Th17和Treg細(xì)胞在高危型HPV感染患者血清中的表達(dá)與miR-155表達(dá)的相關(guān)性

史紅霞 陳慧玲 楊海蓉

甘肅省敦煌市醫(yī)院婦產(chǎn)科 736200

臨床上比較常見,在部分地區(qū)宮頸癌的發(fā)病率位居第一,嚴(yán)重影響女性的身心健康。宮頸癌具有發(fā)現(xiàn)晚、死亡率高等特點(diǎn),且發(fā)病年齡群越來越年輕化[1]。宮頸癌的發(fā)生與人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)的感染有一定的相關(guān)性,特別是高危型HPV感染[2],但同時(shí)也會受病毒DNA存在形式、性激素水平、宿主免疫狀態(tài)等多種因素的影響[3]。當(dāng)前研究表明T輔助性細(xì)胞(Th)與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)在PsA的免疫學(xué)反應(yīng)通路中發(fā)揮著重要的作用,Treg細(xì)胞通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡而清除效應(yīng)細(xì)胞,阻止自身反應(yīng)性T細(xì)胞的過度激活,從而阻止損傷性免疫病理的發(fā)生[4];特別是Treg細(xì)胞數(shù)量缺乏或Treg細(xì)胞功能紊亂,都會誘發(fā)各種疾病的發(fā)生[5]。Th17是近段時(shí)間發(fā)現(xiàn)的新型T輔助性細(xì)胞亞群,其數(shù)量和功能的改變與惡性腫瘤的發(fā)生存在相關(guān)性[6]。miRNA能針對性的抑制目的基因的表達(dá),從而,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞遷移等[7]。miR-155在多種惡性腫瘤中起調(diào)控作用,miR-155過度表達(dá)可促進(jìn)惡性腫瘤中細(xì)胞的增殖[8]。本文具體探討了Th17和Treg細(xì)胞在高危型HPV感染患者血清中的表達(dá)與miR-155表達(dá)的相關(guān)性,希望有助于闡明高危型HPV感染發(fā)生的機(jī)制,總結(jié)報(bào)道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2018年2月—2022年1月在我院診治的高危型HPV感染患者110例作為病例組。納入標(biāo)準(zhǔn):單一高危型HPV(16、18型)感染者;入院前3個月未使用過免疫增強(qiáng)劑者;無放療和化療病史。排除標(biāo)準(zhǔn):合并呼吸道傳染性疾病者;常規(guī)檢查無其他器質(zhì)性病變;無急性生殖道炎癥;妊娠與哺乳期的婦女。選擇同期在我院健康體檢的女性110例作為對照組。研究得到了醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)。兩組一般資料對比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),具有可比性,見表1。在病例組中,CINⅠ級45例,CINⅡ級35例,CINⅢ級20例,宮頸癌10例。

表1 兩組一般資料對比

1.2 Th17和Treg細(xì)胞測定 采集所有患者的空腹靜脈血3～5ml,采樣時(shí)把血樣分為兩管。第一管放置于肝素鈉抗凝管中,2 000r/min離心10min,取下層全血組織。在陰性對照管、陽性試驗(yàn)管、同型對照管中加樣50μl,然后加入對照抗體2.5μl,然后在陽性試驗(yàn)管中加入相應(yīng)的抗體2.5μl,避光孵育15min左右。加入800μl紅細(xì)胞裂解液,避光孵育3min左右;加入1 000μl的磷酸鹽緩沖液,采用流式細(xì)胞儀(美國BD公司)上機(jī)進(jìn)行檢測Th17和Treg細(xì)胞比例。

1.3 miR-155表達(dá)檢測 取1.2中的另一管血液樣本,不抗凝,2 000r/min離心10min,取上層血清,提取核酸。以U6做內(nèi)參基因,采用qPCR技術(shù)檢測miR-155相對表達(dá)水平。miR-155引物:正向(5’-TTAATGCTAATCGTGA-TAG-3’)和反向(5’-ACATCCAGTGTAGCATA-3’)。qPCR試劑盒購自深圳晶美公司,嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。上述實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個平行,取每次測試的平均值。

2 結(jié)果

2.1 兩組Th17和Treg細(xì)胞比例對比 病例組的Th17和Treg細(xì)胞比例都高于對照組,對比有顯著差異(P<0.05)。見表2。

表2 兩組Th17和Treg細(xì)胞比例對比

2.2 miR-155相對表達(dá)水平 病例組的miR-155相對表達(dá)水平為15.83±0.42,顯著高于對照組的3.09±0.33(t=18.335,P=0.000<0.05)。

2.3 相關(guān)性分析 在病例組中,直線相關(guān)分析顯示Th17和Treg細(xì)胞比例、miR-155相對表達(dá)水平與高危型HPV感染發(fā)生存在相關(guān)性(P<0.05)。見表3。

表3 Th17和Treg細(xì)胞在高危型HPV感染患者血清中的表達(dá)與miR-155相關(guān)性(n=110)

2.4 影響因素分析 以高危型HPV感染作為因變量,以Th17和Treg細(xì)胞比例、miR-155相對表達(dá)水平作為自變量,Logistic回歸分析顯示Th17和Treg細(xì)胞比例、miR-155相對表達(dá)水平都為導(dǎo)致高危型HPV感染發(fā)生的主要影響因素(P<0.05)。見表4。

表4 高危型HPV感染發(fā)生的多因素分析(n=110)

3 討論

當(dāng)前基礎(chǔ)研究與臨床研究已經(jīng)明確HPV感染是宮頸癌的主要致病原因之一,但是機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸也是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的重要因素[9]。Th17細(xì)胞是不同于傳統(tǒng)CD4+T細(xì)胞分類的一種Th細(xì)胞亞群,主要分泌白細(xì)胞介素(IL)-17A、和IL-22、IL-17F、IL-21等。有研究表明Th17細(xì)胞可在IL-6、轉(zhuǎn)移生長因子(TGF)-β的協(xié)同誘導(dǎo)下,大量誘發(fā)表達(dá)IL-23。IL-17也能刺激成纖維母細(xì)胞黏附分子(ICAM)-1 的表達(dá),并可誘導(dǎo)機(jī)體多種細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-6、IL-8等,引起局部炎癥的發(fā)生,導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生。Treg細(xì)胞在正常情況下的主要作用是維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài), 從而調(diào)節(jié)惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[10]。叉頭蛋白(Foxp3+)是Treg細(xì)胞的特征性轉(zhuǎn)錄因子,表型特征主要為CD4+CD25+Foxp3+。Treg細(xì)胞表達(dá)也可特異性誘導(dǎo)IL-10和TGF-β表達(dá),抑制過度免疫效應(yīng)[11]。本研究結(jié)果顯示,病例組的Th17和Treg細(xì)胞比例都高于對照組(P<0.05),表明高危型HPV感染患者伴隨高比例的Th17和Treg細(xì)胞。

miR-155在惡性腫瘤的發(fā)生中起著促進(jìn)炎癥浸潤、參與免疫反應(yīng)、調(diào)節(jié)自噬等多種作用,研究表明miR-155抑制通過socs1/nf-κb途徑促進(jìn)巨噬細(xì)胞炎癥,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖[12-13]。本研究結(jié)果顯示,病例組的miR-155相對表達(dá)水平顯著高于對照組(P<0.05),表明高危型HPV感染患者伴隨有miR-155的高表達(dá)。當(dāng)前也有研究顯示miR-155可以改變β受體溶解酶的活性,活化炎性介質(zhì),還能引發(fā)白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生炎性反應(yīng),從而調(diào)控疾病的發(fā)生與發(fā)展[14]。

Th17細(xì)胞可參與惡性腫瘤的發(fā)病,Th17細(xì)胞水平增加引起Th1細(xì)胞向Th2細(xì)胞的漂移,導(dǎo)致分泌IL-10和TGF-β增多,從而導(dǎo)致炎癥因子的大量釋放。在免疫反應(yīng)中,Treg功能與效應(yīng)性細(xì)胞功能之間的平衡對免疫反應(yīng)的維持有重要作用,Treg細(xì)胞與IFN-γ及IL-4存在不同程度的相關(guān)性[15]。本研究直線相關(guān)分析顯示高危型HPV感染患者的Th17和Treg細(xì)胞比例、miR-155相對表達(dá)水平與高危型HPV感染發(fā)生存在相關(guān)性(P<0.05);Logistic回歸分析顯示,Th17和Treg細(xì)胞比例、miR-155相對表達(dá)水平都為導(dǎo)致高危型HPV感染發(fā)生的主要影響因素(P<0.05)。由此推測在高危型HPV感染發(fā)展過程中,Th17和Treg細(xì)胞比例增多,導(dǎo)致其免疫抑制功能增強(qiáng),可促進(jìn)miR-155的高表達(dá),從而為腫瘤的發(fā)生發(fā)展提供逃避免疫攻擊的優(yōu)勢環(huán)境[16]。不過本研究也存在一定的不足,沒有分析其他高危因素對高危型HPV感染發(fā)生的影響,將在后續(xù)研究中分析研究。

總之,高危型HPV感染患者伴隨有高比例的Th17和Treg細(xì)胞,也伴隨有miR-155的高表達(dá),兩者存在相關(guān)性。