酸放散稀釋法在類同種特異性自身抗體檢測中的應用價值*

楊紅梅,鄒 昕,馬思飛,虞 茜,許 飛,徐 立

江蘇省常州市中心血站/常州市臨床輸血重點專科實驗室,江蘇常州 213000

自身免疫性溶血性貧血、腫瘤患者體內的自身抗體和同種抗體往往同時存在且呈泛反應現象。而此類患者大多數直接抗人球蛋白試驗(簡稱直抗)呈陽性。而直抗陽性的自身抗體或輸血引起的同種抗體大部分被吸附在紅細胞上,其特異性需通過特殊細胞或吸收放散試驗來鑒別[1-2]。因自身抗體干擾,直抗陽性患者同種抗體可能會被泛反應現象所掩蓋,存在急性或遲發性輸血反應風險。因此區分出同種抗體、自身抗體、類同種特異性自身抗體(類抗體)就顯得非常關鍵。類抗體是在同種抗體和自身抗體之間存在的一種兼有二者特征的抗體,其具有同種抗體特異性,又可以被相應抗原陰性紅細胞吸收放散[3-4]。大部分類抗體伴自身抗體產生的患者可以有或沒有抗體對應的抗原。本研究對直抗陽性患者采用酸放散稀釋技術對紅細胞放散液進行抗體特異性鑒定,結果顯示該方法在類抗體鑒定中具有一定可操作性及實用性,現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年4月至2021年12月江蘇省常州市各醫療機構送本站輸血研究室進行疑難配血標本342例,其中直抗陽性109例。排除14 d內采用抗生素或靶向藥物治療及半年有輸血史情況者,選取血清經抗體特異性鑒定譜細胞呈泛反應性的45例患者為研究對象。

1.2儀器與試劑 久保田KA-2200血型血清學專用離心機、貝索2020-2低速離心機、37 ℃恒溫水浴箱、長春博研FYQ型試劑卡孵育器、長春博研TD-A醫用離心機、ORTHO離心機、貝索毛細管離心機2403等。抗-A/B單克隆抗體(上海血液生物;批號:20200609)、抗-D(IgM)單克隆抗體、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e(上海血液生物;部分批號為20203002、20203002、20203102、20203202、20203301)、抗-Jka(德國CEOJKAM 226-3)、抗體篩選細胞(批號:702101、702121等)、進口譜細胞(批號:732115、732119等)、Sanquin譜細胞(批號:8000453184、8000454945等)、抗人球蛋白檢測卡(強生公司;批號:AHC228H、AHC234J。長春博迅;批號:20211004等)、抗人球蛋白試劑、抗-IgG、抗-C3d試劑(上海血液生物;批號分別為20205001、20215103、20215202等)、酸放散試劑(上海申型醫學科技公司;批號:20212101等)、聚凝胺試劑(珠海貝索;批號:A211203等)。

1.3方法 采用試管法進行ABO血型鑒定、Rh血型抗原檢測、抗-IgG及抗-C3d試驗;采用酸放散稀釋法對患者血清和紅細胞吸附的抗體進行特異性鑒定試驗。對于呈泛反應性的放散液進行稀釋,尋找合適稀釋倍數(放散液稀釋后出現反應格局),再次進行抗體特異性鑒定。凝集強度判讀以抗人球蛋白檢測卡試劑說明書為準。

2 結 果

2.145例患者各血型、直抗、Rh分型及抗體特異性試驗檢測結果 45例患者各血型比例分別為A型48.9%(22/45)、B型17.8%(8/45)、O型26.7%(12/45)、AB型6.7%(3/45);Rh血型抗原分型比例分別為CCee 51.1%(23/45)、CcEe 33.3%(15/45)、Ccee 8.9%(4/45)、ccEE 6.7%(3/45)。45例患者紅細胞酸放散原液中檢出1例抗-Jka抗體,1例抗-E同種抗體,1例類抗-C抗體,3例為陰性,其他(39例)酸放散液均呈1～4個“+”泛反應。通過酸放散稀釋技術對39例患者紅細胞放散液鑒定,檢出類抗體伴自身抗體14例,無特異性自身抗體25例。

2.2酸放散稀釋法檢出類抗體結果 經酸放散液稀釋法明確類抗體比例為35.9%(14/39)。特異性檢出標本中酸放散液反應強度多為4個“+”,占64.3%(9/14)。Rh表型多為CCDee,占71.4%(10/14)。類抗體以抗-C和抗-e為主,分別占35.7%(5/14)和50.0%(7/14)。見表1。

表1 酸放散稀釋法檢出類自身同種抗體結果

2.3酸放散稀釋法試驗條件 從表1中可以看出患者酸放散原液的反應強度與稀釋比例有關:當反應強度≤2個“+”時,稀釋比例為1∶2或1∶4;當反應強度>2個“+”時,稀釋比例在1∶100～1∶4。實際操作時可從1∶32～1∶16進行稀釋比例的探索。

3 討 論

由于獻血者與受血者之間抗原遺傳的多樣性,導致受血者對紅細胞、白細胞和血小板抗原同種免疫。具有臨床意義的抗原誘導產生IgG同種抗體涉及Rh、Kell、Duffy、Kidd和 MNS血型系統。這些抗體在37 ℃時發生反應,并導致輸血患者溶血。紅細胞同種抗體的頻率和特異性因人群遺傳多樣性而異,一般人群中有0.3%～2.0%出現同種抗體[5-8]。交叉配血不合的原因很多,在輸血前血液檢測中不規則抗體篩選陽性是導致配血不合的常見原因,只有準確鑒定出血清及放散液中存在的抗體,篩選出相應抗原陰性的血液才能保證輸血安全、有效。但經常會碰到泛反應(凝集)現象導致無法區分有意義的同種抗體和其他自身抗體,使配血困難。在具有不明同種抗體的患者體內普遍存在紅細胞同種抗體和溶血性輸血反應,提示存在泛反應或自身抗體的情況下,應采用特定的實驗室技術來鑒定同種抗體,以提高輸血安全性。因同種異體免疫與接種劑量、免疫原性和臨床治療等因素相關,同時自身抗體會產生掩蔽同種抗體的效應,導致特異性抗體無法被檢測出來。而稀釋技術能排除自身抗體干擾,通過類同種異體抗體的特異性來鑒別自身抗體[9-11]。因此,在試驗過程中尋找酸放散液合適的稀釋倍數至關重要。本研究優化試驗過程,大膽嘗試使用抗體篩選細胞對不同稀釋倍數的酸放散液進行抗體篩查,尋找稀釋度,再用此稀釋倍數的酸放散液進行抗體鑒定。此法不僅可以節約酸放散液和縮短試驗時間,并且在一定程度上根據抗體篩選細胞格局表預判試驗結果,建立更快、更安全的臨床輸血策略。

本研究在試驗過程中發現,類抗體伴自身抗體現象比較常見,主要集中在Rh血型系統。目前本實驗室未發現Kidd、Duffy等血型系統的類抗體現象。類抗體產生原因可能有:(1)在自身抗體存在的情況下,同種抗體的非特異性吸附所致;(2)自身免疫和同種免疫同時發生;(3)與B細胞調節失調有關,如自身免疫性疾病;(4)藥物與某些自身抗體的產生有關,可能是由于藥物相關的免疫機制的生化修飾作用所致。對于存在類抗體的患者,需結合貧血程度、基礎疾病、臨床癥狀、尋找對應抗原陰性紅細胞的難易程度、后續輸血的可能性綜合考慮,謹慎進行輸血決策。運用抗體效價與酸放散技術相結合鑒定出特異性抗體后,患者選擇避開類抗體還是選擇同型抗原輸注的輸血策略及輸血效果還需后續進一步研究。