血管內皮細胞生長因子表達變化對肝癌合并冠心病患者預后的評估價值研究

滕立勤 王思寅 董 穎

肝癌是發生于肝臟的惡性腫瘤,早期常無癥狀,病情不斷進展可逐漸誘發乏力、肝區疼痛、腹脹等癥狀,若不及時治療,癌細胞可經血液循環等多種途徑發生轉移,增加患者死亡風險[1-2]。冠心病則為常見心血管疾病,多由冠脈供血不足所致,可引起心肌缺血缺氧性損傷,影響心功能[3]。兩種疾病合并后可使得病情更為復雜,肝癌治療過程中需做好冠心病基礎治療,以避免急性心血管事件的發生,改善患者預后。肝癌治療多以早確診、早治療為原則,早期患者預后尚可,中晚期則生存率較低,且肝癌惡性程度高,即使經手術為主的綜合方案治療后,仍存在較高的復發轉移風險,尤其在合并冠心病的前提下,其預后更差,故臨床需深入研究肝癌相關分子機制,為抗腫瘤治療尋找新的靶點,以便于提高整體生存率[4]。血管內皮細胞生長因子(VEGF)是1種促進血管內皮細胞生長的特異性因子,其在多種惡性腫瘤中存在異常表達,與腫瘤血管生成關系密切[5-6]。同時,VEGF在冠心病中也存在明顯表達,與冠心病患者動脈狹窄程度存在一定相關性。但VEGF表達在肝癌合并冠心病患者中相關研究較少,且具體表達及與預后的關系值得進一步研究。鑒于此,本研究分析VEGF表達與肝癌合并冠心病患者預后的相關性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017年5月至2019年5月我院收治的90例肝癌合并冠心病患者臨床資料。其中男性49例,女性41例;年齡51～76歲,平均年齡(62.52±5.32)歲;體質量指數18.6～28.3 kg/m2,平均體質量指數(23.63±2.19)kg/m2;冠心病病程1～8年,平均病程(3.86±0.42)年;Child-Pugh分級:50例A級,40例B級;文化程度:35例高中及以上,55例初中及以下。納入標準:經手術病理證實為肝癌;經冠脈造影確診為冠心病;精神狀態正常;臨床資料完整。排除標準:存有肝腎功能衰竭;存有凝血功能障礙;合并急慢性感染;伴有其他惡性腫瘤;術前行放化療。

1.2 方法

所有患者均行手術治療,術中切除癌組織,并切除癌旁正常組織,術后及時送檢,采用免疫組織化學法檢測癌組織及癌旁組織內VEGF表達。免疫組化染色:組織標本先用10%甲醛溶液固定24 h后,之后常規脫水,以石蠟包埋,連續切片,保持厚度4 μm;采用檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復,待自然冷卻后,以PSB沖洗,之后3%過氧化氫封閉;滴加一抗后在4攝氏度環境下孵育過夜,再以PBS液沖洗,加入二抗后孵育30 min,再次PBS液沖洗;滴入DAB顯色液進行顯色處理,返藍10 min,以蒸餾水沖洗,蘇木精復染,再以清水沖洗后,酒精分化,返藍,梯度酒精脫水,二甲苯透明,最后以中性樹膠封片,鏡下觀察染色情況。結果判斷:VEGF陽性表達可在細胞膜或細胞質內出現棕褐色顆粒,并每張切片選取5個高倍鏡視野觀察,計算陽性細胞比;著色強度:0分為無色,1分為黃色,2分為棕黃色,3分為棕黃色;陽性細胞比:0分為<5%,1分為6%～25%,2分為26%～50%,3分為51%～75%,4分為>75%;兩者乘積>3分為陽性,反之為陰性。所有患者開展長達3年隨訪,隨訪內容為存活情況,隨訪方式為電話或門診復查。

1.3 觀察指標

(1)VEGF表達情況:兩組均采集癌組織及癌旁組織行免疫組織化學法檢測,比較癌組織與癌旁組織內VEGF表達差異。(2)VEGF表達與其臨床病理特征的關系:比較不同VEGF表達患者年齡、性別、體質量指數、腫瘤直徑、分化程度、腫瘤分期、肝功能分級、淋巴結轉移、冠脈狹窄程度等的差異,其中冠脈狹窄程度通過冠脈造影進行明確。(3)VEGF表達與預后間相關性:隨訪3年,統計90例患者存活情況,比較不同VEGF表達患者存活率。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 VEGF表達情況

癌組織VEGF陽性表達率高于癌旁組織,差異有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組VEGF表達情況比較(例,%)

2.2 VEGF表達與患者臨床病理特征的關系

腫瘤直徑≥5 cm、分化程度低分化、腫瘤分期Ⅲ期、有淋巴結轉移、冠脈狹窄程度重度狹窄患者VEGF陽性表達率,高于腫瘤直徑<5 cm、分化程度中高分化、腫瘤分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、冠脈狹窄程度輕中度狹窄患者,差異有統計學意義(P<0.05),見表2。

表2 VEGF表達與患者臨床病理特征的關系(例,%)

2.3 VEGF表達與患者預后的相關性

隨訪3年,90例患者存活55例,存活率為61.11%(55/90);VEGF陽性表達組存活率低于VEGF陰性表達組,差異有統計學意義(P<0.05),見表3。

表3 不同VEGF表達與患者預后的相關性(例,%)

3 討論

肝癌病因復雜,臨床認為在病毒感染、肝硬化、不良飲食等多種因素長期影響下,可影響肝細胞的DNA系統,使得肝細胞生長出現增殖失控現象,最終發生癌性變化,形成惡性腫瘤[7-8]。而肝臟為人體代謝重要器官,且存在豐富血供,一旦發生惡性變化則對機體代謝損傷較大,且腫瘤在獲得充足營養后能迅速增長,并持續侵襲周圍組織,患者死亡風險較高。冠心病也是危害人類健康的重要疾病,肝癌與冠心病并發后會加重患者病情進展,使得整體預后欠佳[9]。因此,臨床需尋找一種能夠對肝癌合并冠心病患者預后進行良好預測的分子標志物,為臨床治療提供指導,以提高患者生存率。

腫瘤血管生成一直以來都是惡性腫瘤研究熱點,腫瘤的生長離不開血管生成,當血供豐富,則可為腫瘤生長、轉移提供提供充足的營養物質[10-11]。而VEGF則是一種高度特異性促血管內皮細胞生長因子,能夠選擇性作用于血管內皮細胞膜絡氨酸激酶受體,使得內皮細胞有絲分裂加速,從而促進內皮細胞增殖,加快內皮細胞遷移速度,促使微血管形成[12-13]。正常情況下VEGF在機體內處于低表達狀態,當惡性腫瘤發生后可見VEGF表達水平升高,且在大腸癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等多種惡性腫瘤內均可見VEGF高表達,故VEGF表達水平在腫瘤發生及發展中具有重要作用。本研究結果顯示,癌組織VEGF陽性表達率高于癌旁組織,腫瘤直徑≥5 cm、分化程度低分化、腫瘤分期Ⅲ期、有淋巴結轉移、冠脈狹窄程度重度狹窄患者VEGF陽性表達率高于腫瘤直徑<5 cm、分化程度中高分化、腫瘤分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、冠脈狹窄程度輕中度狹窄患者;90例患者中存活55例,存活率為61.11%(55/90),VEGF陽性表達組存活率低于VEGF陰性表達組。提示VEGF在肝癌合并冠心病患者中呈高表達,腫瘤直徑長、分化程度低、腫瘤分期高、有淋巴結轉移患者表達水平更高,且陽性表達高患者存活率低,能夠較好的預測患者預后。其原因為當VEGF處于高表達狀態時,可加速腫瘤新生血管生成,從而為腫瘤生長提供充足營養,增強腫瘤增殖、侵襲能力,故腫瘤體積大,臨床分期高,也更易發生轉移[14-15]。而臨床分期高、淋巴結轉移等均為影響肝癌合并冠心病患者預后的高危因素,故VEGF陽性表達患者整體預后較差。本研究結果顯示,冠脈重度狹窄患者VEGF陽性表達更高。其原因為心肌處于缺血缺氧狀態時,可促使VEGF表達增加,以加速內皮細胞增殖、遷移,誘導血管生成,盡早建立側支循環,在缺血心肌組織中起到重要代償作用。而冠心病狹窄程度越高則心肌缺氧越嚴重,也會進一步誘發VEGF表達,當合并肝癌時則會加速腫瘤血管形成,故預后較差。但本研究納入樣本量較少,所得研究結果仍可能存在一定偏倚,后續還需擴大樣本量,開展大樣本研究,以進一步剖析VEGF在肝癌合并冠心病患者中的表達。

綜上所述,VEGF表達與肝癌合并冠心病患者預后關系密切,當VEGF高表達時,則腫瘤分期高、分化程度低,且易經淋巴結轉移,故患者存活率較低。