蒺藜果實(shí)化學(xué)成分及其抗氧化活性研究

劉曉敏，趙佳敏，蘭嘉豪，魏 婕，程子芥，梅 瀚，曹金鳳，劉世巍，趙江源，李銘剛，丁建海*

蒺藜果實(shí)化學(xué)成分及其抗氧化活性研究

劉曉敏1，趙佳敏1，蘭嘉豪1，魏 婕1，程子芥1，梅 瀚1，曹金鳳1，劉世巍1，趙江源2，李銘剛2，丁建海1*

1. 寧夏師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，寧夏 固原 756000 2. 云南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，云南 昆明 650091

研究蒺藜果實(shí)的化學(xué)成分及其抗氧化活性。綜合利用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜等分離手段進(jìn)行分離純化；結(jié)合NMR、MS、IR、UV等波譜學(xué)技術(shù)來(lái)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)；通過(guò)DPPH法、ABTS法以及羥基自由基清除方法測(cè)定化合物的抗氧化活性。從蒺藜果實(shí)75%甲醇提取物中分離鑒定了10個(gè)化合物，分別為()-4-hydroxy-N-(3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acryloyl)benzamide（1）、蒺藜酰胺（2）、海柯皂苷元（3）、25-螺甾-4-烯-3,12-二酮（4）、槲皮素（5）、3,4-二羥基-3-甲氧基苯丙酮（6）、對(duì)羥基苯甲酸（7）、(9,11)-13-hydroxy-9,11-octadecadienoic acid（8）、(8,12)-10-hydroxy-8,12-octadecadienoic acid（9）、肉豆蔻酸（10），其中化合物1～6對(duì)DPPH、ABTS自由基以及羥基自由基均有較顯著的活性，并且化合物5清除ABTS自由基和羥基自由基半數(shù)抑制濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）分別為0.011、0.320 mmol/L，與VC陽(yáng)性對(duì)照組的IC50值非常接近。化合物1為新化合物，命名為蒺藜酰亞胺D，化合物6～10均為首次從蒺藜屬植物中分離得到。化合物1～6清除自由基能力較強(qiáng)，具有較好的抗氧化活性。

蒺藜；蒺藜酰胺；蒺藜酰亞胺D；海柯皂苷元；槲皮素；抗氧化活性

蒺藜L為蒺藜科（Zygophyllaceae）蒺藜屬L草本植物[1]。《中國(guó)藥典》記載，蒺藜是一味臨床上廣泛應(yīng)用的中藥，以其干燥成熟果實(shí)入藥，有平肝解郁、活血祛風(fēng)、明目、止癢的功效[2]。在國(guó)外，蒺藜提取物早已被開(kāi)發(fā)成為增強(qiáng)性功能的“Tribustan”和“Vitanone”及軟化血管的“Tribusaponin”等制劑。國(guó)內(nèi)現(xiàn)代中藥提取分離和藥理學(xué)研究也表明，從蒺藜中分離到的甾體皂苷具有很好的改善心腦血管的作用，并且以蒺藜總皂苷為主要成分的制劑心腦舒通已在臨床取得了較好的療效[3]。

為進(jìn)一步揭示其藥理活性的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，本課題組對(duì)蒺藜果實(shí)的甲醇提取物進(jìn)行了化學(xué)成分研究，從中分離并鑒定出10個(gè)化合物，分別為()-4-hydroxy--(3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acryloyl) benzamide（1）、蒺藜酰胺（terrestriamide，2）、海柯皂苷元（hecogenin，3）、25-螺甾-4-烯-3,12-二酮（25-spirostan-4-ene-3,12-dione，4）、槲皮素（quercetin，5）、3,4-二羥基-3-甲氧基苯丙酮（3,4- dihydroxy-3-methoxyphenylacetone，6）、對(duì)羥基苯甲酸（-hydroxybenzoic，7）、(911)-13-hydroxy- 9,11-octadecadienoic acid（8）、(8,12)-10-hydroxy- 8,12-octadecadienoic acid（9）、肉豆蔻酸（myristic acid 10）。化合物1為新的酰胺類化合物，命名為蒺藜酰亞胺D，化合物6～10均為首次從蒺藜果實(shí)中分離得到。其中化合物1～6有較好的抗氧化活性效果。

1 儀器與材料

Bruker DRX-500 MHz超導(dǎo)核磁共振儀（德國(guó)Bruker公司）；ZF-20D型暗箱式紫外分析儀（上海光豪分析儀器有限公司）；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；API QSTAR Pulsari質(zhì)譜儀（加拿大Applied Biosystem公司）；PT-3502B型酶標(biāo)分析儀（北京普天新橋技術(shù)有限公司）；Agilent Cary 3500紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（美國(guó)安捷倫公司）；Thermo Scientific Nicolet iS5 FTIR傅里葉紅外光譜儀（KBr壓片，美國(guó)賽默飛公司）。Sephadex LH-20凝膠（瑞典Amersham Biosciences公司）；柱色譜硅膠（80～100、200～300目）和薄層色譜GF254TLC預(yù)制板（青島海洋化工廠）；甲醇、石油醚、二氯甲烷、-抗壞血酸（Vc）、2,2-聯(lián)苯基-1-苦基肼基（2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，DPPH）、2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽 [2,2-azinobis- (3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)，ABTS]、過(guò)氧化氫、硫酸亞鐵（分析純）均由上海麥克林生化科技有限公司；醋酸乙酯、乙醇、濃硫酸、氯化鈉、香草醛（分析純）均由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

實(shí)驗(yàn)用干燥蒺藜藥材于2022年5月購(gòu)自安徽毫州皖草堂藥店，藥材經(jīng)寧夏師范學(xué)院丁建海教授鑒定為蒺藜科植物蒺藜L果實(shí)，樣品標(biāo)本（20220506）現(xiàn)保存于寧夏師范學(xué)院天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

蒺藜果實(shí)10 kg粉碎，用等倍量75%甲醇浸漬提取3次，減壓濃縮，回收溶劑，得到甲醇提取物浸膏，將提取物浸膏用水分散均勻，依次用醋酸乙酯、正丁醇萃取，濃縮得各溶劑萃取部位。取醋酸乙酯萃取部分115 g，用80～100目的硅膠拌樣，200～300目正相硅膠裝柱，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫（1∶0～0∶1），薄層色譜檢識(shí)合并相同組分，得到7個(gè)精細(xì)組分（Fra. 1～7）。Fra.3通過(guò)正相硅膠柱色譜，二氯甲烷為洗脫劑得到3個(gè)亞組分（Fra. 3-1～3-3），F(xiàn)ra. 3-1經(jīng)過(guò)重結(jié)晶得到化合物2（12.1 mg），F(xiàn)ra. 3-2經(jīng)過(guò)Sephadex LH-20凝膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇1∶1）純化得到化合物9（10.5 mg）、10（10.1 mg）。Fra. 4經(jīng)正相硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（100∶1）洗脫得到4個(gè)亞組分（Fra. 4-1～4-4），F(xiàn)ra. 4-3經(jīng)過(guò)Sephadex LH-20凝膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇1∶1）純化，得到化合物8（5.6 mg）、11（3.2 mg），F(xiàn)ra. 4-4經(jīng)過(guò)重結(jié)晶得到3（12.1 mg）。Fra. 5經(jīng)正相硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（80∶1～40∶1）洗脫得到3個(gè)亞組分（Fra. 5-1～5-3），F(xiàn)ra. 5-2經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜（甲醇）分離純化，得到化合物1（10.8 mg），F(xiàn)ra. 5-3再經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇1∶1）分離純化，得到化合物4（12.7 mg）。Fra. 6經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜（甲醇）純化，得到化合物5（6.3 mg）、6（8.8 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無(wú)定形粉末，分子式C17H15NO5。HR-ESI-MS給出分子離子峰336.123 7 [M＋Na]+，確定分子式為C17H15NO5，計(jì)算不飽和度為11。IR譜圖顯示出明顯的吸收峰（3379、1655和1580 cm?1），暗示該化合物結(jié)構(gòu)中應(yīng)該含有酚羥基和酰胺基團(tuán)，UV譜圖顯示出2個(gè)明顯得吸收峰（240、320）nm，暗示該化合物結(jié)構(gòu)中應(yīng)該含有雙鍵和胺基。1H-NMR (400 MHz, CD3OD) 數(shù)據(jù)H7.89 (1H, d,= 8.7 Hz), 6.84 (2H, d,= 8.7 Hz), 6.82 (1H, d,= 8.7 Hz)，表明結(jié)構(gòu)中存在2個(gè)對(duì)位取代的苯環(huán)；H7.50 (1H, d,= 15.8 Hz), 6.47 (1H, d,= 15.8 Hz) 表明結(jié)構(gòu)中存在1個(gè)反式雙鍵。13C-NMR (100 MHz, CD3OD) 數(shù)據(jù)中顯示有15個(gè)碳信號(hào)，結(jié)合DEPT譜和HSQC譜，歸屬為1個(gè)甲氧基，9個(gè)次甲基，5個(gè)季碳。其中2個(gè)與氮或氧相連的羰基碳信號(hào)C170.2 (C-9), 168.7 (C-1) 占有2個(gè)不飽和度，2個(gè)雙鍵碳信號(hào)C141.8 (C-7), 116.7 (C-8) 占1個(gè)不飽和度，剩下的8個(gè)不飽和度為2個(gè)苯環(huán)，故推測(cè)該化合物具有蒺藜酰胺骨架。1H-1H COSY譜中,H7.07 (dd,= 8.2, 1.9 Hz, H-2) 與6.82 (d,= 8.2 Hz, H-3);H7.50 (d,= 15.8 Hz, H-7)與6.47 (d,= 15.8 Hz, H-8);H7.89 (d,= 8.7 Hz, H-3) 與6.82 (d,= 8.7 Hz, H-4) 有相關(guān)，可連接成3個(gè)小片段。在HMBC譜中，H6.47 (1H, d,= 15.8 Hz, H-8) 與C126.7 (C-1), 170.2 (C-9) 相關(guān)，H7.50 (d,= 15.8 Hz, H-7) 與C122.0 (C-2), 116.7 (C-8), 170.2 (C-9) 相關(guān)，表明雙鍵既與苯環(huán)相連又和羰基相連。H7.89 (2H, d,= 8.7 Hz, H-3') 與C168.7 (C-1') 相關(guān)，表明羰基和另一個(gè)苯環(huán)相連。在ROESY譜中，H3.89 (s, OCH3) 甲氧基質(zhì)子與H7.14 (d,= 1.9 Hz, H-6) 存在相關(guān)，表明甲氧基位于C-6相鄰位，即甲氧基位于C-5位且與羥基相鄰（圖1-1a）。結(jié)合ESI-MS (+): 336.123 7 [M＋Na]+，可以推出片段1a和2a由NH連接（圖1-3a）。

圖1 化合物1的結(jié)構(gòu)片段

綜合1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、1H-1H COSY、ROESY等信息，推得化合物1的結(jié)構(gòu)為()-4-hydroxy--(3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) acryloyl) benzamide，如圖2所示，具體NMR信息見(jiàn)表1。經(jīng)SciFinder Scholar網(wǎng)絡(luò)檢索，該化合物為未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物，命名為蒺藜酰亞胺D。

圖2 化合物1的結(jié)構(gòu)及重要HMBC、1H-1H COSY相關(guān)

化合物2：針狀結(jié)晶（二氯甲烷-甲醇），分子式為C18H17NO5。HR-ESI-MS/350.141 9。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 7.90 (2H, d,= 8.8 Hz, H-4′, 8′), 7.35 (1H, t,= 8.8 Hz, H-7), 7.17 (1H, t,= 2.9 Hz, H-2), 7.02 (2H, dd,= 5.2, 3.2 Hz, H-5′, 7′), 6.70 (1H, m, H-8), 4.66 (2H, d,= 5.5 Hz, H-1′), 3.82 (3H, s, H-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 193.4 (C-2′), 165.8 (C-9), 162.4 (C-6′), 148.4 (C-4), 147.9 (C-3), 139.5 (C-7), 130.4 (C-4′, 8′), 126.6 (C-1), 126.4 (C-3′), 121.7 (C-6), 118.7 (C-8), 115.7 (C-5), 115.4 (C-5′), 115.1 (C-7′), 110.9 (C-2), 55.6 (OCH3), 45.6 (C-1′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[4]，故鑒定化合物2為蒺藜酰胺。

表1 化合物1的核磁數(shù)據(jù)(400/100 MHz, CD3OD)

化合物3：片狀結(jié)晶（二氯甲烷-甲醇），分子式為C27H42O4。HR-ESI-MS/431.318 4。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 3.65～3.54 (1H, m, H-3), 3.48 (1H, dd,= 10.5, 2.1 Hz, H-26a), 3.34 (1H, t,= 10.9 Hz, H-26b), 1.05 (6H, d,= 9.5 Hz, H-21), 0.89 (3H, s, H-19), 0.78 (3H, d,= 6.3 Hz, H-27)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 213.7 (C-12), 109.3 (C-22), 79.3 (C-16), 71.0 (C-3), 67.0 (C-26), 55.9 (C-14), 55.6 (C-9), 55.2 (C-13), 53.6 (C-17), 44.7 (C-5), 42.2 (C-20), 38.0 (C-4), 37.9 (C-11), 36.6 (C-1), 36.2 (C-10), 34.4 (C-8), 31.6 (C-15), 31.5 (C-7), 31.3 (C-23), 31.2 (C-2), 30.3 (C-25), 28.8 (C-24), 28.4 (C-6), 17.2 (C-27), 16.1 (C-18), 13.4 (C-21), 12.0 (C-19)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[5]，故鑒定化合物3為海柯皂苷元。

化合物4：針狀結(jié)晶（甲醇），分子式為C27H38O4。HR-ESI-MS/427.288 3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.78 (1H, s, H-4), 3.55 (1H, m, H-26a), 3.35 (1H, t,= 10.9 Hz, H-26b), 1.28 (3H, s, H-18), 1.12 (3H, s, H-19), 1.08 (3H, d,= 7.0 Hz, H-21), 0.80 (3H, d,= 6.3 Hz, H-27)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 212.1 (C-12), 198.9 (C-3), 168.6 (C-5), 124.7 (C-4), 109.3 (C-22), 79.0 (C-16), 66.9 (C-26), 54.8 (C-14), 54.8 (C-9), 54.5 (C-13), 53.5 (C-17), 42.2 (C-20), 38.8 (C-10), 37.1 (C-11), 35.3 (C-1), 34.4 (C-8), 33.7 (C-6), 32.4 (C-2), 31.4 (C-15), 31.2 (C-23), 31.1 (C-7), 30.2 (C-25), 28.8 (C-24), 17.1 (C-27), 16.9 (C-19), 16.0 (C-18), 13.3 (C-21)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[6]，故鑒定化合物4為25-螺甾4-烯-3,12-二酮。

化合物5：黃色粉末，分子式為C15H10O7。HR-ESI-MS/301.136 7。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.75 (1H, d,= 2.1 Hz, H-2'), 7.65 (1H, dd,= 8.5, 2.1 Hz, H-6'), 6.90 (1H, d,= 8.5 Hz, H-5'), 6.41 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 6.20 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 161.1 (C-5), 97.8 (C-6), 164.2 (C-7), 93.0 (C-8), 156.8 (C-9), 103.1 (C-10), 122.7 (C-1), 114.6 (C-2), 144.8 (C-3), 147.4 (C-4), 114.8 (C-5), 120.3 (C-6), 146.6 (C-2), 135.8 (C-3), 175.9 (C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]，故鑒定化合物5為槲皮素。

化合物6：淡黃色油狀物，分子式為C10H12O4。HR-ESI-MS/195.066 9。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.55 (1H, t,= 3.2 Hz, H-6), 7.53 (1H, s, H-2), 6.95 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 4.01 (2H, d,= 4.2 Hz, H-9), 3.95 (3H, d,= 6.2 Hz, -OCH3), 3.18 (2H, t,= 5.3 Hz, H-8)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 199.3 (C-1), 150.9 (C-4), 146.8 (C-3), 129.8 (C-1), 123.8 (C-6), 114.1 (C-5), 109.7 (C-2), 58.4 (C-3), 56.2 (OCH3), 39.9 (C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8]，故鑒定化合物6為3,4-二羥基-3-甲氧基苯丙酮。

化合物7：黃色粉末，分子式為C7H6O3。HR-ESI-MS/137.024 7。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 8.03 (2H, 2H, d,= 8.2 Hz, H-2, 6), 6.90 (2H, d,= 8.2 Hz, H-3, 5)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 168.6 (C-1), 163.7 (C-1), 132.8 (C-2, 6), 115.2 (C-3, 5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]，故鑒定化合物7為對(duì)羥基苯甲酸。

化合物8：黃色油狀，分子式為C18H32O3。HR-ESI-MS/350.141 9。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.50 (1H, m, H-12), 5.99 (1H, m, H-10), 5.65 (1H, m, H-11), 5.46 (1H, m, H-9), 4.16 (1H, dd,= 13.9, 6.9 Hz, H-13), 0.90 (3H, t,= 6.2 Hz, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 179.3 (C-1), 135.7 (C-12), 133.2 (C-9), 127.7 (C-11), 126.0 (C-10), 73.0 (C-13), 37.3 (C-14), 34.0 (C-2), 31.8 (C-16), 29.3 (C-7), 29.3 (C-6), 29.2 (C-5), 29.0 (C-4), 27.8 (C-8), 25.3 (C-15), 24.7 (C-3), 22.6 (C-17), 14.1 (C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]，故鑒定化合物8為 (9,11)-13-hydroxy-9,11-octadecadienoic acid。

化合物9：黃色油狀物，分子式為C18H32O3。HR-ESI-MS/313.273 4。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.03 (1H, m, H-12), 6.00 (1H, m, H-9), 5.68 (1H, m, H-10), 5.46 (1H, m, H-8), 4.19 (1H, dd,= 13.9, 6.9 Hz, H-13), 0.90 (3H, t,= 6.2 Hz, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 179.3 (C-1), 133.1 (C-8), 132.4 (C-9), 132.1 (C-13), 124.7 (C-12), 72.6 (C-10), 35.4 (C-11), 33.9 (C-7), 31.9 (C-2), 31.3 (C-16), 29.4 (C-15), 29.3 (C-4), 29.0 (C-6), 29.0 (C-5), 27.4 (C-14), 24.6 (C-3), 22.2 (C-17), 13.9 (C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[12]，故鑒定化合物9為 (8,12)-10-hydroxy-8,12-octadecadienoic acid。

化合物10：白色固體，分子式為C14H28O2。HR-ESI-MS/229.063 4。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 2.36 (2H, t,= 7.5 Hz, H-2), 1.64 (2H, m, H-3), 1.29 (20H, brs, H-4～13), 0.89 (3H, t,= 6.8 Hz, H-14)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 180.3 (C-1), 34.1 (C-2), 32.0 (C-12), 29.7～29.1 (C-4～11), 24.7 (C-3), 22.7 (C-13), 14.2 (C-14)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[13]，故鑒定化合物10為肉豆蔻酸。

4 抗氧化活性測(cè)定與評(píng)價(jià)

4.1 DPPH法抗氧化活性的測(cè)定

將不同質(zhì)量濃度的樣品溶液（0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 mg/mL）100 μL與0.5 mmol/L的DPPH母液100 μL加入96孔酶標(biāo)板中，避光保存30 min后測(cè)定在517 nm下的吸光度值（1），并用無(wú)水乙醇代替DPPH設(shè)置待測(cè)樣品空白對(duì)照組，吸光度值為2，以及DPPH空白對(duì)照組，吸光度值為0。VC作為陽(yáng)性對(duì)照，重復(fù)3次，根據(jù)公式計(jì)算DPPH自由基清除率[14]。

DPPH自由基清除率＝1－(1－2)/0

4.2 ABTS法抗氧化活性的測(cè)定

將7 mmol/L的ABTS與2.45 mmol/L的過(guò)硫酸鉀等體積混合，室溫條件黑暗處反應(yīng)12～16 h。第2天用無(wú)水乙醇稀釋40～60倍（在734 nm處為0.70左右），搖勻，靜置5 min，制成ABTS自由基工作液。將不同質(zhì)量濃度的樣品溶液（0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 mg/mL）100 μL與制得的ABTS溶液100 μL加入96孔酶標(biāo)板中，避光保存30 min后測(cè)定在734 nm下的吸光度值（1′），并用無(wú)水乙醇代替ABTS設(shè)置待測(cè)樣品空白對(duì)照組吸光度值為2′，以及ABTS空白對(duì)照組，吸光度值為0′。VC作為陽(yáng)性對(duì)照，重復(fù)3次，根據(jù)公式計(jì)算ABTS自由基清除率[14]。

ABTS自由基清除率＝1－(1′－2′)/0′

4.3 羥基自由基清除法抗氧化活性的測(cè)定

將不同質(zhì)量濃度的樣品（0.33、0.20、0.14、0.11、0.01 mg/mL）、2.50 mmol/L的水楊酸、5.00 mmol/L 的FeSO4·7H2O、1%過(guò)氧化氫（1∶1∶1∶1）混合于96孔酶標(biāo)板中，37 ℃恒溫水浴30 min后，在510 nm下測(cè)定吸光度值（1′′），并用蒸餾水代替過(guò)氧化氫設(shè)置待測(cè)樣品空白對(duì)照組，吸光度值為2′′，以及蒸餾水、水楊酸、FeSO4·7H2O、過(guò)氧化氫（1∶1∶1∶1混合）為空白對(duì)照，吸光度值為0′′。VC作為陽(yáng)性對(duì)照，重復(fù)3次，根據(jù)公式計(jì)算羥基自由基清除率[15]。

羥基自由基清除率＝1－(1－2)/0

4.4 抗氧化活性評(píng)價(jià)

抗氧化活性的測(cè)試結(jié)果顯示，化合物7～10無(wú)抗氧化活性（IC50＞50 mmol/L），化合物1～6的抗氧化活性檢測(cè)結(jié)果如表1所示，其中酰胺類對(duì)DPPH、ABTS、OH自由基3種抗氧化測(cè)試均具有較好的活性；甾體皂苷類對(duì)DPPH、ABTS 2種抗氧化活性測(cè)試效果不明顯，但是對(duì)OH自由基卻具有較好的效果；黃酮類和苯丙素類對(duì)3種抗氧化測(cè)試均具有較好的活性。在一定范圍內(nèi)，這6個(gè)化合物對(duì)3種抗氧化活性的清除能力，隨著物質(zhì)的量濃度的增加而增加，呈明顯量效關(guān)系。

表1 化合物1～6的體外清除自由基能力結(jié)果(n = 3)

5 討論

近年來(lái)，我國(guó)關(guān)于蒺藜化學(xué)成分的研究報(bào)道較多，已經(jīng)從蒺藜全草、果實(shí)、地上部分等得到了多種單體化合物，蒺藜根、莖、葉、花、果實(shí)均可入藥，《中國(guó)藥典》收載了蒺藜果實(shí)作為藥材，其具有抗衰老、抗菌、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)血脂、降血糖、抑癌、利尿、性強(qiáng)壯、抑制酪氨酸酶等藥理作用，通過(guò)文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，對(duì)分離得到的化合物抗氧化活性研究卻很少有報(bào)道。因此，尋找單體化合物的抗氧化方面的活性成分，和研究活性成分的作用機(jī)制將對(duì)蒺藜藥材的進(jìn)一步應(yīng)用與開(kāi)發(fā)具有著非常重的要意義。

本研究從蒺藜果實(shí)中分離并鑒定出2個(gè)酰胺類、2個(gè)甾體皂苷類、1個(gè)黃酮類、1個(gè)苯丙素類。還有脂肪酸等10個(gè)化合物。化合物1為新的酰胺類化合物，命名為蒺藜酰亞胺D，化合物6～10均為首次從蒺藜果實(shí)中分離得到。進(jìn)一步，本實(shí)驗(yàn)對(duì)化合物進(jìn)行了抗氧化活性評(píng)估，結(jié)果顯示化合物1～6具有較好的抗氧化活性效果，其中槲皮素對(duì)ABTS和OH自由基抗氧化活性的效果最好，IC50分別為0.011、0.32 mmol/L，與VC陽(yáng)性對(duì)照組的IC50值幾乎一致；而甾體皂苷類化合物對(duì)DPPH、ABTS兩種抗氧化活性測(cè)試效果一般IC50＞50 mmol/L，但是對(duì)OH自由基具有較好的效果IC50為（7.519±0.480）、（8.362±0.110）mmol/L。本研究的結(jié)果豐富了蒺藜的化學(xué)成分以及抗氧化活性研究，為蒺藜抗氧化的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Chemical constituents from fruits ofand their antioxidant activity

LIU Xiao-min1, ZHAO Jia-min1, LAN Jia-hao1, WEI Jie1, CHENG Zi-jie1, MEI Han1, CAO Jin-feng1, LIU Shi-wei1, ZHAO Jiang-yuan2, LI Ming-gang2, DING Jian-hai1

1. College of Chemistry and Chemical Engineering, Ningxia Normal University, Guyuan 756000, China 2. School of Life Sciences, Yunnan University, Kunming650091, China

To investigate the chemical constituents from fruits ofand their antioxidant activity.The compounds were isolated and purified by silica gels column chromatography and Sephadex LH-20 column chromatography. Their structures were identified based on NMR, MS, IR, UV and other spectroscopic techniques. Their antioxidant activity were evaluated by scavenging capacity on DPPH, ABTS and ·OH radicals.Ten compounds were isolated from 75% methanol extract of the fruits ofand identified as ()-4-hydroxy--(3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) acryloyl)benzamide (1), tribulusamide (2), hecogenin (3), 25-spirostan-4-ene-3,12-dione (4), quercetin (5), 3,4-dihydroxy- 3-methoxyphenylacetone (6),-hydroxybenzoic acid (7), (9,11)-13-hydroxy-9,11-octadecadienoic acid (8), (8,12)-10-hydroxy- 8,12-octadecadienoic acid (9), and myristic acid (10). Compounds 1—6 had the stronger DPPH, ABTS and OH radicals scavenging abilities and compound 5 showed significant abilities with IC50values of 0.011 and 0.320 mmol/L. The IC50values were almost consistent with that of the VCpositive control group.Compound 1 is a new compound, named tribulusimide D. Compounds 6—10 are isolated from fruits offor the first time and also from the fruit offor the first time. The antioxidant activity experiment showed that compounds 1—6 exhibited significant scavenging capacity.

L.; tribulus amide; tribulusimide D;hecogenin;quercetin; antioxidant activity

R284.1

A

0253 - 2670(2023)15 - 4774 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.15.002

2023-04-02

寧夏自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2022AAC02049）；寧夏自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2022AAC03297）；寧夏高等學(xué)校科學(xué)研究項(xiàng)目（NGY2022073）；寧夏師范學(xué)院2022年度大學(xué)生科技創(chuàng)新基金項(xiàng)目（自然科學(xué)類Z202202）

劉曉敏（1997—），女，碩士研究生，主要從事天然藥物化學(xué)研究。E-mail: 849064934@qq.com

通信作者：丁建海，教授。E-mail: dingjh_nx@126.com Tel: 18809544664

[責(zé)任編輯 王文倩]