基于“火力火候”探討川牛膝工業化酒炙工藝量變關系及標準化研究

施崇精，宋 英，石征蓉，袁強華*

基于“火力火候”探討川牛膝工業化酒炙工藝量變關系及標準化研究

施崇精1，宋 英2，石征蓉1，袁強華2*

1. 成都市中西醫結合醫院，四川 成都 610095 2. 成都中醫藥大學附屬醫院，四川 成都 610075

探究川牛膝工業化酒炙工藝與其內外特征、終點藥溫的量變關系，優選川牛膝最佳酒炙工藝并量化酒炙終點。采用外觀顏色評分量化外在特征；采用HPLC法測定的15個HPLC特征峰峰質比量化內在特征；采用紅外線溫度計量化終點藥溫；采用單因素法探究加酒量、悶潤時間、最大炒藥量比重、炒制溫度、炒制時間、炒筒轉速在不同水平下與川牛膝外觀顏色、HPLC特征峰、終點藥溫之間的量變關系。最大炒藥量比重、炒制溫度、炒制時間對內外特征、終點藥溫有明顯影響，加酒量、悶潤時間、炒筒轉速對內外特征、終點藥溫無明顯影響。優選的酒炙工藝為取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片，加飲片質量10%的黃酒悶潤2 h，置控溫200 ℃、轉速15 r/min的鼓式炒藥機中炒制20 min，傾出晾涼。酒炙終點藥溫在130～140 ℃。優選的川牛膝酒炙工藝參數明確、合理穩定、易于量化酒炙終點，適合于川牛膝酒炙工業化生產。

川牛膝；火力火候；工業化酒炙工藝；內外特征；終點藥溫；5-羥甲基糠醛；杯莧甾酮

中藥炮制是我國傳統醫學中獨具一格的制藥技術，已列入了我國非物質文化遺產。明代陳嘉謨在《本草蒙筌》中寫道：“凡藥制造，貴在適中，不及則功效難求，太過則氣味反失”，中藥炮制既不能“不及”又不能“太過”，而講究“適中”。中藥炮制“適中”才能發揮其增效減毒等特殊作用，常見的中藥炮制方法有凈制、切制、炒制、酒炙、醋炙、蒸制等，其中酒炙具有溫煦、通達、升提等炮制作用。

川牛膝屬川產道地藥材，具有逐瘀通經、通利關節、利尿通淋之功，臨床上用于治療經閉癥瘕、胞衣不下、跌撲損傷、風濕痹痛、足痿筋攣、尿血血淋，經酒炙后能增強其逐瘀通經，通利關節之功[1-2]。根據《中國藥典》2020年版規定，酒川牛膝經酒炙后其形如川牛膝片，表面棕黑色，微有酒香氣，味甜。酒川牛膝較川牛膝片的主要差異為表面棕黑色、微有酒香氣等主觀性性狀描述，并未闡述具體的酒炙參數和客觀性差異，難以體現出“適中”的客觀性和標準性。現代工業化酒炙多采用鼓式炒藥機等自動化設備進行炒制，而現有酒炙工藝研究多以傳統手工炒制為考察對象，并未考察工業化炮制設備特有參數對酒炙工藝的影響，嚴重脫離了工業化炮制的實際情況。有學者對中藥炮制技術提出“火力火候”概念[3-5]，即“火力”是使藥物或受熱體溫度變化的能力，是藥物或受熱體的溫升速度，或藥物、受熱體在單位時間內的溫度變化值；“火候”是火力持續作用的結果，是藥物或受熱體在火力作用下達到的溫度或熱的程度。炮制中炒制過程是熱能量傳遞的過程，通過外在熱源使飲片熱能發生變化而引起其理化性質改變，從而達到增效減毒等炮制作用。飲片熱能變化體現在飲片的溫度，即為藥溫。本研究基于“火力火候”，結合現代工業化炮制技術，采用鼓式炒藥機依次考察加酒量、悶潤時間、最大炒藥量比重、炒制溫度、炒制時間、炒筒轉速與川牛膝外觀顏色、HPLC特征峰、終點藥溫之間的量變關系，優選最佳酒炙工藝并驗證，同時對酒炙終點進行藥溫量化，以期為酒川牛膝工業化酒炙工藝參數和酒炙終點客觀化提供參考依據[6]。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀，美國安捷倫科技有限公司；BP-211D型十萬分之一電子天平，賽多利斯科學儀器（中國）有限公司；LE204E型萬分之一電子天平，梅特勒托利多儀器公司；111B型高速中藥粉碎機，瑞安市永厲制藥機械有限公司；KH-250B型超聲波清洗器，昆山禾創超聲儀器有限公司；CG-750型自控溫鼓式炒藥機，設備最大炒藥量50 kg，杭州海善制藥設備有限公司；Testo 830-T1型紅外線溫度計，德圖儀表（深圳）有限公司。

1.2 材料

杯莧甾酮對照品，批號111804-201303，質量分數93.5%，購自中國食品藥品檢定研究院；5-羥甲基糠醛（5-HMF）對照品，批號170825，質量分數98.0%，購自成都植標化純生物技術有限公司；甲醇、乙腈、磷酸為色譜純，美國Tedia公司；水為自制超純水；川牛膝飲片H（批號171205）、川牛膝飲片K（批號180321）、川牛膝飲片M（批號180530），購自四川省中藥飲片有限責任公司，經成都中醫藥大學附屬醫院藥劑科主任中藥師宋英鑒定，均為來源于莧科杯莧屬植物川牛膝Kuan的干燥根，符合《中國藥典》2020年版的要求。

2 方法與結果

2.1 酒川牛膝飲片的制備

取川牛膝飲片，加適量黃酒悶潤透，炒制至顏色明顯加深，表面棕黑色，微有酒香氣，味甜時，傾出晾涼，作為酒川牛膝飲片。

2.2 色譜條件

色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流動相為乙腈-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫程序為0～8 min，1%乙腈；8～15 min，1%～4%乙腈；15～53 min，4%～9%乙腈；53～70 min，9%～15%乙腈；70～100 min，15%～16%乙腈；100～110 min，16%～22%乙腈；110～130 min，22%～33%乙腈；130～145 min，33%～42%乙腈；145～160 min，42%乙腈。檢測波長為多波長切換：0～15 min，220 nm；15～20 min，200 nm；20～25 min，250 nm；25～90 nm，220 nm；90～109 min，250 nm；109～116 min，200 nm；116～160 min，220 nm。體積流量1.0 mL/min；進樣量20 μL；柱溫20 ℃。

2.3 對照品溶液的制備

2.3.1 杯莧甾酮 取杯莧甾酮對照品適量，精密稱定為10.64 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度線，搖勻，得杯莧甾酮對照品儲備液。精密吸取杯莧甾酮對照品儲備液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度線，搖勻，即得含杯莧甾酮99.484 μg/mL的對照品溶液。

2.3.2 5-HMF 取5-HMF對照品適量，精密稱定為20.03 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度線，搖勻，得5-HMF對照品儲備液。精密吸取5-HMF對照品儲備液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度線，搖勻，即得含5-HMF 196.294 μg/mL的對照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備

取待測飲片粉末（過3號篩）約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入45%甲醇20 mL，密閉，稱定質量，超聲處理（功率500 W、頻率25 kHz）1 h，放冷，再稱定質量，用45%甲醇補足減失的質量，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.5 方法學考察

2.5.1 專屬性考察 取川牛膝飲片H適量，按照“2.4”項下方法制得供試品溶液；取對照品溶液和供試品溶液，按照“2.2”項下色譜條件進行測定。結果各特征峰分離度良好，相互之間無干擾，表明該方法專屬性強。

2.5.2 精密度考察 取川牛膝飲片H適量，按“2.4”項下方法制得供試品溶液，在24 h內按“2.2”項下色譜條件連續進樣6次，由結果可知，以色譜峰10（杯莧甾酮）為參照峰，15個特征峰相對保留時間、相對峰面積RSD值均在3.0%內，表明該儀器精密度良好。

2.5.3 重復性考察 取川牛膝飲片H適量，共6份，分別按“2.4”項下方法制得供試品溶液，在24 h內按“2.2”項下色譜條件測定，結果以色譜峰10（杯莧甾酮）為參照峰，15個特征峰相對保留時間、相對峰面積RSD值均在3.0%內，表明該供試品溶液制備方法重現性良好。

2.5.4 穩定性考察 取川牛膝飲片H適量，按“2.4”項下方法制得供試品溶液，在0、3、6、9、12、15、18、21、24、48 h后，按“2.2”項下色譜條件測定，結果以色譜峰10（杯莧甾酮）為參照峰，15個特征峰相對保留時間、相對峰面積RSD值均在3.0%內，表明供試品溶液在室溫下放置48 h內穩定性良好。

2.5.5 加樣回收率試驗 取已測定杯莧甾酮含量（615.8 μg/g）的川牛膝飲片H 0.5 g共6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入杯莧甾酮對照品溶液（186.025 6 μg/mL）1.5 mL，按照“2.4”項下方法制得供試品溶液6份，再按照“2.2”項下色譜條件進行測定，計算得杯莧甾酮的平均加樣回收率為101.64%，RSD為2.22%，結果表明，該方法準確度良好。

2.6 川牛膝酒炙內外特征與終點藥溫量化

2.6.1 酒炙工藝預試 參考現有研究，結合工業化酒炙技術和CG-750型自控溫鼓式炒藥機（以下簡稱鼓式炒藥機）設備，對川牛膝酒炙工藝進行預試驗。由預試驗結果可知，取川牛膝飲片H 20 kg（最大炒藥量比重為40%，最大炒藥量比重＝投料量/設備最大炒藥量），加飲片質量10%的黃酒悶潤2 h，置控溫200 ℃、轉速15 r/min的鼓式炒藥機中炒制15 min，傾出晾涼，所得酒川牛膝飲片與傳統手工炮制的外觀顏色較為一致，且炒制過程中外觀顏色容易控制，可行性較好。取川牛膝飲片H 20 kg，共4份，按預試驗結果進行酒炙，即得酒川牛膝飲片H1～H4。

2.6.2 外在特征 外在特征量化采取外觀顏色評分法，由四川省中藥飲片有限責任公司生產技術部3名經驗豐富的炮制老藥工進行觀察評分，以分數為0分附近視為炮制“適中”，即符合酒川牛膝的外觀顏色要求；分數為正值視為炮制“太過”，即飲片顏色過深，呈焦黑色或炭化；分數為負值視為炮制“不及”，即飲片顏色未明顯加深。外觀顏色評分為?100～100分，作為外在特征量化指標。酒川牛膝飲片H1～H4外觀顏色趨于一致，均符合酒川牛膝外觀顏色的要求，即顏色較川牛膝飲片H明顯加深，表面棕黑色，微有酒香氣，味甜。酒川牛膝飲片H1～H4的外觀顏色評分見表1。

2.6.3 內在特征 取川牛膝飲片H、酒炙飲片H1～H4適量，按“2.4”項下方法制備供試品溶液，取“2.3”項下杯莧甾酮對照品溶液和5-HMF對照品溶液及上述供試品溶液適量，按“2.2”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，結果見圖1。

參考前期研究工作[7-9]，以特征峰10（杯莧甾酮）為參照峰，篩選響應值較大的15個特征峰（編號依次為1～15），采用以上15個特征峰峰質比（峰質比＝峰面積/稱樣質量）作為內在特征量化指標。15個特征峰指認了其3號峰為5-HMF，10號峰為杯莧甾酮，各特征峰峰質比結果見表1。由結果可知，川牛膝飲片經酒炙后，新增了峰2～4、6共4個特征峰，峰1、5、12、13共4個特征峰峰質比出現明顯下降，峰7～11、14、15共7個特征峰峰質比基本保持不變，表明川牛膝酒炙前后在某些組分上發生了一定的變化，以此作為酒炙前后特征峰量變規律要求。

表1 川牛膝酒炙前后特征峰峰質比、終點藥溫、外觀顏色評分

3-5-HMF 10-杯莧甾酮

2.6.4 終點藥溫 采用紅外線溫度計測定酒川牛膝飲片H1～H4炒制結束時飲片表面溫度，即為終點藥溫，結果見表1。終點藥溫用以體現“火力火候”的強弱[10]。

2.7 不同酒炙工藝與內外特征、終點藥溫量變關系

2.7.1 酒炙工藝設計與測定 根據“2.6”項下結果和實際生產狀況，取川牛膝飲片H，采用鼓式炒藥機依次對加酒量、悶潤時間、最大炒藥量比重、炒制溫度、炒制時間、炒筒轉速6個酒炙工藝因素的不同水平進行單因素考察，以期探索酒炙工藝與內外特征、終點藥溫之間的量變關系，為優選川牛膝最佳酒炙工藝提供一定的參考依據。

取各酒炙工藝炮制的酒川牛膝飲片，按“2.6.2”項下方法對外觀顏色逐一評分，按“2.6.4”項下方法測定終點藥溫，結果見表2～7。按“2.4”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2”項下色譜條件進樣測定，記錄并計算“2.6.3”項下所示的15個特征峰峰質比，結果見表2～7。

表2 川牛膝酒炙工藝中加酒量對特征峰峰質比、終點藥溫和外觀顏色評分的影響

表3 川牛膝酒炙工藝中悶潤時間對特征峰峰質比、終點藥溫和外觀顏色評分的影響

表4 川牛膝酒炙工藝中最大炒藥量比重對特征峰峰質比、終點藥溫和外觀顏色評分的影響

表5 川牛膝酒炙工藝中炒制溫度對特征峰峰質比、終點藥溫和外觀顏色評分的影響

2.7.2 加酒量 取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片H（20 kg）共5份，加飲片質量10.0%、12.5%、15.0%、17.5%、20.0%的黃酒悶潤2 h，分別置控溫200 ℃、轉速15 r/min的鼓式炒藥機中炒制15 min，傾出晾涼，即得編號依次為A1～A5的酒川牛膝飲片，按“2.7.1”項下方法測定并記錄結果。

由表2結果可知，在外在特征方面，各樣品外觀顏色均整體差異不大，符合酒川牛膝外在特征要求，表明加酒量與外在特征無明顯相關性。在內在特征方面，除A5樣品未完全達到酒炙前后特征峰量變規律要求外，其余樣品均符合特征峰量變規律，表明加酒量對內在特征影響不大。

表6 川牛膝酒炙工藝中炒制時間對特征峰峰質比、終點藥溫和外觀顏色評分的影響

表7 川牛膝酒炙工藝中炒筒轉速對特征峰峰質比、終點藥溫和外觀顏色評分的影響

特征峰峰質比變化趨勢表明加酒量與峰2～4、6共4個類特征峰呈負相關性，與峰1、5共2個特征峰呈正相關性，與峰7～15共9個特征峰無明顯相關性。在終點藥溫方面，各樣品終點藥溫差異不大，表明加酒量與終點藥溫無明顯相關性。

從“火力火候”而言，由于黃酒用量的不同，使飲片升溫速度略有不一致，從而導致飲片終點藥溫差異，并表現出酒川牛膝內外特征和終點藥溫的差異。經觀察10%及以上的黃酒用量均能將飲片潤透。綜上所述，加酒量對酒川牛膝的內外特征并未產生明顯影響，結合生產實際情況考慮，擬定加酒量為10%。

2.7.3 悶潤時間 取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片H（20 kg）共7份，加飲片質量10%的黃酒分別悶潤0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 h，分別置控溫200 ℃、轉速15 r/min的鼓式炒藥機中炒制15 min，傾出晾涼，即得編號依次為B1～B7的酒川牛膝飲片，按“2.7.1”項下方法測定并記錄結果。

由表3結果可知，各樣品外觀顏色基本一致，符合酒川牛膝外在特征要求，均達到酒炙前后特征峰量變規律要求，同時悶潤時間與內外特征、終點藥溫之間均無明顯相關性。經觀察悶潤2 h及以上可達到悶透的效果。綜上所述，悶潤時間對酒川牛膝內外特征未產生明顯影響，結合實際情況和生產效率考慮，擬定悶潤時間為2 h。

2.7.4 最大炒藥量比重 取最大炒藥量比重分別為20%、30%、40%、60%、80%、100%的川牛膝飲片H（依次為10、15、20、30、40、50 kg）共6份，加飲片質量10%的黃酒悶潤2 h，分別置控溫200 ℃、轉速15 r/min的鼓式炒藥機中炒制15 min，傾出晾涼，即得編號依次為C1～C6的酒川牛膝飲片，按“2.7.1”項下方法測定并記錄結果。

由表4結果可知，在外在特征方面，各樣品外觀顏色差異很大，其中C1樣品顏色基本成焦黑色且少量炭化，C5、C6樣品整體顏色未變深且不均勻，不符合酒川牛膝外在特征要求，其余樣品符合酒川牛膝外在特征要求。最大炒藥量比重越大，酒炙飲片外觀顏色明顯越淺，表明最大炒藥量比重與外在特征呈負相關。

在內在特征方面，C4、C5、C6樣品未完全達到酒炙前后特征峰量變規律要求，C1、C2、C3樣品均符合酒炙前后特征峰量變規律要求，表明最大炒藥量比重對內在特征影響很大。

特征峰峰質比變化趨勢表明最大炒藥量比重與峰2～4、6共4個特征峰呈負相關性，與峰1、5、7～11、14、15共9個特征峰呈正相關性，與峰12、13共2個特征峰無明顯相關性。在終點藥溫方面，最大炒藥量比重越大，終點藥溫明顯越低，加酒量與終點藥溫呈負相關。

從“火力火候”而言，由于最大炒藥量比重不同，使飲片升溫速度不一致，從而導致飲片終點藥溫差異，并表現出酒川牛膝內外特征和終點藥溫的差異。綜上所述，最大炒藥量比重對酒川牛膝的內外特征產生明顯影響，根據內外特征分析，擬定最大炒藥量為40%。

2.7.5 炒制溫度 取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片H（20 kg）各6份，加飲片質量的10%的黃酒悶潤2 h，分別置控溫250、225、200、175、150、125 ℃轉速15 r/min的鼓式炒藥機中炒制15 min，傾出晾涼，即得編號依次為D1～D6的酒川牛膝飲片，按“2.7.1”項下方法測定并記錄結果。

由表5結果可知，在外在特征方面，各樣品外觀顏色差異很大，其中D1樣品顏色基本成焦黑色且部分炭化，D5、D6樣品整體顏色較淺，不符合酒川牛膝外在特征要求，其余樣品符合酒川牛膝外在特征要求。炒制溫度越高，酒炙飲片外觀顏色明顯越深，表明炒制溫度與外在特征呈正相關。在內在特征方面，D4～D6樣品未完全達到酒炙前后特征峰量變規律要求，D1～D3樣品均符合酒炙前后特征峰量變規律要求，表明炒制溫度對內在特征影響很大。

特征峰峰質比變化趨勢表明炒制溫度與峰2～4、6共4個特征峰呈正相關性，與峰1、5、7～11、14、15共9個特征峰呈負相關性，與峰12、13共2個特征峰無明顯相關性。在終點藥溫方面，炒制溫度越高，終點藥溫明顯越高，炒制溫度與終點藥溫呈正相關。

從“火力火候”而言，由于炒制溫度不同，使飲片升溫速度明顯不一致，從而導致飲片終點藥溫差異，并表現出酒川牛膝內外特征和終點藥溫的差異。綜上所述，炒制溫度對酒川牛膝的內外特征產生明顯影響，根據內外特征分析，擬定炒制溫度為200 ℃。

2.7.6 炒制時間 取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片H（20 kg）各7份，加飲片質量的10%的黃酒悶潤2 h，分別置控溫200 ℃、轉速15 r/min的鼓式炒藥機中炒制22.5、20.0、17.5、15.0、12.5、10.0、7.5 min，傾出晾涼，即得編號依次為E1～E7的酒川牛膝飲片，按“2.7.1”項下方法測定并記錄結果。

由表6結果可知，在外在特征方面，各樣品外觀顏色差異很大，其中E1樣品顏色基本成焦黑色且多數炭化，E7樣品整體顏色較淺，不符合酒川牛膝外在特征要求，其余樣品符合酒川牛膝外在特征要求。炒制時間越長，酒炙飲片外觀顏色明顯越深，表明炒制時間與外在特征呈正相關。

在內在特征方面，E5～E7樣品未完全達到酒炙前后特征峰量變規律要求，E1～E4樣品均符合酒炙前后特征峰量變規律要求，表明炒制時間對內在特征影響很大。特征峰峰質比變化趨勢表明炒制時間與峰2～4、6共4個特征峰呈正相關性，與峰1、5、7～11、14、15共9個特征峰呈負相關性，與峰12、13共2個特征峰明顯無明顯相關性。在終點藥溫方面，炒制時間越長，終點藥溫明顯越高，炒制時間與終點藥溫呈正相關。

從“火力火候”而言，由于炒制時間不同，從而導致飲片終點藥溫差異，并表現出酒川牛膝內外特征和終點藥溫的差異。綜上所述，炒制時間對酒川牛膝的內外特征產生明顯影響，根據內外特征分析，擬定炒制時間為15 min。

2.7.7 炒筒轉速 取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片H（20 kg）各5份，加飲片質量的10%的黃酒悶潤2 h，置控溫200 ℃、轉速分別為5、10、15、20、25 r/min的鼓式炒藥機中炒制15 min，傾出晾涼，即得編號依次為G1～G5的酒川牛膝飲片，按“2.7.1”項下方法測定并記錄結果。

由表7結果可知，各樣品外觀顏色均基本一致，符合酒川牛膝外在特征要求，均達到酒炙前后特征峰量變規律要求，同時炒筒轉速與內外特征、終點藥溫之間均無明顯相關性。經觀察發現在低轉速下，極少部分飲片易長期粘附在炒筒內壁，導致成品中含有少量的焦黑飲片。

綜上所述，炒筒轉速對酒川牛膝內外特征未產生明顯影響，結合實際生產情況考慮，擬定炒筒轉速為15 r/min。

2.8 酒炙工藝、內外特征、終點藥溫的相關性分析

對各酒炙工藝樣品與其外觀顏色、特征峰、終點藥溫的相關性進行統計分析，結果見表8。由酒炙工藝與外觀顏色、特征峰、終點藥溫的相關性分析可知，不同酒炙工藝對酒川牛膝內外特征、終點藥溫的變化影響不一，其中最大炒藥量比重、炒制溫度、炒制時間對內外特征、終點藥溫有明顯影響，而加酒量、悶潤時間、炒筒轉速未產生明顯的影響。

表8 川牛膝酒炙工藝與特征峰、終點藥溫和外觀顏色的相關性

“＋”代表正相關性，“－”代表負相關性，“〇”代表無明顯相關性

“＋” represents positive correlation,“－” represents negative correlation, and “〇” represents no significant correlation

對數據進行歸納總結后得出，終點藥溫與外在特征呈正相關，而終點藥溫、外在特征與峰2～4、6共4個特征峰呈正相關性，與峰1、5、7～11、14、15、12、13共9個特征峰呈負相關性，與峰12、13共2個特征峰無明顯相關性。

酒炙飲片外觀顏色越深，與之呈正相關的峰2～4、6共4個特征峰越高，與之呈負相關的峰1、5、7～11、14、15、12、13共9個特征峰越低，體現了川牛膝酒炙前后內外特征變化之間的相關性。

從“火力火候”而言，是由于不同酒炙工藝下酒炙飲片的藥溫變化趨勢和終點藥溫的不一致，從而導致了酒川牛膝內外特征的差異。

2.9 驗證試驗與酒炙終點量化

對優選的川牛膝酒炙工藝進行批內重復性驗證，即取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片H（20 kg）各4份，加飲片質量10%的黃酒悶潤2 h，置控溫200 ℃、轉速15 r/min的鼓式炒藥機中炒制15 min，傾出晾涼，即為“2.6.1”項下的酒川牛膝飲片H1～H4。

對優選的川牛膝酒炙工藝進行批間重復性驗證，即取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片K、川牛膝飲片M各20 kg，同上法炮制，即得酒川牛膝飲片K1、酒川牛膝飲片M1。

取酒川牛膝飲片H1～H4、K1、M1，按“2.6.2”項下方法對外觀顏色逐一評分，按“2.6.4”項下方法測定終點藥溫，結果見表1。

取川牛膝飲片H、K、M，酒川牛膝飲片H1～H4、K1、M1適量，按“2.4”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2”項下色譜條件進樣測定，記錄并計算“2.6.3”項下所示的15個特征峰峰質比，結果見表1。

由結果可知，川牛膝飲片經酒炙后外觀顏色趨于一致，均符合酒川牛膝外在特征要求，均符合規定的酒炙前后特征峰量變規律要求，終點藥溫均在130～140 ℃。取酒川牛膝飲片H1～H4、K1、M1，按《中國藥典》2020年版川牛膝項下“酒川牛膝”飲片的規定進行檢測，其中杯莧甾酮質量分數依次為685.0、704.3、692.3、669.1、715.2、665.4 μg/g，所有檢驗結果均符合《中國藥典》2020年版要求。

根據“2.8”項下相關性分析，可知在實際的生產過程中，終點藥溫能快速、準確、有效地反映出酒炙飲片的內在特征，從而量化酒炙工藝的終點。根據上述批內和批間重復性驗證試驗可知，以炒制過程中藥溫達到130～140 ℃時，可作為酒炙終點量化標準。

綜上所述，表明優選的川牛膝酒炙工藝參數明確、合理穩定、易于量化酒炙終點，適合于川牛膝酒炙工業化生產。

3 討論

中藥炮制是我國獨特的制藥技術，千百年來中藥炮制對用藥選擇產生深遠影響，傳統中藥炮制技術多為口耳相傳，多對性狀進行表述，并未對內在物質變化機理進行闡述，難以達到現代中藥炮制技術標準化、客觀化的要求。酒炙工藝相關研究多以手工炮制為基礎，主要對加酒量、悶潤時間、炒制溫度、炒制時間為考察因素，嚴重脫離了現代工業化機器炒制的客觀事實[11-13]。川牛膝酒炙工藝研究的文獻報道較少，童凱等[14-16]采用HPLC法和GC-MS法對川牛膝酒炙前后化學成分變化進行分析，對川牛膝酒炙品的鑒定和質量控制提供參考依據，但其并未分析不同酒炙工藝參數與化學成分變化之間的規律。

本實驗新增了最大炒藥量比重、炒筒轉速2個工業化酒炙工藝考察因素，采用HPLC多波長切換技術分析樣品特征峰，其中有13個特征峰與各酒炙工藝參數有一定的相關性，表明選用的特征峰可反映出了酒炙工藝的變化，具有一定的代表性。

飲片受熱炒制后原化學成分的分解或轉化是酒炙后化學成分變化的主要原因，化學成分的分解或轉化與飲片受熱程度有關，其主要由溫度的高低、時間長短和變化率決定，即與炒制溫度、炒制時間和最大炒藥量比重3個酒炙工藝參數有關，本實驗結果表明以上3個酒炙工藝對酒川牛膝的內外特征、終點藥溫有明顯影響。5-HMF是一種美拉德反應產物，主要由多糖類成分在高溫下反應生成，在含糖類中藥受熱炮制后易于生成，對發掘質量評價新指標和規范炮制工藝拓展了新思路[17-19]。研究可知，川牛膝飲片經酒炙后新增的3號峰為5-HMF，且終點藥溫、外在特征與5-HMF呈正相關性，其有望作為川牛膝酒炙過程中是否炒制和炒制程度的標志產物，對建立酒川牛膝質量標準和規范酒炙生產有參考意義。同時擬進一步采用液質聯用法對川牛膝酒炙前后變化的化學成分作進一步分析，以期鑒定更多酒炙特征性產物。

本研究考慮到外在特征判斷存在主觀誤差的缺陷，納入終點藥溫達130～140 ℃作為酒炙終點的客觀量化標準，體現了主客觀優劣互補的特質，具有準確、快速、簡便等特點，更符合工業化酒炙終點需快速判斷的實際情況。基于觀察外觀顏色易受主觀個體的差異性和不敏感性的影響，故易對炮制程度判斷產生偏差。近年來，有學者利用分光測色儀對中藥炮制前后或不同基原的傳統色澤評價進行量化分析，以探究飲片顏色值與其內在特征的客觀關聯性，為飲片的快速識別及質量評價體系建立提供參考[20-22]。本研究在完善川牛膝酒炙工藝研究的基礎上，擬進一步通過分光測色技術對川牛膝酒炙前后進行顏色值數字化研究，以期建立顏色值標準范圍并確立判別分析模型，為揭示酒川牛膝外觀顏色與內在特征相關性和質量快速評價提供科學客觀依據。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Exploring quantitative relationship and standardization research of wine stir-fry industrial technology ofbased on “fire heat”

SHI Chong-jing1, SONG Ying2, SHI Zheng-rong1, YUAN Qiang-hua2

1. Chengdu Integrated TCM&Western Medicine Hospital, Chengdu 610095, China 2. Teaching Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China

To explore the quantitative relationship between the wine stir-fry industrial technology of Chuanniuxi (, CR) and its its internal, external characteristics, the end point temperature, and to optimize the best wine stir-fry technology of CR and quantifying the end point of processed.The appearance color score was used to quantify the external characteristics; The internal characteristics were quantified by the 15 HPLC characteristic peak mass ratios determined by HPLC; The infrared thermometer was used to quantify the temperature of the end point drug temperature of the wine stir-fry industrial technology; The single factor method was used to explore the quantitative relationship between the amount of wine added, the soak time, the proportion of the maximum stir-fry amount, the stir-fry temperature, the stir-fry time, the rotation speed of the stir-fry tube at different levels and the appearance color, the HPLC characteristic peak, and the end point temperature of the wine stir-fry industrial technology of CR.The proportion of the maximum stir-fry amount, stir-fry temperature and stir-fry time had significant effects on the internal and external characteristics and the end point drug temperature, while the amount of wine added, the soak time and the rotation speed of the stir-fry tube had no significant effects on the internal and external characteristics and the end point drug temperature. The optimal wine stir-fry industrial technology of CR is as follows: take the CR slices with the maximum stir-fry amount of 40%, add 10% yellow rice wine to moisten for 2 h, put them in a drum stir-fry machine with a controlled temperature of 200 ℃ and a rotating speed of 15 r/min, fry for 20 min, and pour them out to cool. The drug temperature at the end point temperature of the wine stir-fry industrial technology is between 130—140 ℃.The optimized wine stir-fry industrial technology of CR is clear, reasonable and stable, easy to quantify the end point of processed, and suitable for wine stir-fry industrial technology of CR.

; fire heat; wine stir-fry industrial technology; internal and external characteristics; end point drug temperature; 5-hydroxymethylfurfural; cyasterone

R283.6

A

0253 - 2670(2023)15 - 4839 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.15.009

2023-02-28

國家中醫藥管理局國家中藥標準化項目（ZYBZH-Y-SC-41）；四川省中醫藥管理局中醫藥科學技術研究專項項目（2017ZY001）

施崇精（1995—），男，碩士研究生，主管中藥師，主要從事中藥藥劑與炮制研究。E-mail: 1124758663@qq.com

通信作者：袁強華，男，碩士研究生，主管中藥師，主要從事中藥藥劑與炮制研究。Tel: (028)87783257 E-mail: 369271467@qq.com

[責任編輯 鄭禮勝]