滇重樓多糖對(duì)小鼠胃腸動(dòng)力的影響

沙愛龍 熊彬冰 李媛媛 張尚紅 王韻欽 任盈盈 梁婷

文章編號(hào)：1003?6180（2023） 03?0053?05

摘? 要：通過比較正常小鼠與滇重樓多糖組小鼠胃排空率、小腸推進(jìn)率、十二指腸收縮活動(dòng)的差異，研究滇重樓多糖對(duì)小鼠胃腸動(dòng)力的影響.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，低劑量滇重樓多糖極顯著促進(jìn)小鼠胃排空率（P<0.01），中劑量極顯著抑制小鼠胃排空率而促進(jìn)其小腸推進(jìn)率（P<0.01），高劑量極顯著延緩小鼠胃排空率和小腸推進(jìn)率（P<0.01）.離體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，滇重樓多糖低、中劑量組興奮十二指腸收縮幅度，而高劑量組極顯著抑制十二指腸收縮幅度（P<0.01）.滇重樓多糖對(duì)小鼠胃腸動(dòng)力具雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)，且最適濃度位于中、高劑量間.

關(guān)鍵詞：滇重樓多糖；離體腸；在體；胃腸動(dòng)力

[? ?中圖分類號(hào)? ? ]TS202.3 [? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼? ?]? A

Effect of Paris polyphylla Polysaccharide on Gastrointestinal

Motility in Mice

SHA Ailonga*， XIONG Binbingb， LI Yuanyuana， ZHANG Shanghonga，

WANG Yunqina， REN Yingyinga， LIANG Tinga，

（Chongqing Three Gorges University a.School of Teacher Education； b. School of biology and food engineering， Chongqing 404120， China）

Abstract： By comparing the gastric emptying rate， intestinal motility and duodenum contractile activity between normal mice and Paris polyphylla Polysaccharides-treated mice， study the effect of Paris polyphylla Polysaccharide on gastrointestinal motility in mice. The results showed that the Paris polyphylla Polysaccharide in the low-dose group could significantly promote gastric emptying in mice （P<0.01）， the medium-dose Paris polyphylla Polysaccharide could significantly delay gastric emptying while promote gastric emptying （P<0.01）， and in the high-dose Paris polyphylla Polysaccharide gastric emptying and intestinal motility were delayed in mice （P<0.01）. Ex-vivo study showed Paris polyphylla Polysaccharide in the low， medium-dose groups induced duodenum contractile action， while Paris polyphylla Polysaccharide in the high-dose groups induced significantly relexation （P<0.01）. Paris polyphylla Polysaccharide directionlly regulated the gastrointestinal motility， and the optimal concentration was between medium and high dose.

Key words： Paris polyphylla Polysaccharide； intestine in vitro； in vivo； gastrointestinal motility

滇重樓[Paris polyphylla var.Yunnanensis（Franch．）Hand.-Mazz．]為百合科（Liliaceae）重樓屬（Paris）多年生草本植物，主要分布于云南、四川、貴州等地.[1]百合科具重要的觀賞、飼用、藥用、食用價(jià)值，滇重樓為百合科一員[2]，具有“消腫止痛、涼肝定驚、清熱解毒”等功效，亦是云南白藥、宮血寧等中成藥的重要原料.[3]滇重樓多糖是滇重樓實(shí)體中的重要有效成分，作為一種天然的生物活性物質(zhì)，其最大的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)細(xì)胞無毒副作用，在食藥領(lǐng)域有著巨大的潛在應(yīng)用前景.滇重樓多糖可作為保健食品添加劑，用于延緩衰老、抗氧化、增強(qiáng)人體免疫力，也可根據(jù)其不同的生物學(xué)活性制成保肝護(hù)肝、降血脂等新型藥物.[4]目前關(guān)于滇重樓多糖在胃腸動(dòng)力方面的研究尚未見報(bào)道.植物多糖可作為食品添加劑影響胃腸運(yùn)動(dòng)功能，如黃精多糖通過調(diào)節(jié)糖尿病鼠的腸道菌群而起到一定的改善病情的作用[5]；麥冬、大蒜、知母等多糖可一定程度增加小鼠腸道益生菌的數(shù)量并改善腸道微生態(tài)菌群多樣性，促進(jìn)腸道益生菌的增殖.[6-8]本實(shí)驗(yàn)擬通過比較正常小鼠與滇重樓多糖組小鼠胃排空率、小腸推進(jìn)率、十二指腸收縮活動(dòng)的差異，研究滇重樓多糖對(duì)小鼠胃腸動(dòng)力的影響，為進(jìn)一步開發(fā)利用滇重樓提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

小鼠46只（18～22 g），雌雄不拘，購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司.

1.2 試劑與儀器

滇重樓多糖（樂美天醫(yī)學(xué)/德斯特生物公司生產(chǎn)，批號(hào)：DS0190911-170）；高級(jí)藍(lán)黑墨水（香型）購(gòu)自貴州博士化工有限公司；BL-420F生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)（成都泰盟軟件有限公司）；張力換能器（成都泰盟軟件有限公司）；HW-400E恒溫平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）；電子天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司）.

樂氏液的制備.取9 g NaCl，0.42 g KCl，0.24 g CaCl2，0.2 g NaHCO3，1 g葡萄糖，加入1 000 mL蒸餾水.

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組與給藥方法

40只小鼠隨機(jī)分為正常組和低、中、高劑量實(shí)驗(yàn)組，每組10只.低、中、高劑量實(shí)驗(yàn)組按0.2 mL/10 g的劑量灌胃100，200，400 mg/kg的滇重樓多糖；正常組灌胃等量生理鹽水.連續(xù)灌胃15天，灌胃期間各組小鼠自由進(jìn)食、飲水.

1.3.2 滇重樓多糖對(duì)小鼠胃排空和小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響

末次給藥前，各組小鼠禁食12 h.灌胃給藥30 min后，每只再灌胃0.1 mL墨水，20 min后頸椎脫臼處死小鼠，迅速打開腹腔，結(jié)扎胃賁門和幽門，并在結(jié)扎處進(jìn)行全胃切除，濾紙擦干稱全重.沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物，擦干稱凈重.取出小腸，測(cè)量小腸全長(zhǎng)及幽門至藍(lán)黑墨水推進(jìn)的距離.計(jì)算胃排空率和小腸推進(jìn)率及其變化率.胃排空率（%）=1-（胃全重-胃凈重） /胃全重]×100%；小腸推進(jìn)率 （%）=幽門至藍(lán)黑墨水前端距離/小腸總長(zhǎng)度×100%；胃排空/小腸推進(jìn)變化率（%）=（實(shí)驗(yàn)組平均胃排空率或小腸推進(jìn)率—對(duì)照組平均胃排空率或小腸推進(jìn)率）/對(duì)照組平均胃排空率或小腸推進(jìn)率×100%.

1.3.3 滇重樓多糖對(duì)小鼠離體十二指腸收縮活動(dòng)的影響

另取小鼠6只，頸椎脫臼處死，迅速剖開腹腔取十二指腸，分離腸系膜，將離體腸置于樂氏液中反復(fù)洗凈，制備2～3 cm腸段.兩端穿線結(jié)扎，下端固定于恒溫平滑肌槽試驗(yàn)管底端L型鉤上，上端連于張力換能器彈性梁上.向恒溫平滑肌槽內(nèi)通氣，調(diào)節(jié)速度為每秒鐘出現(xiàn)1～2 個(gè)氣泡.穩(wěn)定10 min后，開始試驗(yàn).先加入低劑量滇重樓多糖，記錄觀察后用樂氏液沖洗3次，待曲線恢復(fù)后依次加入中、高劑量滇重樓多糖.通過生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)采集，記錄腸段收縮曲線的變化，并計(jì)算收縮幅度和收縮頻率變化率.收縮幅度變化率（%）=（加藥后平均收縮幅度—加藥前平均收縮幅度）/加藥前平均收縮幅度×100%；收縮頻率變化率（%）=（加藥后平均收縮頻率—加藥前平均收縮頻率）/加藥前平均收縮頻率×100%.

1.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 19.0軟件分析.組間數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)，P<0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著，P<0.01為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異極顯著.

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 滇重樓多糖對(duì)小鼠胃排空和小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響

與對(duì)照組比較，低劑量組滇重樓多糖有促進(jìn)小鼠胃排空和小腸推進(jìn)作用（胃排空作用P<0.01）.中劑量組滇重樓多糖極顯著抑制小鼠胃排空作用（P<0.01），但極顯著促進(jìn)小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)（P<0.01）.高劑量組滇重樓多糖極顯著抑制小鼠胃排空和小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)（P<0.01），且對(duì)于胃排空作用來說，高劑量組較中劑量組抑制效果更為明顯，見表1.

2.2 滇重樓多糖對(duì)小鼠離體十二指腸收縮幅度的影響

與給藥前相比，低、中劑量組滇重樓多糖均能促進(jìn)小鼠離體十二指腸收縮幅度（其中低劑量組P<0.05，中劑量組P<0.01），中劑量滇重樓多糖促進(jìn)率高達(dá)68.75%.高劑量組滇重樓多糖呈顯著抑制作用（P<0.05），見表2和圖1.

2.3 滇重樓多糖對(duì)小鼠離體十二指腸收縮頻率的影響

與給藥前相比，低劑量組滇重樓多糖促進(jìn)小鼠離體十二指腸收縮頻率，而中、高劑量組呈抑制作用，但影響均不顯著（P>0.05），見表3和圖1.

3 討論

研究結(jié)果表明，低劑量滇重樓多糖極顯著促進(jìn)小鼠胃排空，而高劑量明顯延緩小鼠胃排空，抑制小腸推進(jìn)，與于紅珍[9]等研究蒙藥肋柱花低、高劑量組對(duì)小鼠胃排空和小腸推進(jìn)雙向調(diào)節(jié)的影響結(jié)果相一致，說明滇重樓多糖對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)為雙向效應(yīng).黃彥峰[10]等認(rèn)為，低劑量滇重樓水提液促進(jìn)小鼠小腸推進(jìn)率而抑制其胃排空率.本研究表明，高劑量滇重樓水提液和多糖均能抑制小鼠小腸推進(jìn)率和胃排空率，說明低劑量滇重樓多糖比其水提液對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用更強(qiáng)，由此證實(shí)多糖是滇重樓中影響胃腸運(yùn)動(dòng)的主要有效成分.黃彥峰[10]等構(gòu)建小鼠胃排空、小腸推進(jìn)亢進(jìn)及抑制急性模型，表明滇重樓水提液對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)功能影響與M膽堿能受體、腎上腺素能系統(tǒng)有關(guān)，推測(cè)多糖對(duì)其影響同樣與自主神經(jīng)介導(dǎo)的消化道內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)和受體有關(guān)，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究.

筆者認(rèn)為，由于唾液淀粉酶、胰淀粉酶、雙糖酶可將多糖消化為二糖或單糖，因而當(dāng)?shù)嶂貥嵌嗵堑竭_(dá)小腸時(shí)發(fā)揮藥效的藥物劑量明顯低于灌胃劑量，導(dǎo)致胃和小腸運(yùn)動(dòng)變化不同.因低劑量均促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)，推測(cè)當(dāng)中劑量多糖到達(dá)小腸后藥物濃度大致與低劑量灌胃濃度相當(dāng)；胃和小腸結(jié)構(gòu)、機(jī)能狀態(tài)存在一定差異，對(duì)滇重樓多糖具有不同的反應(yīng)效果，導(dǎo)致二者影響程度和變化不同；滇重樓多糖影響生長(zhǎng)抑素、胃泌素、胃動(dòng)素等胃腸激素的分泌，從而影響胃排空.滇重樓多糖通過影響自主神經(jīng)節(jié)后纖維末梢處膽堿能或腎上腺素能神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，進(jìn)而影響其與胃腸細(xì)胞膜上相應(yīng)受體的結(jié)合而影響胃腸運(yùn)動(dòng).

滇重樓多糖對(duì)小鼠離體十二指腸的收縮都有影響.各劑量組滇重樓多糖對(duì)離體腸收縮頻率都有些許影響，但影響均不顯著.對(duì)于收縮幅度而言，低、中劑量組的滇重樓多糖對(duì)其具有興奮作用，而高劑量卻具有抑制作用.小鼠離體十二指腸雖失去外來神經(jīng)的支配，但其活動(dòng)仍受腸神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控，且小腸平滑肌的舒縮依賴于細(xì)胞內(nèi)Ca2+劑量的變化.筆者推測(cè)滇重樓多糖可在一定程度上促進(jìn)小腸平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)去極化，引發(fā)細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流，從而促進(jìn)十二指腸收縮.中劑量促進(jìn)效果可高達(dá)68.75%，推測(cè)該劑量多糖可與小腸細(xì)胞膜上的受體結(jié)合激發(fā)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路疊加進(jìn)而產(chǎn)生代償效應(yīng).代償效應(yīng)的作用逐漸被放大且足以彌補(bǔ)鈣離子超負(fù)荷引起的損傷，進(jìn)而使平滑肌呈現(xiàn)逐漸興奮的狀態(tài).但當(dāng)劑量增至高劑量時(shí)，推測(cè)鈣穩(wěn)態(tài)嚴(yán)重失調(diào)，代償效應(yīng)無法彌補(bǔ)其引起的損傷，因而此時(shí)十二指腸收縮呈抑制狀態(tài).這與王婧[11]等研究銀杏葉提取物對(duì)小鼠離體小腸平滑肌收縮幅度的影響結(jié)果一致，進(jìn)一步驗(yàn)證了滇重樓多糖對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的雙向效應(yīng).結(jié)合本實(shí)驗(yàn)，說明滇重樓多糖對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的最適濃度很可能介于中、高濃度間.

綜上，滇重樓多糖對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)具雙向調(diào)節(jié)作用，且介于中高濃度間的藥效可使胃腸運(yùn)動(dòng)既不過于興奮也不過于抑制，具益生元效應(yīng).滇重樓多糖有望用于胃腸動(dòng)力紊亂和功能性消化不良等疾病治療藥或保健品的研發(fā).多糖作為藥食同源佳物，通過提高腸道菌群的豐富度和多樣性，改變菌群物種組成結(jié)構(gòu)，進(jìn)而達(dá)到改善胃腸功能的作用[5-7].多糖是由許多相同或不同的單糖通過糖苷鍵連接而成的化合物[12]，滇重樓多糖亦是如此，主要含有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖和阿拉伯糖[13]，均有益于乳桿菌和雙歧桿菌等益生菌的生長(zhǎng)[14]，推測(cè)滇重樓多糖可通過調(diào)節(jié)腸道菌群，從而介導(dǎo)胃腸動(dòng)力.

參考文獻(xiàn)

[1]孟巍，杜娟，陳濤．重樓的化學(xué)成分及其抗腫瘤機(jī)制[J]．生命的化學(xué)，2020，40（1）：70-74．

[2]李彪，鞏紅冬，劉漢成．甘肅省百合科飼用植物資源調(diào)查[J]．牡丹江師范學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2023（1）：47-52．

[3]蔡艷妮．重樓多糖的化學(xué)修飾及體外活性研究[D]．西安：陜西理工大學(xué)，2018．

[4]申世安．滇重樓多糖的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定及其生物活性研究[D]．成都：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2017．

[5]楊明琛，袁夢(mèng)欣，陸維，等.黃精多糖體外消化特性及對(duì)Ⅱ型糖尿病小鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用[J].現(xiàn)代食品科技，2021，37（8）：14-21．

[6]石林林，王源，馮怡.麥冬多糖MDG-1對(duì)膳食誘導(dǎo)肥胖模型小鼠腸道益生菌群多樣性影響的研究[J].中國(guó)中藥雜志，2015，40（4）：716-721．

[7]張浩琪，魏華琳，劉賓，等.大蒜多糖對(duì)小鼠腸道微生態(tài)的益生元功能研究[J].中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志，2012，24（2）：134-138．

[8]陳君誠(chéng).知母多糖的結(jié)構(gòu)鑒定、降血糖機(jī)制及其對(duì)腸道菌群的影響[D].廣州：華南理工大學(xué)，2021．

[9]于紅珍，額尼榮貴，包特日格樂，等.蒙藥肋柱花對(duì)小鼠胃腸動(dòng)力雙向調(diào)節(jié)功能的研究[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2022，38（17）：2028-2033．

[10] 黃彥峰，何顯教，晉玲，等.重樓水提液對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，33（4）：442-445．

[11]王婧，潘盛武，楊盛昌.銀杏葉提取物對(duì)小鼠離體小腸平滑肌收縮特性的影響[J].四川動(dòng)物，2009，28（3）：382-385．

[12]倪福太，莊妍．植物多糖研究進(jìn)展[J].牡丹江師范學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010（4）：34-36．

[13]王騫.中國(guó)西南地區(qū)滇重樓資源品質(zhì)評(píng)價(jià)[D].大理：大理大學(xué)，2019．

[14]Sanders ME， Merenstein DJ， Reid G， et al. Probiotics and prebiotics in intestinal health and disease： from biology to the clinic [J]. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2019， 16（10）： 605-616.

編輯：琳莉