Septin9基因甲基化檢測對腫瘤風險篩查的價值分析

朱莉莉 李巖

（1.河南科技大學附屬許昌市中心醫院健康管理中心，河南 許昌 461000；2.河南科技大學附屬許昌市中心醫院消化內科，河南 許昌 461000）

腫瘤是機體細胞異常增生形成的一類疾病。結直腸癌作為一類較為常見的惡性腫瘤，近年來發病率和死亡率均呈現出明顯上升趨勢，而惡性腫瘤的早期篩查是發現和治療的重要手段[1]。

體檢作為人們篩查潛在疾病的一種常用手段，能夠提高認門早期識別疾病風險并進行治療，但在常規體檢項目中，對腫瘤風險篩查的項目較少。結腸鏡雖作為檢測結直腸癌的“金標準”，但由于其侵入性操作使得其很少作為健康人群的篩查腫瘤的方式，而糞便隱血試驗由于方便自身的性狀以及容易受其余疾病影響大的特點也無法滿足早期結直腸癌的篩查。

YKL-40作為一種潛在的腫瘤標志物，已有眾多研究證實了其在篩查結腸癌中的價值[2-3]。Septin9基因的結直腸癌的發生發展具有密切聯系，能作為結直腸癌的特異性腫瘤標志物[4]，因兩種檢測樣本僅需抽取體檢人群的外周靜脈血，無需健康體檢人群進行其他有創操作使得其接受度較高，能夠將其作為健康體檢人群篩查結直腸癌的體檢項目，無需健康體檢人群進行其他有創操作使得其接受度較高。

為了進一步研究兩種檢測方法在健康人群中的應用價值，其本文將進一步對在我院實施Septin9基因甲基化和血清YKL-40檢測的健康人群篩查結直腸癌的數據進行進一步分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究由本院醫學倫理會批準。選取2021年5月～2022年8月于本院健康管理中心行Septin9基因甲基化檢測的健康體檢人群462例為研究對象，其中男256例，女206例。納入標準：年齡18～80歲。體檢人群均簽署知情同意書。排除標準：①已確診的腫瘤患者；②合并其他嚴重心、肺功能疾病的患者；③合并血液系統以及凝血功能的疾病。

1.2 方法

1.2.1 標本采集

在早晨體檢人群空腹時用K2EDTA真空10 mL抗凝管（紫帽）和EDTA管分別采集外周靜脈血10 mL和4 mL。

1.2.2 Septin9基因甲基化檢測

將用K2EDTA管采集的10 mL血液標本在2-8℃的條件下保存并在4 h內進行血漿制備，血漿制備采用離心機，以1350±150 g的相對離心力離心全血標本12 min最終完成血漿分離，將離心后的血漿使用移液管轉移3.5 mL至另一全新離心管中，該血漿標本于-15至-25℃的條件下保存，4 w內完成檢驗。

嚴格按照試劑說明書進行血漿樣本提取、DNA硫化處理、洗脫以及PCR反應等步驟對血漿樣本進行檢測，最后依據定量結果的Ct值進行判斷，當3次平行PCR反應中2次結果Septin9基因Ct值＜45時判斷結果為陽性。本研究所用Septin9基因甲基化檢測試劑盒由上海羽哚生物科技有限公司生產的人Septin9基因甲基化DNA檢測試劑盒（PCR熒光法）。

1.2.3 血清YKL-40檢測

將用EDTA管采集到的4 mL血液標本先靜置10 min，接著采用由上海昀冠機電設備有限公司生產的H/T12MM型血液離心機分離出血清，并將其先置于—70℃的條件下保存。接著用使用酶聯免疫吸附法實驗方法進行血清YKL-40檢測并選擇河北柏世林科技公司生產的人YKL-40試劑盒，根據說明書步驟嚴格進行操作，最后根據繪制出的吸光濃度以及標準品濃度繪制曲線并計算出兩者的回歸方程，最后算出血清YKL-40的檢測值，最后以131.27 μg·L-1為臨界值[5]，血清YKL-40值小于131.27 μg·L-1為陰性和血清YKL-40值大于131.27 μg·L-1為陽性。

1.3 觀察指標

（1）兩種方法檢出陽性率比較；（2）兩種方法與腸鏡結果符合率比較；（3）兩種檢測方法在不同年齡人群之中的差異。

1.4 統計學分析

本研究所有數據均用SPSS19.0分析，計數資料百分數（%）表示，卡方檢驗；計量資料（±s）表示，t檢驗，等級資料用秩和檢驗，P＜0.05時即差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法檢出陽性率比較

分析結果發現，使用顯示Septin9基因甲基化的陽性檢出率為14.07%（65/462例）大于YKL-40檢出率為9.09%（42/462例），Septin9基因甲基化的陽性檢出率優于YKL-40陽性檢出率（P＜0.05)，見表1。

表1 兩種檢測方法在不同年齡人群中的篩查差異[n（%)]

表1 兩種方法檢出陽性率比較兩種檢測

2.2 兩種方法與腸鏡結果符合率比較

Septin9基因甲基化檢測65例陽性人群之中23例進行腸鏡檢查，有13人顯示結果異常，其符合率為56.52%；CEA檢測42例陽性人群之中14例進行腸鏡檢查，有3人顯示結果異常，其符合率為21.43%。Septin9基因甲基化檢測方法與腸鏡的符合率大于血清YKL-40檢測與腸鏡的符合率（P＜0.05)，見表2。

表2 兩種檢測與腸鏡符合率比較[n（%)]

2.3 兩種檢測方法的特異性和靈敏度比較

比較兩種檢測方法在不同年齡人群中的篩查差異。根據年齡將篩查人群分為低齡組（＜50歲）193人和高齡組（≥50歲）269人。Septin9檢測在高齡組的檢查率高于低齡組（P＜0.05)，而CEA檢測在不同年齡的篩查人群中差異無統計學意義（P＞0.05）。

3 討論

結直腸癌是消化系統常見的惡性腫瘤之一，具有較高的死亡率[6]。因其早期無明顯癥狀，大多數患者僅表現出腹瀉、便秘以及排便時里急后重等非特異癥狀，所以只有極少部分患者會在早期確診，而早期診斷結直腸癌是有效改善其預后并降低死亡率的重要舉措。

體檢是對未病和將病的健康人群早期發現疾病線索和健康隱患的重要手段，對患者早期診斷疾病具有重要意義。

電子纖維腸鏡檢查雖然是結直腸癌診斷的金標準，但存在許多缺點：

① 要求受檢人群進行長時間腸道準備；

② 作為一項侵入性操作，對患者的身體具有較大的損傷；

③ 存在一定的局限性，有禁忌癥的人群并不能進行此項檢查。

因此該檢查在人群中接受度較小，不能用于健康人群的體檢篩查。

Septin9基因甲基化作為結直腸癌的重要生物學特征且具有采樣方便、無創傷以及依從性好等特點，將其應用于健康人群體檢項目作為早期篩查結直腸癌成為可能。Septin基因家族是能在胞質分裂和細胞極化發揮重要作用且具有 GTP酶活性的基因家族[7]。

當Septin9基因甲基化程度升高，基因表達將被抑制，導致編碼蛋白數量減少、結構穩定性減弱，最終促進細胞發生癌變[8]。外周血中Septin9基因發生的甲基化可以通過DNA的特異擴增而被檢測到。在多個經腸鏡確診的結直腸癌病例和陰性對照的研究報道中，均表明在結直腸癌病人的血漿中通過檢測Septin9基因的甲基化可有效檢測到早期癌細胞的DNA。

因此，Septin9基因甲基化能夠作為篩查結直腸癌的重要指標，在健康人群中的篩查具有重要意義。其優勢之處在于：相比傳統檢查更為私密，接受度更高。采樣方便快捷且創傷小，只需采集一管外周血。

本研究發現Septin9基因甲基化對結直腸病變的陽性檢出率高于YKL-40陽性檢出率。可能是因為：對比在癥狀較重時血清YKL-40水平才會有較大的差異大，Septin9作為大腸癌的特殊生物學標記，在早期結直腸病變癥狀不顯著時其血液中的Septin9水平也會存在明顯不同。調查結果還顯示Septin9基因甲基化檢測結果與腸鏡檢查結果的符合率高于YKL-40檢測與腸鏡檢查的符合率。

文獻[9]報道Septin9基因甲基化改變在多數早期結直腸癌患者中就已發生，甚至存在于息肉、腺瘤等癌前病變階段，其陽性檢出率也會隨著結直腸癌分期的增加明顯升高，所以應用S9基因甲基化檢測法能夠幫助健康群進行早期的腫瘤風險篩查，本篇研究數據結果證實了這一觀點。

在對兩種檢測結果的年齡分析中發現Septin9檢測在高齡組的檢查率高于低齡組，而CEA檢測在不同年齡的篩查人群中差異無統計學意義。說明將Septin9基因甲基化作為高齡健康人群的篩查項目更有更高的價值，提高早期識別高齡人群患病的風險。

綜上所述，通過Septin9基因甲基化檢測結果與腸鏡結果檢查結合，發現Septin9基因甲基化檢測能夠作為健康人群的體檢項目，特別是適用于高齡健康人群早期發現腫瘤與提高結直腸癌的風險篩查上具有重要的意義。