鳳丹皮的質量標準研究

錢世兵,朱月輝,方凌,陳郝,項琪琪,方榮 （.安徽省銅陵市藥品不良反應監測中心,安徽 銅陵 44000;.安徽省銅陵市食品藥品檢驗中心,安徽 銅陵 44000）

鳳丹皮為毛茛科植物鳳丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。秋季采挖根部，除去細根和泥沙，剝取根皮，曬干；或刮去粗皮，除去木心，曬干[1]。鳳丹皮主要產于安徽銅陵鳳凰山地區，為銅陵市的道地藥材，始載于《神農本草經》[2]。鳳丹皮，苦、辛，微寒，歸心、肝、腎經。具有清熱涼血、活血化瘀的功效，用于熱入營血、溫毒發斑、吐血衄血、夜熱早涼、無汗骨蒸、經閉痛經、跌撲傷痛、癰腫瘡毒。鳳丹皮在中藥處方中應用非常廣泛，《中華人民共和國藥典》和中藥部頒標準中收錄了很多含有鳳丹皮的復方制劑。目前也有較多文獻報道了鳳丹皮藥材的質量控制指標，但對鳳丹皮的質量標準研究較少[3-9]。本實驗對來自安徽銅陵鳳凰山的10批次鳳丹皮進行了牡丹皮對照藥材、丹皮酚對照品以及沒食子酸對照品的薄層鑒別，并測定了其水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物和丹皮酚的含量，為鳳丹皮質量標準的制定提供了實驗依據。

1 儀器、試藥與材料

1.1 儀器 賽默飛世爾U3000高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技(中國）有限公司）；AB135-S電子天平（十萬分之一）（梅特勒托利多公司）；LT12/15/C450箱式電阻爐（納博熱(上海)工業爐有限公司）；FD115電熱恒溫鼓風干燥箱（德國賓德公司）；Good look-2000卡瑪薄層色譜數碼成像系統（上海科哲生化科技有限公司）Linomat 5卡瑪半自動點樣儀（上海持互電子有限公司）。

1.2 試藥 薄層層析用硅膠G板（青島海洋化工有限公司）；甲醇（色譜純，國藥集團化學試劑有限公司）；水為超純水；牡丹皮對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：121490-201603，供薄層色譜鑒別使用）；丹皮酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110708-201908，供含量測定使用）；沒食子酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110831-201906，供含量測定使用），其余為分析純。

1.3 材料 10批鳳丹皮藥材均購自道地產地安徽銅陵鳳凰山，并經安徽中醫藥大學中藥鑒定教研室劉守金教授鑒定為毛茛科植物鳳丹（Paeonia suffruticosa Andr.）的干燥根皮。見表1。

表1 鳳丹皮藥材收集編號表

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別取本品粉末2g，加水l0ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使其溶解，作為供試品溶液。取牡丹皮對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。另取丹皮酚和沒食子酸對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法（《中國藥典》2020年版四部通則0502）試驗，吸取供試品溶液和對照藥材溶液各4-10μl，對照品溶液3μl分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（5∶5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，在105℃條件下加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯示相同顏色的斑點。薄層照片見圖1。

圖1 10批鳳丹皮樣品的薄層色譜圖。3-12為鳳丹皮F1-F10，1為丹皮酚對照品，2為牡丹皮對照藥材，13為沒食子酸對照品

2.2 水分檢查 按照中國藥典收載的水分測定方法（《中國藥典》2020年版四部通則0832 第四法）對10批鳳丹皮樣品進行了水分的測定，結果見表2。

表2 鳳丹皮藥材檢查項和含量測定結果(%)

2.3 灰分檢查 按照中國藥典收載的灰分測定方法（《中國藥典》2020年版四部通則2302）對10批鳳丹皮樣品進行了總灰分和酸不溶性灰分的測定，結果見表2。

2.4 浸出物檢查 按照中國藥典收載的浸出物測定方法（《中國藥典》2020年版四部通則2201）項下的熱浸法，用乙醇作溶劑，對10批鳳丹皮樣品進行了浸出物的測定，結果見表2。

2.5 含量測定

2.5.1 色譜條件 色譜柱：大連依利特C18柱（4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水（45∶55），流速為每分鐘1.0ml；柱溫30℃；檢測波長為274nm；理論塔板數按丹皮酚峰計算應不低于5000。

2.5.2 供試品溶液的制備 取本品粗粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5.3 對照品溶液的制備 精密稱取丹皮酚對照品適量，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.5.4 線性關系考察 將濃度為0.02116mg/ml的丹皮酚對照品溶液進行稀釋，分別制備成0.04232μg/ml、0.08464μg/ml、0.16928μg/ml、0.2116μg/ml、0.3174μg/ml、0.4232μg/ml的對照品溶液，分別精密吸取上述6份對照品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標，對照品溶液濃度（μg/ml）為橫坐標，繪制標準曲線，得丹皮酚的線性回歸方程y=3307.8x+1.498（r=0.9999，n=6）。結果表明，丹皮酚在0.04232-0.4232μg/ml的范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.5.5 精密度試驗 取0.02116mg/ml的丹皮酚對照品溶液，精密吸取10μl連續進樣6次，丹皮酚峰面積的RSD為1.3%，結果表明，該方法的精密度良好。

2.5.6 重復性試驗 取編號為F1的鳳丹皮樣品6份，依法制備供試品溶液，測定供試品中丹皮酚的峰面積，RSD為1.3%，結果表明，該方法的重復性良好。

2.5.7 穩定性試驗 取編號為F1的同一份供試品溶液，分別于0h、2h、4h、8h、16h、24h進樣，共測定6次，測得丹皮酚峰面積的RSD為1.2%，結果表明，該方法在24h內的穩定性良好。

2.5.8 加樣回收率試驗 取已知含量的F1樣品約0.25g，精密稱定，共6份，分別加入7.35mg/ml的丹皮酚對照品溶液1ml，依法測定，計算，得丹皮酚的平均回收率為104.58%，RSD為4.5%。結果見表3。

表3 丹皮酚加樣回收率試驗結果(n＝6)

2.5.9 樣品含量試驗 取10批鳳丹皮藥材樣品約0.5g，精密稱定，依法制備供試品溶液，測定丹皮酚的峰面積，代入回歸方程計算樣品中丹皮酚的含量。結果見表2。樣品和丹皮酚的HPLC圖譜見圖2、圖3。

圖2 鳳丹皮樣品的HPLC圖譜

圖3 丹皮酚對照品的HPLC圖譜

3 結論

3.1 薄層色譜的結果 薄層色譜結果表明，采用該方法可以檢出10批鳳丹皮藥材在薄層色譜中與牡丹皮對照藥材、丹皮酚對照品以及沒食子酸對照品在相應的位置上顯示相同顏色的斑點，且斑點清晰，方法簡便、快速、可行，故此方法可作為鳳丹皮藥材的定性鑒別依據。

3.2 10 批鳳丹皮藥材的檢查項和含量測定結果 10批樣品的各項試驗結果差異不大，各項指標的平均值為：水分11.23%，總灰分4.53%，酸不溶性灰分0.52%，浸出物27.43%，丹皮酚含量2.33%。參照試驗結果，根據藥典委員會的要求，并考慮到鳳丹皮為根皮類藥材的實際情況以及藥典中牡丹皮的質量標準，故建議規定鳳丹皮藥材的水分不得超過13.0%，總灰分不得超過5.0%，酸不溶性灰分不得超過1.0%，浸出物不得少于15.0%，丹皮酚的含量不得少于1.2%。鳳丹皮藥材中有藥理活性的成分較多，但含量參差不齊，通過前期研究和查閱文獻得知，丹皮酚的含量比較穩定，一般都在1%以上[10]，所以筆者以丹皮酚為指標，采用高效液相色譜法測定鳳丹皮的丹皮酚含量，建立相應的質量控制方法。

3.3 本實驗建立了鳳丹皮的定性定量分析方法，方法簡便、快速、專屬性強、重現性好，可為鳳丹皮藥材的質量控制方法提供依據。