106 例痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性的影響因素

夏雪松，李倫，田二軍，郭建沂

（1.平頂山市第三人民醫(yī)院檢驗科，河南 平頂山 467000；2.平頂山市第一人民醫(yī)院檢驗科，河南 平頂山 467000；3.平頂山市疾控中心檢驗科，河南 平頂山 467000）

肺結(jié)核屬于慢性傳染病，由結(jié)核分枝桿菌感染所致，隨著疾病進展會累及患者其他臟器，嚴重威脅生命健康[1]。我國是全世界結(jié)核病發(fā)病率最高的國家之一，隨著《全國結(jié)核病防治規(guī)劃》等措施的實施，結(jié)核病發(fā)病率呈現(xiàn)一定下降趨勢，但防治工作仍不容忽視[2]。肺結(jié)核臨床癥狀缺乏典型性，且隨著疾病嚴重程度而不同，尤其是早期發(fā)病且病情較輕時，臨床診斷難度較大，誤診、漏診時有發(fā)生，不利于臨床治療[3]。痰菌涂片檢驗與γ-干擾素釋放試驗（IGRA）均為臨床診斷肺結(jié)核的常用檢驗手段，其中IGRA 在肺結(jié)核診斷中具有較高特異度（75.2%～95.6%）及敏感度（81.7%～97.1%），但仍會出現(xiàn)假陰性情況[4]。基于此，本研究擬探究痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性的影響因素，旨在為臨床輔助診斷肺結(jié)核提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取平頂山市第三人民醫(yī)院于2020 年10 月—2022 年6 月就診的106 例痰菌涂陽肺結(jié)核患者。納入標準：①符合肺結(jié)核相關(guān)診斷標準[5]，痰菌涂片結(jié)果陽性；②臨床資料完整。排除標準：①最終診斷非肺結(jié)核；②合并其他肺部疾病；③免疫系統(tǒng)疾病；④嚴重臟器損傷。

1.2 方法

①通過查閱病例資料、現(xiàn)場問詢等方式收集患者相關(guān)資料，包括性別、年齡、糖尿病、貧血、咳嗽、咳痰、治療史、免疫抑制劑使用、結(jié)核病程、卡介苗接種史、γ-干擾素釋放量、血清總蛋白、血清白蛋白、白細胞（WBC）計數(shù)、NK 細胞計數(shù)、淋巴細胞計數(shù)、嗜酸性粒細胞（EOS）計數(shù)、CD4+T 細胞計數(shù)、CD8+T 細胞計數(shù)、C 反應蛋白（CRP）、降鈣素原（PCT）水平。②IGRA：采集患者靜脈血3 ml，采用體外釋放酶聯(lián)免疫吸附法（試劑盒購自北京萬泰）進行IGRA 檢測。結(jié)果判定標準：分為陰性孔（N）、檢測孔（T）、陽性孔（P），其中N 孔檢測基礎(chǔ)γ-干擾素含量，T 孔檢測經(jīng)結(jié)核分支桿菌特異性抗原刺激并感染的特異性T 細胞釋放的γ-干擾素含量，P 孔檢測經(jīng)植物血凝素非特異性刺激后T細胞釋放的γ-干擾素含量，（T-N）≥14 且（T-N）≥N/4 時為陽性，（T-N）＜14 時為陰性；根據(jù)IGRA檢測結(jié)果分為陽性組、假陰性組。③采集患者（空腹狀態(tài)）外周靜脈血，以3500 r/min 轉(zhuǎn)速離心5 min，取上層清液，靜置于-70℃冰箱內(nèi)待檢。采用CytoFLEX 流式細胞儀（廠家：美國貝克曼庫爾特公司）檢測外周血CD4+T 細胞、CD8+T 細胞、WBC、NK 細胞、淋巴細胞、EOS 水平，采用酶聯(lián)免疫吸附法（試劑盒廠家：上海酶研生物科技有限公司）檢測血清總蛋白、CRP、PCT 水平，采用比色法（試劑盒廠家：武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司）檢測血清白蛋白水平。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS22.0 統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析。計量資料以（±s）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗。采用Logistic 多因素回歸模型分析痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性的危險因素。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性的單因素分析

106 例痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性率為21.70%；兩組性別、年齡、糖尿病、貧血、咳嗽、咳痰、治療史、免疫抑制劑使用、結(jié)核病程、卡介苗接種史、血清總蛋白、血清白蛋白、WBC 計數(shù)、NK 細胞計數(shù)、CD8+T 細胞計數(shù)、CRP、PCT 水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；陽性組γ-干擾素釋放量、淋巴細胞計數(shù)、EOS 計數(shù)、CD4+T細胞計數(shù)與假陰性組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性的單因素分析

2.2 痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性的多因素Logistic 回歸分析

以106 例痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果為因變量，將單因素分析中差異有統(tǒng)計學意義的因素（γ-干擾素釋放量、淋巴細胞計數(shù)、EOS 計數(shù)、CD4+T細胞計數(shù)）作為自變量，對自變量進行賦值（以106例平均值為界：≤平均值=1；＞平均值=2）。經(jīng)多因素Logistic 回歸分析顯示，γ-干擾素釋放量（≤3.19 IU/ml）、淋巴細胞計數(shù)（≤1.45×109/L）、EOS 計數(shù)（＞0.17×109/L）、CD4+T 細胞計數(shù)（≤573.09 個/μl）是痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果為假陰性的危險因素，見表2。

表2 痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性的多因素回歸分析

3 討論

3.1 痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性的現(xiàn)狀

因患者無痰等情況，痰菌涂片檢測在肺結(jié)核診斷中受到一定限制，而IGRA 具有檢測快速等優(yōu)勢，故成為臨床輔助診斷肺結(jié)核的重要手段[6]。俞珊等[7]研究顯示，IGRA 檢測結(jié)果假陰性率為24.20%，與本研究痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性率21.70%接近，表明采用IGRA 診斷肺結(jié)核具有一定誤診、漏診率。因此，探究痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性的影響因素，對臨床輔助診斷肺結(jié)核有重要意義。

3.2 痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性的影響因素

本研究通過Logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)，γ-干擾素釋放量（≤3.19 IU/ml）、淋巴細胞計數(shù)（≤1.45×109/L）、EOS 計數(shù)（＞0.17×109/L）、CD4+T 細胞計數(shù)（≤573.09個/μl）是痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性的危險因素。進一步分析其原因在于：①IGRA 是于體外檢測經(jīng)結(jié)合特異性抗原刺激后的T 細胞釋放γ-干擾素能力的一項免疫學技術(shù)，γ-干擾素釋放量較少時，會抑制IGRA 的靈敏度及敏感度，從而影響IGRA 檢測結(jié)果準確性[8]。徐寧等[9]研究結(jié)果也表示，γ-干擾素釋放量是IGRA 檢測結(jié)果的影響因素，也支持本研究結(jié)果。②楊毅等[10]研究發(fā)現(xiàn)，淋巴細胞計數(shù)在臨床鑒別診斷脊柱結(jié)核和布魯氏菌性脊柱炎中具有重要作用。淋巴細胞是參與機體免疫應答反應的重要組分，淋巴細胞的降低會導致機體缺乏對結(jié)核抗原的應答，從而抑制γ-干擾素釋放，影響IGRA檢測結(jié)果準確性。③陳彬[11]的一項研究中表示，EOS 計數(shù)與全血酶聯(lián)免疫吸附測定法的IGRA 檢測結(jié)果假陰性有關(guān)（OR=0.057，95%CI：0.004～0.811）。本研究數(shù)據(jù)顯示，EOS 計數(shù)（＞0.17×109/L）的痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性發(fā)生風險是EOS 計數(shù)（≤0.17×109/L）的5.718 倍，說明EOS計數(shù)是IGRA 檢測結(jié)果假陰性的影響因素。考慮原因在于EOS 可通過介導白介素-6、過氧化物酶等多種介體，調(diào)控Th1-Th2 免疫應答，參與機體抗結(jié)核免疫反應。當EOS 增多時，會降低IGRA 敏感性，從而增加假陰性風險。④有研究發(fā)現(xiàn)[12]，結(jié)核病患者常伴隨CD4+T 細胞計數(shù)降低，而CD4+T 細胞是分泌γ-干擾素的重要細胞，CD4+T 細胞較少會降低γ-干擾素水平，從而提高IGRA 假陰性率。馬進寶等[13]研究中顯示，CD4+T 細胞計數(shù)（＜400 個/μl）是涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測假陰性的獨立危險因素，一定程度上支持本研究結(jié)果。

此外，既往有研究表示[14]，年齡（≥40 歲）是IGRA 檢測痰菌陰性肺結(jié)核患者假陽性的危險因素。但本研究經(jīng)進一步分析發(fā)現(xiàn)，IGRA 檢測假陰性與年齡無顯著相關(guān)性，與上述研究結(jié)果不一致，這可能與研究對象不同有關(guān)，患者年齡越大，其身體綜合素質(zhì)及免疫力逐漸下降，且基礎(chǔ)疾病患病風險越高，可能會對研究結(jié)果造成一定影響。孫丹雄[15]的一項IGRA 假陰性影響因素的研究中指出，空腹血糖水平與結(jié)核桿菌特異性γ-干擾素水平呈負相關(guān)，糖尿病和結(jié)核病程均可導致IGRA 假陰性，與本研究結(jié)果較不一致，考慮原因為本研究選取對象平均年齡較小，且平均病程較短，糖尿病及肺結(jié)核疾病程度可能相對較輕，在一定程度上影響了研究結(jié)果，造成一定偏差。若要明確年齡、糖尿病、結(jié)核病程等其他因素與IGRA 檢測假陰性的相關(guān)性，應擴大樣本選取范圍進一步深入分析。

3.3 總結(jié)

綜上所述，γ-干擾素釋放量（≤3.19 IU/ml）、淋巴細胞計數(shù)（≤1.45×109/L）、EOS 計數(shù)（＞0.17×109/L）、CD4+T 細胞計數(shù)（≤573.09 個/μl）均為痰菌涂陽肺結(jié)核患者IGRA 檢測結(jié)果假陰性的危險因素，臨床應用IGRA 診斷肺結(jié)核時應綜合評估，如檢測結(jié)果為陰性且存在以上因素異常，應慎重結(jié)合臨床表現(xiàn)及進一步檢查進行綜合判斷，以防止誤診、漏診。