMA-IR 測定 治療前，抽取患者靜脈血約5 ml，其中2 ml 離心分離血清，采用全自動生化分析儀（美國Beckman Coulter 公司，型號：AU5800）檢測血清空腹血糖（Fasting Blood Glucos,FBG）、空腹血漿胰島素（Insulin, INS） 水平，HOMA-IR=FBG×INS/22.5。

1.3.2 miR-122 表達水平測定[8]血清miR-122：剩余3 ml 血液樣本進行核糖核酸（RNA）提取和純化，所有操作按照miRcute miR-NA 提取分離試劑盒說明進行；胎盤組織中miR-122：分娩后將胎盤迅速用生理鹽水反復沖洗干凈，切除適當大小的胎盤組織塊（約4 mm×4 mm×4 mm）經液氮速凍處理，冰箱-80℃保存，使用RNAiso Plus 試劑提取胎盤組織中總RNA。使用逆轉錄試劑盒（miRcute Plus miRNA First-Strand cDNA）將RNA 逆轉錄成cDNA，引物序列見表2。采用實時熒光定量PCR 儀檢測miR-122表達水平，內容如下，反應體系：cDNA 4 μl，上、下游引物（10 μmol/L）各0.4 μl，SYBR Green Master Mix 10 μl，50×ROX Reference Dye 20.4 μl，H2O 4.8 μl。反應條件：95℃5 min，95℃30 s，94℃30 s，60℃20 s，共40 個循環。將每個cDNA 平均檢測3 次，取平均值得循環閾值。采用2-△△CT法分析miR-122 的相對表達水平。

表2 引物序列

1.4 臨床干預方案及控制標準 所有患者進行飲食、運動等干預，必要時給予胰島素進行降血糖治療。定期在院產前門診進行產前檢查及隨訪，門診進行降低血糖相關干預，指導患者每天監測血糖水平，連續進行3 d 的血糖檢測，空腹血糖（FBG）水平＜5.6mmol/L、餐后2 h 血糖＜6.7 mmol/L、糖化血紅蛋白（HbA1c）≤6.5%，為患者血糖控制有效。

1.5 觀察指標 （1）比較兩組糖代謝指標水平、HOMA-IR 及血清和胎盤中miR-122 水平；（2）比較結局良好組和不良結局組上述指標；（3） 分析miR-122 水平與HOMA-IR 的相關性。

1.6 統計學分析 采用SPSS20.0 統計學軟件分析處理數據，計量資料以（±s）表示，組間比較采用獨立t檢驗；miR-122 水平與HOMA-IR 的相關性分析采用Pearson 相關分析。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組糖代謝指標及HOMA-IR 比較 觀察組FBG、INS 水平及HOMA-IR 均高于對照組（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組糖代謝指標及HOMA-IR 比較（±s）

表3 兩組糖代謝指標及HOMA-IR 比較（±s）

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2.2 兩組血清及胎盤miR-122 水平比較 觀察組血清及胎盤miR-122 水平均高于對照組（P＜0.05）。見表4、圖1 和圖2。

圖1 兩組患者血清miR-122 表達水平

圖2 兩組患者胎盤miR-122 表達水平

表4 兩組血清及胎盤miR-122 水平比較（±s）

表4 兩組血清及胎盤miR-122 水平比較（±s）

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2.3 不同妊娠結局GDM 患者miR-122 水平及HOMA-IR 比較 根據GDM 患者妊娠結局，將52例GDM 患者分為結局良好組34 例和不良結局組18 例，若出現流產、早產、巨大兒、死胎、死產、胎兒畸形、新生兒呼吸窘迫綜合征及新生兒死亡等任一情況均歸為不良結局組。結果顯示，不良結局組HOMA-IR 及血清和胎盤miR-122 水平均高于結局良好組（P＜0.05）。見表5。

表5 不同妊娠結局GDM 患者miR-122 水平及HOMA-IR 比較（±s）

表5 不同妊娠結局GDM 患者miR-122 水平及HOMA-IR 比較（±s）

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2.4 miR-122 水平與HOMA-IR 的相關性 經Pearson 相關分析結果顯示，GDM 患者血清及胎盤miR-122 水平均與HOMA-IR 呈正相關（P＜0.05）。見表6。

表6 miR-122 水平與HOMA-IR 的相關性

3 討論

GDM 被認為是妊娠期嚴重的糖耐量異常。近年來，越來越多的產婦被診斷為GDM，已成為常見的公共衛生問題。對于許多患者來說，診治不及時必然會給母體和胎兒帶來嚴重的不良影響。多項研究[9～11]均認為，GDM 的發生與妊娠后胰島β 細胞分泌胰島素功能相對不足及胰島素抵抗有關。妊娠后孕婦通常會進補大量的營養物質，超過母嬰需求后，就會造成體內糖脂代謝出現異常，正常情況下可通過增加胰島素分泌來分解多余的葡萄糖，但若胰島β 細胞分泌胰島素功能下降或伴有胰島素抵抗時，則可導致糖代謝異常，進而誘發GDM 的發生[12]。本研究結果顯示，觀察組FBG、INS 水平及HOMA-IR 均高于對照組，提示GDM 患者機體糖代謝紊亂，胰島素分泌減少，HOMA-IR 增加，有研究指出產生這種變化的原因或許與糖代謝的靶器官對胰島素的敏感性下降有關[13]。

miRNA 屬于非編碼單鏈RNA，與靶基因mRNA3'端的非編碼區結合后可調控基因的表達，與多種代謝性疾病的發生、發展有關，多項研究均顯示，miRNAs 在包括糖尿病在內的許多疾病的發生和發展中起著至關重要的作用[14～16]。miRNA 也可由胎盤分泌，進入機體血液循環后，通過調控糖脂代謝過程參與胰島素抵抗及GDM 等的發生[17]。王雪梅等的一項研究發現，miR-200a 及miR-34a 在GDM患者體內呈高水平表達，并指出其或許是通過調控胰島素相關調控基因的表達來引起血糖變化，進而導致GDM 的發生[18]。張婧怡等研究發現，miR-101在GDM 患者胎盤中表達水平異常升高，并指出其或許是通過調控EZH2-H3K27me3 途徑，降低了胎盤滋養細胞增殖、遷移的能力，進而導致GDM 的發生[19]。miR-122 是miRNA 的一種類型，前體基因位于18q21.31 位點，其表達水平與機體糖脂代謝有關，目前已經證實miR-122 可調控胰島素抵抗、脂肪細胞分化等多種生物學過程[20]。觀察組血清及胎盤miR-122 水平均高于對照組，提示miR-122 在GDM患者體內呈高水平表達，且其高水平表達與胰島素抵抗有關。可能是miR-122 作為肝臟富含的特異性RNA，可以有效激活固醇調節元件結合蛋白-1c 以及二酯酰甘油酰基轉移酶-2 等，進而直接參與早期的肝臟代謝。肝臟早期代謝的異常改變能夠誘發胰島素抵抗、糖尿病等。還有研究報道利用軟脂酸誘導胰島素抵抗模型，結果發現在胰島素抵抗狀態下，miR-122 的表達明顯上調，并指出miR-122 參與胰島素抵抗的調控或許與下調AMPK 基因表達有關[21]。

GDM 孕婦不良妊娠結局如流產、早產、巨大兒、死胎、死產、胎兒畸形、新生兒呼吸窘迫綜合征及新生兒死亡等發生率明顯增加[22]。本研究依據GDM患者妊娠結局將其分為結局良好組和不良結局組，結果顯示，不良結局組患者HOMA-IR 及血清和胎盤miR-122 水平均高于結局良好組，提示miR-122或許參與了GDM 疾病的發生、發展，并可影響患者妊娠結局，這一結果與禤文婷等研究結果一致[8]。

綜上所述，GDM 患者伴有明顯的胰島素抵抗，miR-122 在GDM 患者體內呈高水平表達，這可能是GMD 臨床診斷和治療GMD 的潛在靶點。然而，本研究也有一些不足之處，比如研究缺乏體內和體外相關基礎實驗來支持研究結論。