聯合測定血漿miRNA-19b及紅細胞分布寬度在COPD相關肺動脈高壓中的臨床價值

張青 熊偉 劉明 張誠實 王妮妮 陳榮榮 趙云峰

(1上海市浦東新區浦南醫院呼吸與危重癥醫學科,上海 200125;2上海交通大學醫學院附屬新華醫院呼吸與危重癥醫學科)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是我國常見的一種呼吸道慢性氣道炎癥疾病,流調數據顯示我國40歲以上人群COPD患病率為14.1%〔1〕,按照病程分為COPD急性加重(AECOPD)和穩定期,肺動脈高壓(PH)是COPD常見并發癥,我國由COPD導致的PH占60%,PH是導致COPD患者死亡的重要原因。目前臨床常用的診斷PH的無創方法是多普勒超聲心動圖,三尖瓣峰值流速>3.4 m/s可診斷為PH〔2〕。

微小RNA(miRNA)是短鏈非編碼RNA,在血清中能夠穩定表達。研究發現miRNA參與細胞增殖、凋亡、血管生成等〔3～6〕,在COPD、PH等肺部疾病、血管重塑過程中發揮重要作用。miR-17-92基因簇為一種典型的含有多順反子啟動子的高度保守的基因簇,位于人染色體13q31.3處,包含7個成員:miR-17-3p、miR-17-5p、miR-18a-5p、miR-19a-3p、miR-19b-3p、miR-20a-5p和miR-92a-3p。研究發現血漿中miRNA-19b參與AECOPD患者PH的形成〔7〕。紅細胞分布寬度(RDW)是反映紅細胞體積異質性的參數,RDW的正常參考范圍為11%～14%〔8〕,受年齡、種族及檢測儀器等多因素影響。數值越大,反映外周血紅細胞體積變化越大。近年研究表明RDW水平與PH之間密切相關。Petrauskas等〔9〕回顧性研究顯示PH患者的RDW水平明顯高于對照組,RDW聯合B型鈉尿肽(BNP)能明顯提高BNP預測患者發生PH的準確性。本研究旨在探討聯合測定血漿miRNA-19b及RDW在COPD相關PH患者中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取上海市浦東新區浦南醫院呼吸與危重癥醫學科病房2020年11月至2021年11月診治AECOPD患者共156例。納入標準:符合AECOPD診治中國專家共識 (2017年更新版)制定的AECOPD標準〔10〕。排除標準:①下肢深靜脈血栓慢性血栓、栓塞性肺動脈高壓、肺栓塞;②肝功能不全、腎功能不全、肺間質纖維化、糖尿病;③惡性腫瘤;④心功能不全、冠心病等。本研究經浦南醫院倫理委員會批準通過,患者均簽署知情同意書,倫理批準號:PNYY2020-19。

1.2分組 分為AECOPD組(A組,45例)、AECOPD合并PH組(B組,111例)。A組男31例,女14例,年齡55～80歲,中位年齡69.5歲;B組男71例,女40例,年齡66～79歲,中位年齡72.7歲。兩組一般資料差異均無統計學意義(P>0.05)。測定兩組入院時血漿miRNA-19b、PASP、RDW,繪制血漿miRNA-19b和RDW診斷 COPD 相關PH及二者聯合的受試者工作特征(ROC)曲線;應用 Logistic回歸分析預測概率,并計算診斷價值。

1.3超聲心動圖測定肺動脈收縮壓(PASP) 應用Philip IE33超聲診斷檢測儀在彩色多普勒引導下測定PASP〔11〕。

1.4血漿miRNA-19b、RDW測定 于入院次日早晨抽取空腹靜脈血10 ml,取6 ml靜置后送至檢驗科生化室檢測;取4 ml室溫靜置30 min后,4 ℃下3 000 r/min離心10 min,提取血漿,移入 Eppendorf 管,置于-80 ℃冰箱保存待測。血漿miRNA-19b測定采用定量反轉錄聚合酶鏈反應法(qRT-PCR)。按 Trizol 試劑盒說明書步驟提取細胞總 RNA 并測定其濃度,結果以2-ΔΔCt法表示〔12〕。血RDW測定:采用邁瑞BC3000CT全自動血細胞分析儀測定血RDW。

1.5統計學分析 采用SPSS19.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1兩組PASP、血漿miRNA-19b、RDW比較 與A組比較,B組PASP、RDW均顯著升高、血漿miRNA-19b顯著下降(P<0.05)。見表1。

表1 兩組PASP、血漿miRNA-19b、RDW比較

2.2血漿miRNA-19b、RDW及二者聯合診斷COPD相關PH的ROC曲線比較 血漿miRNA-19b、RDW聯合診斷COPD相關PH的AUC(0.890)、敏感度(98.20%)、特異度(80.00%)均高于血漿miRNA-19b、RDW單獨診斷COPD相關PH的AUC(0.521、0.798)、敏感度(69.37%、64.86%)、特異度(40.00%、84.44%)。見圖1。

圖1 血漿miRNA-19b、RDW及二者聯合診斷COPD相關PH的ROC曲線比較

3 討 論

PH是以呼吸困難、疲勞、虛弱、心絞痛等非特異性臨床癥狀為主要表現且無法治愈的疾病,65歲以上人群中患病率約為10%,多以暈厥為常發癥狀,死亡率極高。當合并COPD時,常伴隨嚴重的肺功能損傷,可增加死亡率。miR-17-92簇是控制細胞凋亡和增殖最具特征的miRNA家族之一。miR-17-92基因簇上調可導致細胞凋亡的減少和細胞增殖增加。miRNA-19b是miR-17-92基因簇中的成員,參與PH的形成〔13〕,研究發現〔7〕合并PH的AECOPD患者血漿miRNA-19b水平明顯低于不合并PH的AECOPD患者。在AECOPD相關PH老年患者中,隨著肺動脈壓力逐漸增高,血漿miRNA-19b水平逐漸降低,血漿miRNA-19b水平與PASP呈負相關。

RDW是從標準全血細胞計數獲得的生化參數,是循環中紅細胞大小變異性的量度,代表紅細胞大小的變異系數。當機體動脈血氧分壓降低時,可激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統,促使紅細胞生成素活性降低,繼而影響紅細胞的形態,促進RDW異常增加〔14〕。此外,炎性反應時生成的大量氧自由基可以抑制紅細胞的成熟,從而導致外周血中幼稚紅細胞的數量增加,導致RDW升高〔15〕。

當 COPD患者繼發PH時,可造成肺循環阻力增加,從而加重機體的缺氧和二氧化碳潴留,導致骨髓造血功能亢進,同時刺激紅細胞生成素生成增多,最終導致繼發性紅細胞增多,引起 RDW 升高〔16〕。研究發現 RDW 值隨肺動脈壓力的升高而升高,并且兩者呈顯著正相關,認為RDW 可作為 COPD繼發PH的評估指標之一〔16〕。Yang等〔17〕對213例COPD 患者的研究表明,合并 PH 患者的RDW顯著高于不合并 PH 患者。Xi 等〔18〕對 167 例特發性 PH 患者隨訪20 個月后證實,RDW升高(>13.65%)與特發性PH嚴重程度和全因死亡率相關。一項無假設的全癥狀分析研究顯示,在1 364 種疾病中,與RDW最相關的臨床疾病為 PH〔19〕。

本研究結果與Yang等〔17〕研究結論類似。本研究提示,聯合診斷可以提高診斷的敏感度和特異度,而降低誤診率及漏診率。本研究存在的不足之處是單中心、小樣本量研究,需要進行多中心、大樣本臨床研究。動態監測COPD相關PH患者血漿miRNA-19b水平及RDW變化對判斷COPD合并PH患者的預后將會有一定的臨床價值。