尿液HCMV-DNA聯合血清HCMV-IgM檢測在患兒HCMV感染中的診斷價值分析

王鑫 楊柳 王瀟翊

（1.商丘市第一人民醫院分子生物實驗室，河南 商丘 476000；2.商丘市第一人民醫院輸血科，河南商丘 476000）

巨細胞病毒感染由人類巨細胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）感染引起，我國為HCMV感染高發地區，多于兒童時期獲得。早期多數感染者無明顯癥狀，但先天感染和免疫抑制個體可引起嚴重疾病，嬰幼兒期感染常累及肝臟，故及時診斷對患兒治療具有重要意義[1]。由于HCMV感染無典型的臨床癥狀，僅靠臨床表現無法完全明確診斷，需結合其他方法進行診斷。隨著實驗室檢驗技術發展，用于HCMV檢測方法也在與時俱進，主要包括血液學檢查、尿液檢查、腦脊液檢查。但由于國內大部分醫院并未完全普及病毒分離培養法診斷HCMV感染；同時嬰幼兒兒童產生免疫球蛋白（IgM）抗體能力薄弱，使用酶聯免疫吸附法檢測HCMV-IgM準確率低，而IgM陰性不代表患兒無HCMV感染的可能性[2]。這些因素給HCMV感染的診斷帶來了一定難度。

國外有學者認為由于病毒DNA的出現通常早于病毒感染的臨床癥狀或血清學反應，因此，熒光定量PCR技術目前已成為一種能早期、敏感地發現HCMV感染的診斷方法[3]。基于此，本文旨在分析尿液HCMV-DNA聯合血清HCMV-IgM檢測在患兒HCMV感染中的診斷效能。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2019年7月-2022年8月收治HCMV感染患兒112例為研究對象。112例感染患兒中，男55例，女57例，年齡3d-12 m，平均年齡99.17±10.59d。根據主訴、體格檢查及第一臨床診斷可將HCMV感染患兒進一步分為肺炎組（n=68）、肝炎組（n=26）及其他組（n=18，主訴主要為發熱、腹瀉等）。其中肝炎組男36例，女32例，年齡3d-89 d，平均年齡76.53±8.16 d；肺炎組男11例，女15例，年齡30d-210 d，平均年齡（112.43±9.04）d；其他組男8例，女10例，年齡53d-360 d，平均年齡112.43±9.04 d。納入標準：經臨床確診為HCMV感染；臨床相關資料完整；排除標準：合并遺傳性疾病者；合并其他器官并發癥者；近期使用過抗HCMV藥物者。本研究經本院倫理委員會批準，且患者及家屬同意本研究。

1.2 方法

1.2.1 尿液HCMV-DNA

早上收集研究對象3-5ml的尿液，放入無菌離心管中，離心（12000 rpm，10 min），棄上清，加入50 μL核酸釋放劑，與沉淀震蕩混勻，備用。取備用樣本10 μL，加入40μLPCR反應混合物中，擴增條件：93℃，2 min，預變性；93℃45 s-55℃，15 min，10個循環；93℃30 s—55℃45 s，30個循環。HCMV陽性參考2012年中華醫學會兒科分會制訂的《HCMV感染診斷和防治指南》，反應在上海宏石SLAN-96P全自動熒光定量PCR儀上進行，根據標準曲線分析并計算HCMV—DNA拷貝數[4]。

1.2.2 血清HCMV-IgM

研究對象于晨起抽取空腹靜脈血2 mL，行離心（15000 rpm，10 min），取上清液，放置-20℃保存，采用化學發光法檢測血清HCMV-IgM，試劑盒來自德國Roche公司提供，操作嚴格按照說明書進行。

1.3 觀察指標

（1）HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM的檢測結果；（2）不同性別HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結果（3）不同疾病組尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結果；（4）不同年齡HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結果。

1.4 統計學方法

本研究數據均采用SPSS21.0統計學軟件進行分析，計量資料用（±SD）表示，比較采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HCMV感染患兒的尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結果

尿液HCMV-DNA陽性率為30.35%，血清HCMV-IgM陽性率為33.03%，兩者聯合檢測陽性率為87.50%；聯合檢測水平高于單一檢測。表1。

表1 尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測陽性率比較

2.2 不同性別HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結果

觀察組不同性別之間HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及兩者聯合檢測結果均無統計學差異（χ2=0.082，0.004，0.413；P＞0.05）。

2.3 不同疾病組HCMV感染患兒尿液HCMVDNA、血清HCMV-IgM檢測結果

肝炎組尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及兩者聯合檢出陽性率均高于肺炎組和其他組；且其他組尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及兩者聯合檢出陽性率低于肺炎組（χ2=24.243，24.727，27.645；P＜0.05）。見表3。

表3 不同疾病組尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結果[n(%)]

2.4 不同年齡HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結果

＞180 d尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及兩者聯合檢出陽性率均高于＜90 d和90 d-180 d；且90 d-180 d尿液HCMV-DNA、血清HCMVIgM及兩者聯合檢出陽性率均高于＜90d（χ2=14.133，6.114，8.189；P＜0.05）。見表3。

表4 不同年齡HCMV感染患兒尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM檢測結果[n(%)]

3 討論

HCMV感染十分普遍，除少數原發性感染發生原發性單核細胞增多癥外，極大多數為隱性感染；HCMV感染可導致多個器官出現損傷，如肝臟發生炎癥、泌尿生殖系統感染、引發肺、中樞神經系統和血液循環發生病變[5]。然而HCMV感染臨床表現缺乏特異性，僅靠其并不能完全提供診斷依據，需依靠實驗室檢查進行輔助診斷。

在出生最初3 w的新生兒尿液、呼吸道分泌物或者其他體液分離出HCMV是先天性感染最敏感和特異的確診依據[6]。PCR在用于監測免疫抑制病人的HCMV感染時，其敏感性高于病毒分離和抗原血清檢測，而尿液所含的病毒量較高，因此為首選的標本[7]。本次研究應用PCR技術對HCMV感染患兒檢查尿液HCMV-DNA，發現觀察組尿液HCMV-DNA陽性率為30.35%（34/112），說明HCMV感染普遍存在。有研究表明HCMVDNA陽性可早期預測HCMV感染存在，但僅此無法完全區別潛伏感染和活動性感染，其原因在于HCMV-DNA拷貝數重疊范圍廣，尚未明確DNA拷貝界限[7,8]。目前臨床常檢測血清HCMV IgM作為HCMV近期感染的重要依據。已有充分臨床證據證實抗HCMV IgM抗體檢測陽性表明機體近期存在活動性感染，如果同時抗HCMVIgG抗體陰性，則表明是HCMV原發性感染[7,8]。HCMV-IgG抗體陽性表明有既往感染，血清IgG抗體陽性轉化表明是原發感染，而連續監測IgG滴度急劇升高表明存在HCMV活動性感染[7,8]。本次研究顯示觀察組血清HCMV-IgM陽性率為33.03%（37/112），說明其可準確判斷HCMV感染狀態，為治療提供一定依據；但其抗體本身代謝規律及檢測方法具有一定局限性。而本次結果顯示尿液兩者聯合檢測陽性率為87.50%，說明兩者結合檢測陽性率高于單一檢測，且可全面評估患兒HCMV感染狀態。HCMV的感染可通過改變宿主細胞的凋亡、增殖和免疫反應等方式來破壞內穩態平衡，進而參與多種疾病的發生。嬰兒免疫系統薄弱，抑制HCMV入侵能力低下，極易受到感染，且感染后大部分患兒易出現不同程度的肝膽受損和間質性肺炎[9]。本次研究顯示肝炎組尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及兩者聯合檢出陽性率均高于肺炎組和其他組；說明肝臟極大可能是患兒易受到巨細胞病毒感染的器官。

有研究表明年齡越低的嬰幼兒免疫系統不成熟，其產生IgM的能力也越低，故其假陰性多[7-9]。鑒于此，本文猜想通過尿液HCMV-DNA聯合血清HCMV-IgM檢測巨細胞病毒感染，發現＞180d尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及兩者聯合檢出陽性率均高于＜90 d和90 d-180 d，且其中兩者檢測陽性率高于單一檢測，提示尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM與年齡具有一定聯系，且再次間接證實兩者聯合檢測陽性率更高，原因可能是隨著孩子年齡的增長，腎臟較強的濃縮能力與接觸病原菌的概率增加相關[9,10]。

綜上所述，尿液HCMV-DNA聯合血清HCMV-IgM檢測在患兒HCMV感染中的診斷效能高，結合臨床表現可全面判斷患兒HCMV感染狀態。