端粒酶卡扎爾體蛋白1 和PIN2/TERF1 相互作用端粒酶抑制劑1在乳腺浸潤性導管癌患者中的表達及臨床意義△

楊海林，李炯，吳慧，肖琪，何麗，李斕，周洪亮，王琦#

重慶市渝北區人民醫院1胸外甲乳外科，2病理科，重慶 401120

乳腺癌是世界上最常見的一種惡性腫瘤，全球癌癥統計數據顯示，2020 年世界范圍內約有226 萬乳腺癌新增病例，乳腺癌是全世界女性惡性腫瘤死亡的主要原因[1]。通過對某些生物標志物如激素受體、人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）狀態及Ki-67 表達情況進行分析，可以對乳腺癌進行分型，分型的差異決定了治療方案的不同。端粒酶卡扎爾體蛋白1（telomerase cajal body protein 1，TCAB1）是新發現的端粒酶核心蛋白組分，研究證實，TCAB1 與腫瘤的發生發展及預后密切相關，在宮頸癌、結直腸癌中均異常高表達[2-3]，抑制TCAB1 的表達可誘導細胞衰老[4]。PIN2/TERF1 相互作用端粒酶抑制劑1（PIN2/TERF1 interacting telomerase inhibitor 1，PINX1）是近年來發現的一種與端粒酶關系密切的核仁蛋白，通過抑制端粒酶催化亞基人端粒酶逆轉錄酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）的活性抑制端粒酶活性[5]。研究顯示，PINX1 在口腔鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、結直腸癌中低表達，可作為腫瘤的預后預測因子，且可抑制腫瘤細胞的增殖和轉移[6-8]。本研究探討TCAB1 和PINX1 在乳腺浸潤性導管癌患者中的表達及臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017 年1 月至2022 年1 月重慶市渝北區人民醫院收治的乳腺浸潤性導管癌患者的病歷資料。納入標準：①病理切片進行常規蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，由兩名病理科醫師閱片后確診為乳腺浸潤性導管癌；②術前未進行放化療或其他治療；③臨床資料完整。排除標準：①合并其他原發性惡性腫瘤；②哺乳期或妊娠期女性。依據納入和排除標準，本研究共納入45 例乳腺浸潤性導管癌患者，年齡≤40 歲7 例，﹥40 歲38 例；無淋巴結轉移24 例，有淋巴結轉移21 例；組織學分級：Ⅱ級23 例，Ⅲ級22 例；未絕經15 例，絕經30 例；非三陰性乳腺癌39 例，三陰性乳腺癌6例。另選取重慶市渝北區人民醫院同期收治的45例乳腺纖維腺瘤患者，年齡≤40 歲7 例，﹥40 歲38例；未絕經15 例，絕經30 例。乳腺浸潤性導管癌患者和乳腺纖維腺瘤患者的年齡和絕經情況比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05），具有可比性。收集乳腺浸潤性導管癌組織45 例和乳腺纖維腺瘤組織45 例。本研究經醫院倫理委員會審批通過，所有患者均知情同意。

1.2 檢測方法

采用免疫組化染色法檢測TCAB1 和PINX1 表達情況，TCAB1 和PINX1 抗體均購自美國Abcam公司。操作步驟：①取經福爾馬林固定、石蠟包埋的組織，制備成3～4 μm 的病理切片；②二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化；③3%過氧化氫處理，阻斷內源性過氧化物酶；④應用檸檬酸緩沖液對組織抗原進行修復；⑤滴加抗體，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木精復染，封片后在顯微鏡下觀察。

1.3 判定標準

在染色均勻的區域隨機選取5 個高倍視野，由兩名病理科醫師采用雙盲法進行判定。根據陽性細胞比例及染色強度進行評分。染色強度評分：無色為0 分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。陽性細胞比例評分：≤5%為0 分，6%～25%為1 分，26%～50%為2 分，51%～75%為3 分，﹥75%為4 分。染色強度評分與陽性細胞比例評分相乘，≤6 分為低表達，﹥6 分為高表達。

1.4 觀察指標

比較乳腺浸潤性導管癌組織與乳腺纖維腺瘤組織中TCAB1 和PINX1 表達情況；比較不同臨床特征乳腺浸潤性導管癌患者乳腺浸潤性導管癌組織中TCAB1 和PINX1 表達情況；分析乳腺浸潤性導管癌組織中TCAB1 與PINX1 表達的相關性。

1.5 統計學分析

采用SPSS 25.0 軟件對數據進行統計分析，計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Spearman 相關分析法進行相關性分析。以P﹤0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺浸潤性導管癌組織與乳腺纖維腺瘤組織中TCAB1 和PINX1 表達情況的比較

免疫組化染色結果顯示，TCAB1 和PINX1 主要定位于細胞核中（圖1）。乳腺浸潤性導管癌組織中TCAB1 高表達率明顯高于乳腺纖維腺瘤組織，PINX1 高表達率明顯低于乳腺纖維腺瘤組織，差異均有統計學意義（P﹤0.01）（表1）。

表1 乳腺浸潤性導管癌組織和乳腺纖維腺瘤組織中TCAB1 和PINX1 表達情況的比較[n（%）]

圖1 乳腺纖維腺瘤組織與乳腺浸潤性導管癌組織中TCAB1和PINX1的表達情況（免疫組化染色，×200）

2.2 不同臨床特征乳腺浸潤性導管癌患者乳腺浸潤性導管癌組織中TCAB1和PINX1表達情況的比較

不同年齡、淋巴結轉移情況、組織學分級、腫瘤直徑、月經狀態、乳腺癌分型的乳腺浸潤性導管癌患者乳腺浸潤性導管癌組織中TCAB1 表達情況比較，差異均無統計學意義（χ2=0.943、0.002、0.180、0.916、0.189、0.045，P﹥0.05）。不同年齡、腫瘤直徑、月經狀態、乳腺癌分型的乳腺浸潤性導管癌患者乳腺浸潤性導管癌組織中PINX1 表達情況比較，差異均無統計學意義（χ2=1.322、2.163、2.205、0.022，P﹥0.05）；無淋巴結轉移、組織學分級為Ⅱ級的乳腺浸潤性導管癌患者乳腺浸潤性導管癌組織中PINX1 高表達率分別明顯高于淋巴結轉移、組織學分級為Ⅲ級的患者，差異均有統計學意義（χ2=14.504、8.222，P﹤0.01）。（表2）

2.3 TCAB1 與PINX1 表達的相關性

Spearman 相關分析結果顯示，乳腺浸潤性導管癌組織中TCAB1 與PINX1 的表達呈負相關（r=-0.328，P=0.028）。

3 討論

目前臨床常根據雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、HER2 狀態及Ki-67 表達情況對乳腺癌進行分型，分型的不同決定了治療方案的不同。本研究分析端粒酶相關指標TCAB1 和PINX1 在乳腺浸潤性導管癌患者中的表達及臨床意義。端粒酶的激活是細胞惡變的必備條件，它是一種在細胞中負責端粒延長的核糖核蛋白酶，為端粒DNA 延長提供RNA 模板序列[9-10]。端粒酶能夠延長已縮短的端粒，導致細胞處于無限增殖狀態[11]，TCAB1 在人類腫瘤細胞的端粒合成中起著至關重要的作用，能夠將端粒酶直接運輸到端粒上，促進端粒伸長，從而導致細胞增殖，并增加腫瘤細胞的侵襲能力[12-13]。研究表明，TCAB1 在宮頸癌、結直腸癌中高表達，抑制TCAB1 的表達可以抑制腫瘤細胞的形成和生長[2-3]。但TCAB1 在乳腺癌中的研究較少且無明顯的臨床意義。本研究結果顯示，乳腺浸潤性導管癌組織中TCAB1 高表達率明顯高于乳腺纖維腺瘤組織，提示TCAB1可能作為乳腺浸潤性導管癌的致癌基因，但能否作為乳腺浸潤性導管癌患者預后的影響因素還需后續隨訪驗證。

PINX1位于染色體8p23 區域，該區域在人類惡性腫瘤中經常缺失。Ho 等[5]研究顯示，PINX1 可抑制端粒酶的活性，縮短端粒。但關于PINX1 在惡性腫瘤中的臨床意義仍存在爭議。有研究表明，PINX1 表達下調與非小細胞肺癌、結直腸癌、前列腺癌患者的預后不良密切相關[14-16]。但是在一些惡性腫瘤如腦膠質瘤、食管鱗狀細胞癌和甲狀腺癌中，PINX1 被認為是一種腫瘤促進因子，其高表達與腫瘤患者的預后不良相關[17-19]。關于PINX1在乳腺癌中的研究報道較少，Feng 等[20]研究顯示，PINX1 低表達預示基底細胞樣乳腺癌惡性程度更高，其表達情況與乳腺癌的組織學分級密切相關。本研究結果顯示，乳腺浸潤性導管癌組織中PINX1 高表達率明顯低于乳腺纖維腺瘤組織，且乳腺浸潤性導管癌組織中PINX1 表達與淋巴結轉移情況和組織學分級密切相關，PINX1 低表達更多見于淋巴結轉移和組織學分級為Ⅲ級的患者，這意味著PINX1 低表達可能與乳腺癌患者預后不良相關，但還需要擴大樣本量及長期隨訪進一步研究。

本研究通過Spearman 相關性分析發現，乳腺浸潤性導管癌患者中TCAB1 與PINX1 的表達呈負相關，它們之間可能存在某種通路誘導二者相互作用。Mahmoudi 等[13]研究顯示，TCAB1 能夠促進腫瘤細胞存活，并在多種腫瘤細胞中過表達，而TCAB1 表達下調可以通過線粒體途徑誘導腫瘤細胞凋亡。鄧璐等[6]研究表明，PINX1 可以調控磷脂酰肌醇-3-羥激酶（phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又稱AKT）信號通路，從而抑制口腔鱗狀細胞癌細胞增殖和侵襲。但目前尚無TCAB1 和PINX1 相關信號通路的研究報道，還需進一步的基礎研究驗證。

綜上所述，乳腺浸潤性導管癌患者中TCAB1高表達率較高，PINX1 高表達率較低，二者的表達呈負相關，且PINX1 表達與淋巴結轉移情況和組織學分級密切相關，探究二者在乳腺浸潤性導管癌中的分子機制可為其診斷和治療提供新策略。