黔產油麻血藤飲片質量標準研究

萬力華,楊從武,鄒大維,譚霖

(黔東南州食品藥品檢驗檢測中心,貴州 凱里 556011)

油麻血藤Caultsmucunaesempervirentis飲片是貴州省苗族、侗族等習用中藥飲片。取原藥材(常春油麻藤MucunasempervirensHemsl.的干燥藤莖),凈制,浸潤,切片,曬干,篩去灰屑或取片狀藥材,除去雜質,加工炮制即得。在貴州分布于黔東南州、黔西南州和黔南州等地。其性味甘、微苦、溫,具有活血調經,補血舒筋等功效。用于月經不調、痛經、閉經、產后血虛、風濕痹痛、四肢麻木、跌撲損傷[1]。成分指標為:脂肪酸占1%～10%[2]、總黃酮類占12.43%[3]、酚類、蛋白質[4]、七個成分一致的揮發油(比較主要的包括3-辛醇、β-紫羅蘭酮等)[5]。我省《貴州省中藥材質量標準》2003版[1]收錄其藥材質量標準,而《貴州省中藥飲片炮制規范》1986年版未對其收錄,為控制油麻血藤飲片質量,本試驗對10批次油麻血藤飲片性狀鑒定;橫切面、粉末顯微特征進行鑒定;TLC對照藥材定性鑒定;參照《中國藥典》測定水分、總灰分、浸出物含量;UV測定總黃酮含量研究,為黔產油麻血藤飲片質量控制提供依據。

1 材料與儀器。

1.1 藥材

10批樣品收集于黔東南凱里、黔西南興義等地,經黔東南苗族侗族自治州食品藥品檢驗檢測中心譚霖副主任藥師鑒定,為油麻血藤Caults mucunae sempervirentis飲片,飲片信息見表1。

表1 10批飲片收集信息

1.2 儀器

紫外光度計UV-2600;萊卡DM500顯微鏡和LAS V3.8顯像系統;5L-DK-98-ⅡA型數控電熱恒溫水浴鍋單列六;DYF-500搖擺式高速中藥粉粹機;XPE205型萬分之一電子天平(梅特勒);玻璃儀器;SK8200HP—型數控超聲波清洗器(500 W;53 kHz);鼓風烘箱。

1.3 材料

蘆丁(中檢院;92.4%;10080-201811;供UV含量測定用),硅膠G板(青島勝海20170811);甲醇(川東化工試劑公司,AR),氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁,乙酸乙酯(川東化工試劑公司,AR),石油醚(60～90)、環己烷、甲酸等購自國藥集團化學試劑公司,均為AR。

2 方法與結果

2.1 性狀鑒定

本品為橢圓形、長矩圓形或不規則的厚片(斜切片),厚0.2～2.0 cm。表面極粗糙灰褐色至棕褐色,具橫向疣狀凸起皮孔。切面韌皮部具黑褐色樹脂狀分泌物,灰黃色木質部,孔洞狀導管,放射狀整齊排列,韌皮部與木質部相間排列呈數層同心性環,具不規則分布裂隙,髓部細小[1]。質堅韌,氣微,味微澀而甜[1]。見圖1。

圖1 油麻血藤飲片性狀圖

2.2 橫切面鑒定

木栓層由數列木栓細胞組成,含晶厚壁細胞在栓內層排列整齊,褐色或棕色物質多見,石細胞散在[1]。中柱鞘為石細胞和纖維組成的厚壁細胞環帶,含草酸鈣方晶并形成晶鞘[1]。維管系統異型,由多數維管束排列成數輪同心性環。韌皮射線寬至10 余列細胞;分泌細胞2～11 個相聚成切向條狀,層狀排列,韌皮纖維束多分布于韌皮部周圍,形成纖維束鞘。形成層不明顯[1]。木射線由非木化薄壁細胞組成,寬至10余列細胞;導管形大,多單個散在,纖維束為晶纖維,多分布于導管周圍,少數散在于薄壁組織中[1]。髓由大型薄壁細胞組成,紋孔明顯,環髓有少數分泌細胞及草酸鈣方晶[1],見圖2。

1.木栓層;2.皮層;3.石細胞群;4.中柱鞘;5.分泌細胞;6.韌皮射線;7.韌皮部;8.木質部;9.木質射線;10.導管;11.髓。圖2 橫切面顯微鑒定圖(10×10倍)

2.3 粉末鑒定

粉末為灰棕色。石細胞淡黃色或黃棕色,呈類圓形、類方形或類三角形,直徑15～75 μm,層紋、孔溝明顯,散在或成群。纖維成束或散在,直徑7～20 μm,孔溝及胞腔明顯,表面具斜紋理。草酸鈣方晶多見,散在。晶纖維較多,成束,周圍薄壁細胞中含多數草酸鈣方晶。棕紅色或棕黃色不規則塊狀分泌物多見。導管較大,多破碎,無色或黃棕色,為具緣紋孔導管。木栓細胞棕黃色至棕紅色,多角形或類方形,排列緊密。見圖3。

A.石細胞;B.草酸鈣方晶;C.晶鞘纖維;D.木質纖維;E.木栓細胞;F.導管;G.棕色塊。圖3 粉末顯微鑒定圖(10×40倍)

2.4 薄層鑒定

取樣品粉末約2.0 g,加乙醇40 mL,超聲30 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加水10 mL溶解,用乙酸乙酯10 mL提取,揮干乙酸乙酯,殘渣加甲醇1 mL溶解,即得。同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2020版四部 通則0502)試驗[6],取樣品溶液5 μL、對照藥材溶液5 μL,點于硅膠G薄層板上,在石油醚(60～90)-環己烷-乙酸乙酯-甲酸(體積比6∶3∶1∶0.2)體系中展開,取出,揮干,1%香草醛硫酸溶液,105 ℃下顯色,見圖4。

1.對照藥材;2.S1飲片;3.S2飲片;4.S3飲片;5.S4飲片;6.S5飲片;7.S6飲片;8.S7飲片;9.S8飲片;10.S9飲片;11.S10飲片。圖4 樣品及對照藥材TLC色譜圖

2.5 水分檢查

依照《中國藥典》2020版第四部 通則0832水分測定法(第二法 烘干法)[6],分別取10批飲片樣品測定水分。其值7.3%～9.0%,均值為8.1%,見表2。

表2 10批次飲片水分測定結果(n=2)

2.6 總灰分檢查

依照《中國藥典》2020版第四部 通則2302[6],分別取10批次飲片樣品測定總灰分。其值5.5%～7.3%,均值為6.4%,見表3。

表3 10批次飲片總灰分測定結果(n=2)

2.7 浸出物檢查

用水作溶劑,按《中國藥典》2020版第四部 通則2201熱浸法[6],取10批次飲片樣品測定,以干燥品計算浸出物的含量,其值19.0%～22.1%,均值為20.4%,見表4。

表4 10批次飲片樣品浸出物測結果

2.8 含量測定

2.8.1 標準溶液的制備

精密稱取標準物質11.75 mg(蘆丁),用85%甲醇適量,超聲充分溶解為217.14 μg/mL標準溶液。

2.8.2 標準曲線的制備

量取2.6.1項下溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0 mL,各置25 mL量瓶中,各加水至6 mL,加5%亞硝酸鈉溶液1 mL,搖勻,放置6 min[7],加10%硝酸鋁溶液1 mL,搖勻,放置6 min[10],加氫氧化鈉試液10 mL,再加水至刻度,搖勻,放置15 min[7],即得。立即在 510 nm 處測定各個溶液的吸光度,繪制標準曲線[8]。其回歸方程為Y=0.013 794 4X-0.019 471 4,r=0.999 65,在測定濃度為8.685 6～52.113 6 μg/mL范圍內線性關系良好,可以進行定量分析[12]。

2.8.3 樣品溶液的配制

精密稱取粉末約0.25 g,置具塞錐形瓶,加85%甲醇 100 mL,稱重,超聲30 min,冷卻再稱重,用85%甲醇進行補重,搖均勻之后進行過濾操作,取續濾液 5.00 mL置 25 mL 量瓶中,照2.7.2項下方法,從“加水至6 mL”起依法操作,并測定吸光度,從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁濃度[9]。

2.8.4 樣品含量測定

精密稱取10批次飲片樣品粉末各2份,照2.7.3項下依法操作,計算總黃酮量,10批飲片樣品總黃酮測定結果6.2%～9.2%,平均值為8.0%,見表5。

表5 10批次飲片樣品總黃酮含量測定結果

3 討論

3.1 水分限度值的確定

10批飲片樣品測定水分,其值7.3%～9.0%,均值為8.1%,上浮20%,限度值為不得過10.0%。

3.2 總灰分限度值的確定

10批次飲片樣品測定總灰分,其值5.5%～7.3%,均值為6.4%,上浮20%,限度值為不得過8.0%。

3.3 浸出物限度值的確定

10批次飲片樣品測定,以干燥品計算浸出物的含量,其值19.0%～22.1%,均值為20.4%,下浮20%,限度值為不得低于16.0%。

3.4 含量測定總黃酮限度值的確定

10批飲片樣品總黃酮測定結果6.2%～9.2%,均值為8.0%,下否20%,限度值為不得低于6.0%。

4 總結

通過對10批次油麻血藤飲片鑒別、檢查和含量測定研究,可為黔產油麻血藤飲片質量控制提供科學依據,本方法可行性強,為貴州省地方中藥飲片質量標準提供參考。