強直性脊柱炎患者HLA-B27核酸、炎癥指標、免疫指標的臨床意義分析

張冬青,趙 嬌,龍麗娟

中國人民解放軍總醫院第四醫學中心檢驗科,北京 100048

強直性脊柱炎(AS)是一種以骶髂關節及椎旁小關節受累為主的具有慢性、進行性、炎癥等特點的自身免疫性疾病,發病后期X線片典型表現為骶髂關節破壞,脊柱呈“竹節樣”改變。該病是致畸、致殘的關鍵原因。由于AS起病隱匿,患者早期癥狀不典型,出現影像學檢查異常時,已經錯過最佳治療時機,因此,早期診斷對AS的意義重大[1]。人類白細胞抗原B27(HLA-B27)是一種主要組織相容性復合物Ⅰ類分子,大多表達于人類有核細胞和血小板表面,與AS的發生密切相關,是AS發病機制中的關鍵分子。目前研究表明,AS的發病原因可能為遺傳因素、環境因素、微生物感染、免疫功能紊亂等[2]。因此,本研究檢測了AS患者HLA-B27核酸、炎癥指標、免疫指標水平,以期為AS的早期診斷提供指導。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年1月至2021年10月本中心風濕科確診的73例AS患者(AS組),其中男58例、女15例,年齡14～78歲、平均(37.26±14.18)歲。納入標準:符合美國風濕病協會1984年修訂的紐約診斷標準及骶髂關節X線片表現。排除標準:合并感染性疾病患者;合并其他自身免疫性疾病患者;合并惡性腫瘤等消耗性疾病患者;孕期及哺乳期女性。選擇同期在本中心進行體檢的73例健康者作為健康對照組,其中男49例、女24例,年齡13～88歲、平均(40.26±17.53)歲。兩組研究對象均知情同意本次研究。本研究已獲得本中心醫學倫理委員會批準實施。兩組性別、年齡比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2方法 清晨分別采集兩組研究對象空腹狀態下靜脈血2 mL,乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝,用于外周血核酸的制備提取;采集靜脈血5 mL,注入分離膠促凝管中,于2 h內以3 000 r/min離心10 min分離血清,置于-80 ℃環境保存,用于檢測血清超敏C反應蛋白(hs-CRP)、抗鏈球菌溶血素O(ASO)、類風濕因子(RF)、前清蛋白(Prea)、血清總補體(CH50)、免疫球蛋白(Ig)A、IgG、IgM、IgE、補體C3(C3)、補體C4(C4);采集靜脈血2 mL,注入枸櫞酸鈉抗凝管,用于檢測紅細胞沉降率(ESR)。

1.2.1HLA-B27核酸檢測 采用艾康生物技術有限公司人類HLA-B27核酸檢測試劑盒對所有研究對象進行核酸檢測。PCR循環參數:95 ℃ 3 min,循環1次;94 ℃ 15 s,60 ℃ 30 s,循環40次。采用SLAN-96P型實時熒光定量PCR儀(上海宏石有限公司)進行分析,得出HLA-B27核酸檢測結果,將AS患者分為HLA-B27核酸陽性組、HLA-B27核酸陰性組2個亞組。

1.2.2hs-CRP、ASO、RF、Prea、CH50、IgA、IgG、IgM、IgE、C3和C4水平檢測 使用羅氏COBAS C701模塊生化分析儀、相關試劑和配套校準品組成的檢測系統進行檢測。

1.2.3影像學檢查 所有AS患者接受骶髂關節X線檢查,依據放射性標準骶髂關節X線分級:0級為正常,未出現骶髂關節改變;Ⅰ級為可疑異常,疑似關節存在硬化或侵蝕;Ⅱ級為輕度異常,可見局限性侵蝕、硬化,關節間隙并未出現明顯改變;Ⅲ級為明顯異常,呈中度或進展性骶髂關節炎,伴有侵蝕、硬化、關節間隙增寬或狹窄或部分強直一項或一項以上改變;Ⅳ級為嚴重異常,基本處在完全性關節強直[3]。根據影像學檢查結果將AS患者分為Ⅰ級組、Ⅱ級組、Ⅲ級組、Ⅳ級組。

2 結 果

2.1AS組各亞組患者年齡分布及性別的比較 對AS各亞組患者年齡進行分析,發現Ⅳ級組患者的年齡大于其他3組,Ⅱ級組、Ⅲ級組、Ⅳ級組的男性患者比例明顯高于Ⅰ級組,Ⅲ級組、Ⅳ級組的男性患者比例明顯高于Ⅱ級組,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 AS各亞組患者性別、年齡比較[n或或n(%)]

2.2各組研究對象HLA-B27核酸、ESR、hs-CRP、Prea、ASO、RF水平比較 AS組HLA-B27核酸陽性率及hs-CRP、ASO、ESR水平顯著高于健康對照組,差異均有統計學意義(P<0.05),其中,hs-CRP水平在不同亞組AS患者中比較,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組研究對象HLA-B27核酸及ESR、hs-CRP、Prea、ASO、RF水平比較或n(%)]

2.3各組研究對象IgA、IgG、IgM、IgE、C3、C4、CH50水平比較 AS組IgA水平顯著高于健康對照組,差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 各組研究對象IgA、IgG、IgM、IgE、C3、C4、CH50水平比較

2.4HLA-B27核酸陽性組、HLA-B27核酸陰性組hs-CRP、ESR、ASO和IgA檢測結果比較 HLA-B27核酸陽性組與HLA-B27核酸陰性組AS患者hs-CRP水平、ESR比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 HLA-B27核酸陽性組、HLA-B27核酸陰性組hs-CRP、ESR、ASO和IgA檢測結果比較

2.5HLA-B27核酸、hs-CRP和ESR對AS的診斷價值 以AS作為陽性診斷,以對照作為陰性診斷,繪制ROC曲線,結果顯示,HLA-B27核酸、hs-CRP和ESR單獨診斷AS的曲線下面積(AUC)分別為0.925(95%CI:0.875～0.974)、0.539(95%CI:0.440～0.639)、0.919(95%CI:0.877～0.960),3項指標聯合檢測診斷AS的AUC為0.996(95%CI:0.991～0.999),大于各項指標單獨診斷(P<0.05)。見表5、圖1。

圖1 HLA-B27核酸、hs-CRP和ESR診斷AS的ROC曲線

表5 血清HLA-B27核酸、hs-CRP和ESR在AS中的診斷效能

3 討 論

AS是一種多因素共同參與的慢性炎癥性疾病,目前認為遺傳、環境、免疫與其有關[4],以累及骶髂關節、附著點和中軸關節為主要病理特征[5],可引起關節疼痛及僵硬,反復發作可出現功能障礙甚至致殘,嚴重影響患者的生存質量[6]。20世紀70年代英國科學家首次報道了AS與HLA-B27密切相關[7],HLA-B27屬于Ⅰ型主要組織相容性復合物基因,它的同源二聚體能夠與淋巴細胞、粒細胞、自然殺傷細胞受體結合,參與多種細胞調控,從而在自身免疫性疾病的發生、發展中發揮作用。HLA-B27在機體中有核細胞上均有表達,在淋巴細胞表面含量豐富,是免疫應答的標志物[8]。有研究證實,90%以上的AS患者HLA-B27核酸檢測呈陽性[9],HLA-B27可作為AS臨床診斷和治療的重要實驗室指標[10-11]。本研究中,AS患者男女比例約為3.87∶1,AS患者HLA-B27核酸陽性率為84.90%,而健康對照人群HLA-B27核酸陽性率為0.0%,與其他研究結果相符[12]。HLA-B27核酸檢測對AS的診斷具有重要的輔助作用,對于HLA-B27核酸陰性的AS,此時聯合炎癥指標、免疫指標進行檢測,有利于降低AS的漏檢率。

hs-CRP是一種急性時相反應蛋白,當機體出現炎癥時血清hs-CRP水平迅速升高,48 h即可達到峰值,有助于感染性疾病的診斷。AS患者存在骶髂關節及其他類型的關節炎癥,由肝臟合成的C反應蛋白直接參與炎癥反應。ESR升高在一定程度上也反映了炎癥或組織損傷,其升高程度與組織損傷程度有關。本研究中,AS組患者的血清hs-CRP、ESR水平顯著高于健康對照組,且hs-CRP在不同分級AS患者中比較均有差異,這與其他研究表明hs-CRP能反映AS患者炎癥程度并與其呈正比的結論一致[13]。雖然hs-CRP對于AS患者的診斷具有較低的靈敏度,ESR對于AS患者的診斷具有較低的特異度,但是hs-CRP、ESR可以間接地反映炎癥和組織損傷的存在,并且與嚴重程度有關。

ASO是能夠反映患者近期是否存在A群溶血鏈球菌感染的指標,鏈球菌感染會促進抗原呈遞細胞活化,激活機體免疫,激活T、B淋巴細胞,促進腫瘤壞死因子-α、白細胞介素等炎癥因子的釋放,加重關節組織損傷,誘導AS的進展[10]。本研究發現,AS組ASO水平顯著高于健康對照組。Ig為機體免疫系統重要組成部分,作為活化B淋巴細胞的重要免疫抗體,在AS的發病中起一定作用。AS作為一種慢性自身免疫性疾病,在活動期常發生Ig含量的異常,IgA為微生物抗原,并與hs-CRP等炎癥細胞因子水平密切相關。本研究結果顯示,AS組IgA水平顯著高于健康對照組,IgA水平與AS患者疾病活動密切相關[14]。

HLA-B27呈陽性的人群是AS的易感人群,但是陽性患者并不一定發病,hs-CRP、ASO、ESR及IgA水平的變化可以反映AS病情進展情況,盡管它們不是AS的特異性診斷指標,但hs-CRP、ESR與HLA-B27核酸聯合檢測對AS的診斷效能較高,有利于AS的輔助診斷,有助于改善患者的病情。