高效液相色譜法測定食品中三氯蔗糖的含量

◎ 王振雷，王 影，張 威， 姜 珊

（遼源市食品質(zhì)量安全檢測中心，吉林 遼源 136200）

三氯蔗糖，別稱蔗糖素，甜度是蔗糖的600~800倍，其憑借純正的甜味與無熱量的優(yōu)點(diǎn)，在各類食品中廣泛應(yīng)用[1]。《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）中明確規(guī)定，食品中使用的三氯蔗糖的添加量在0.25~1.5 g·kg-1。雖然在規(guī)定劑量范圍內(nèi)使用三氯蔗糖不會對人體構(gòu)成危害，但超出規(guī)定量后會危害人體健康，所以有必要嚴(yán)格監(jiān)控三氯蔗糖含量[2-4]。其中，高效液相色譜法具備良好的準(zhǔn)確性與較高的普及率，其應(yīng)用相對更廣泛[5]。現(xiàn)行相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)明確可用的檢測方法包含液相色譜-示差檢測等，本文以該標(biāo)準(zhǔn)為根據(jù)，以測定食品中三氯蔗糖為目的，建立高效液相色譜法。

1 材料與方法

1.1 材料

超純水（電導(dǎo)率＞18 MΩ）；三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99%）；甲醇（分析純）；乙腈（德國色譜純）。

超聲波清洗器（KQ-500B型）；配示差折光檢測器（RID-20A型）的高效液相色譜儀（LC-20A型）；分析天平（MP5002型）；氮吹儀（AutoEVA-60型）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm）；水溫：35 ℃；柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：超純水-乙腈（V∶V=89∶11）；采用示差檢測器；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1.0 mL·min-1。

1.2.2 樣品前處理

精準(zhǔn)量取均勻研磨的樣品2.0 g并移至離心管（50 mL）內(nèi)，添加蒸餾水（5 mL）后持續(xù)2 min渦旋振蕩，添加15 mL甲醇，繼續(xù)振蕩30 s，然后超聲處理20 min，用4 500 r·min-1的條件離心5 min，將上清液移入蒸發(fā)皿內(nèi)。殘?jiān)尤?0 mL 75%甲醇進(jìn)行一次提取，上清液與提取液合并（如果是含較多脂肪的樣品，可針對提取液展開一次凈化處理，處理時(shí)采用30 mL正己烷，處理完成后提取下層液），并通過提前活化處理的固相萃取小柱，1 mL水淋洗，待所有液體從柱中流出后進(jìn)行洗脫（3 mL甲醇），收集洗脫液[6]。50 ℃氮吹至近干，殘留物內(nèi)添加15%乙腈并定容至1 mL，溶液進(jìn)行20 s渦旋振蕩處理，用微孔濾膜（0.45 μm）過濾濾液，待測。

1.2.3 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精密量取100.0 mg三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL容量瓶內(nèi)，加水溶解并定容至刻度，完成三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液的制備，濃度為10 mg·mL-1，保存至4 ℃冰箱[7]。精密吸取0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL、4.00 mL和6.00 mL三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液置于10 mL容量瓶內(nèi)，依次加水定容至刻度，完成濃度分別為0.02 mg·mL-1、0.05 mg·mL-1、0.10 mg·mL-1、0.40 mg·mL-1和0.60 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制。

2 結(jié)果與分析

2.1 校準(zhǔn)曲線繪制

由圖1可知，當(dāng)三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度在0.02~0.60 mg·mL-1，三氯蔗糖線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=171 857X-178.077，檢出限為2.0 mg·kg-1，相關(guān)系數(shù)為0.999 7。

圖1 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2 加標(biāo)回收率測定

稱取樣品適量，依照線性范圍分別添加0.030 mg·mL-1、0.060 mg·mL-1、0.150 mg·mL-1、0.300 mg·mL-1、0.450 mg·mL-1、0.500 mg·mL-1、三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，參照1.3.2方法展開處理，連續(xù)6次進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表1。由表1可知，三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的平均回收率為99.32%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.66%，結(jié)果可靠準(zhǔn)確，與相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求相符合。

表1 加標(biāo)回收率測定結(jié)果表

2.3 精密度測定

選擇0.60 mg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)工作液，參照1.3.1實(shí)驗(yàn)條件連續(xù)進(jìn)行6次測試，三氯蔗糖保留時(shí)間、峰面積等見表2。

表2 精密度測定結(jié)果表

2.4 樣品測定

在本地超市等場所采購餅干共計(jì)50份樣品，經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，樣本配有三氯蔗糖標(biāo)識時(shí)，均有三氯蔗糖檢出，而未標(biāo)識有三氯蔗糖的樣本檢測結(jié)果并未超過0.25 g·kg-1的檢出限，無過量添加情況。

2.5 條件優(yōu)化

本試驗(yàn)條件優(yōu)化內(nèi)容僅選擇前處理?xiàng)l件。GB 22255—2014中提及制備樣品時(shí)持續(xù)10 min離心（3 000 r·min-1），本實(shí)驗(yàn)嘗試4 500 r·min-1離心處理5 min，經(jīng)固相萃取小柱對樣品上清液進(jìn)行萃取時(shí)，小柱不易堵塞，縮短了前處理時(shí)間。同時(shí)，該標(biāo)準(zhǔn)中提及沸水浴蒸干樣品，本實(shí)驗(yàn)嘗試用氮吹儀吹干，結(jié)果表明能提高工作效率，減少檢測成本支出。

3 結(jié)語

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)建立了測定餅干樣品中三氯蔗糖的方法。在0.02～0.60 mg·mL-1三氯蔗糖線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 7，方法檢出限為2.0 mg·kg-1，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.54%，回收率為98.33%~100.03%。方法靈敏度及準(zhǔn)確度高，適用于測定食品中的三氯蔗糖含量。