p16、Ki-67在子宮內膜癌組織中的表達及與患者預后的關系

黃艷艷，賈利萍，婁雪玲

1安陽市第六人民醫院婦科，河南 安陽 455000

2鄭州大學第三附屬醫院婦科，鄭州 450000

子宮內膜癌是常見的惡性腫瘤，近年來發病率逐年上升，且越來越年輕化[1]。多項研究指出，與其他生殖系統惡性腫瘤相比，子宮內膜癌患者的預后相對較好，這是由于早期子宮內膜癌患者會出現不規則的陰道出血癥狀，使得多數患者可在早期確診，預后一般較好[2-3]。但研究顯示，早期子宮內膜癌的復發率超過10%，仍會威脅女性生命健康[4]。目前，臨床對于子宮內膜癌的發病原因及機制并未完全清楚，分子生物學研究指出，抑癌基因失活和突變與癌基因的非正常激活可能在腫瘤的發生、發展中發揮重要作用[5]。子宮內膜癌相關的癌基因p16在多種惡性腫瘤中均有所表達；原癌基因Ki-67是細胞核相關抗原，可參與DNA 合成、細胞增殖等過程?；诖?，本研究探討p16、Ki-67 在子宮內膜癌中的表達及與患者臨床特征和預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年2 月至2020 年1 月安陽市第六人民醫院收治的子宮內膜癌患者。納入標準：①經病理學檢查證實為子宮內膜癌；②存在陰道不規則流血、排液等癥狀；③術前未接受過放化療；④臨床資料完整。排除標準：①合并其他類型惡性腫瘤；②合并凝血異常；③合并心、肝、肺等功能障礙；④存在其他類型嚴重婦科疾病。依據納入和排除標準，本研究共納入89 例子宮內膜癌患者，年齡33～71 歲，平均（53.68±5.79）歲。另選取同期在安陽市第六人民醫院進行子宮切除的75 例子宮肌瘤患者，年齡36～68 歲，平均（55.21±6.43）歲。兩組患者年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意。

1.2 免疫組化法檢測兩組患者的p16、Ki-67 表達情況

取89 例子宮內膜癌患者的子宮內膜癌組織和75 例子宮肌瘤患者的正常子宮內膜組織，石蠟包埋和切片，二甲苯脫蠟，乙醇脫水，采用鏈霉抗生物素蛋白-過氧化物酶（streptavidin-peroxidase，SP）法檢測p16、Ki-67 表達情況。滴加鼠抗人p16 多克隆抗體、鼠抗人Ki-67 多克隆抗體，稀釋濃度均為1∶100，以磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）代替一抗作陰性對照，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，顯微鏡下觀察。判定標準：依據陽性細胞所占比例及染色強度進行評分[6-7]：無陽性細胞計0 分，陽性細胞所占比例＜11%計1 分，陽性細胞所占比例11%～50%計2 分，陽性細胞所占比例＞50%計3 分；無著色計0 分，淡黃色染色計1 分，棕黃色染色計2 分，棕褐色染色計3 分。將陽性細胞所占比例評分和染色強度評分相乘，≤3 分為陰性，≥4 分為陽性。

1.3 隨訪

采用門診、電話等方式對兩組患者進行為期2年的隨訪，記錄患者的預后情況。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件對所有數據進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；子宮內膜癌患者預后的影響因素采用Logistic 回歸模型分析；以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 p16、Ki-67 表達情況的比較

子宮內膜癌組織中p16的陽性表達率低于正常子宮內膜組織，Ki-67 的陽性表達率高于正常子宮內膜組織，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1）

表1 子宮內膜癌組織和正常子宮內膜組織中p16、Ki-67表達情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中p16、Ki-67 表達情況的比較

不同年齡、肌層浸潤深度子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中p16 蛋白陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結轉移子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中p16蛋白的陽性表達率分別低于FIGO 分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無淋巴結轉移患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。不同年齡子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中Ki-67 蛋白的陽性表達率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結轉移、肌層浸潤深度＞1/2 子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中Ki-67 蛋白的陽性表達率分別高于FIGO 分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無淋巴結轉移、肌層浸潤深度≤1/2 的患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中p16、Ki-67 表達情況的比較

2.3 子宮內膜癌患者預后的影響因素分析

術后隨訪2 年，89 例子宮內膜癌患者死亡24例，生存65 例。單因素分析結果顯示，FIGO 分期、分化程度、淋巴結轉移情況、p16 表達情況、Ki-67表達情況均可能與子宮內膜癌患者的預后有關（P＜0.05）；多因素分析結果顯示，FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結轉移、p16 陰性表達、Ki-67 陽性表達均為子宮內膜癌患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。（表3）

3 討論

子宮內膜癌是生殖系統常見的惡性腫瘤，其病變主要位于子宮內膜上皮，好發于中老年女性[8]。目前，子宮內膜癌的發病原因尚未完全明確，但有研究指出，其發病與高齡、激素藥物濫用及肥胖有一定關系[9]。隨著醫學技術的進步，臨床對于子宮內膜癌的診治取得了較大進展，早期子宮內膜癌患者采取手術治療的生存率高達90%，但中晚期患者的生存率仍相對較低[10]。研究指出，準確判斷子宮內膜癌的生物學行為及患者的預后情況，并給予針對性治療，對改善患者的預后尤為重要[11]。

p16基因為抑癌基因的一種，其表達產物p16蛋白為細胞周期蛋白依賴性激酶（cyclin dependent kinase，CDK）4/6 的抑制劑，能對細胞周期發揮負向調節作用，抑制細胞惡性增殖。本研究結果顯示，子宮內膜癌組織中p16 蛋白的陽性表達率低于正常子宮內膜組織，提示p16 可能在子宮內膜癌的發生、發展過程中發揮重要作用。這可能是因為p16基因突變可導致細胞周期蛋白D1（cyclin D1）/CDK6、CDK4/磷酸化視網膜母細胞瘤蛋白（phosphorylated retinoblastoma protein，pRb）/轉錄因子2（transcription factor 2，E2F）通路失調，從而引起細胞過度增殖，引起腫瘤[12]。此外，本研究結果顯示，FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結轉移子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中p16蛋白陽性表達率分別低于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無淋巴結轉移患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。有研究指出，p16 是評估腫瘤性質及患者預后的重要指標[13]。本研究進一步分析發現，p16 陰性表達是子宮內膜癌患者預后的獨立危險因素，p16可用于評估子宮內膜癌患者的預后。

Ki-67 是一種主要存在于增殖細胞核內的非組蛋白核蛋白，其在細胞增殖的G1、S、G2和M 期中均有所表達，但在G0期不表達[14]。研究指出，Ki-67 在細胞分裂的不同階段的表達情況不同，使其對于反映細胞分裂增殖狀態有重要意義，故推測可將其作為檢測腫瘤細胞增殖活性的可靠指標[15]。本研究結果顯示，子宮內膜癌組織中Ki-67 的陽性表達率高于正常子宮內膜組織，表明Ki-67 在子宮內膜癌組織中異常表達，可能與子宮內膜癌的發生有密切關系。進一步分析發現，FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結轉移、肌層浸潤深度＞1/2 子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織中Ki-67 蛋白陽性表達率分別高于FIGO 分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無淋巴結轉移、肌層浸潤深度≤1/2 患者，差異均有統計學意義（P＜0.05），提示Ki-67 可能參與子宮內膜癌的發生、發展過程。相關研究結果顯示，Ki-67 與惡性腫瘤發生發展、轉移有關。本研究發現，Ki-67 陽性表達是子宮內膜癌患者預后的獨立危險因素，或可將Ki-67 作為評估子宮內膜癌患者預后的潛在指標。

綜上所述，p16、Ki-67 在子宮內膜癌組織中表達異常，p16 陰性表達、Ki-67 陽性表達均為子宮內膜癌患者預后的獨立危險因素，可作為預測子宮內膜癌患者預后的分子標志物和潛在治療靶點。