Rap1b蛋白在子宮內膜癌組織中的表達及其臨床意義

李錦巍 劉 晴 馬艷美 秦 雪

子宮內膜癌常見婦科惡性腫瘤疾病之一,目前認為此類疾病的發生與遺傳、老齡化等有關[1]。其發病率較高,已經成為育齡期女性身體健康的主要原因之一[2]。據報道[3],糖尿病或者肥胖人群中發生子宮內膜癌幾率更大。研究稱,遠期隨訪發現,子宮內膜癌患者出現多臟器功能障礙的幾率最高可達到5%,其中處于晚期的患者疾病進展更快。通過對子宮內膜癌發生和發展過程中腫瘤相關蛋白水平進行監測,可以預測腫瘤進展程度。Ras相關蛋白1b(RAS-associated protein 1b,Rap 1b)屬于一類Ras樣GTP酶,主要參與機體免疫及造血系統[4]。也有研究發現[5],Rap 1b與其靶分子參與多種癌癥疾病的發生和發展。但是關于Rap 1b蛋白與子宮內膜的關系報道較少,本次研究探討Rap 1b蛋白在子宮內膜組織表達及與臨床病理參數關系,為明確Rap 1b蛋白作為疾病預測指標具有參考意義,內容報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

選取2017年3月至2019年6月于我院病理中心收集的子宮內膜癌組織標本82例(癌組織)。納入標準:其中子宮內膜癌疾病均符合中華醫學會制定的第四版《子宮內膜癌診斷與治療指南》中診斷標準[6],均進行病理學檢查,且均未進行放、化療等治療干預;均具有分娩史。排除標準:既往均無惡性腫瘤、免疫系統類、機體重要臟器等疾病史;入院資料不完整。同時期選取子宮脫垂等手術過程中獲取的正常子宮內膜組織標本45例(正常組織)。年齡39～72歲,平均年齡(58.3±8.5)歲,國際婦產科聯盟(Federation of International of Gynecologists and Obstetricians,FIGO)分期:其中Ⅰ期45例,Ⅱ期24例,Ⅲ期8例,Ⅳ期5例,病理分級:G1 20例,G2 35例,G3 27例。病理學類型:子宮內膜樣腺癌51例、其他類型癌31例。肌層浸潤:>1/2 38例、≤1/2 44例。淋巴結轉移13例。2組基礎資料進行對比,差異無統計學意義(P>0.05)。本研究已通過我院倫理委員會批準,且患者知情同意并已簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 主要儀器與試劑 實驗儀器:電鏡(日立,S-9300)。實驗試劑:4%多聚甲醛、石蠟、3%過氧化氫溶液、蘇木精(鈺博生物);山羊血清(浙江天杭生物科技有限公司);一抗抗體(Rap1b,1∶200)、二抗抗體(1∶1000)(美國phytoab)。

1.2.2 免疫組織化學染色法檢測子宮內膜癌組織及癌旁組織中Rap1b蛋白表達 獲取上述癌組織及正常組織標本,予以4%多聚甲醛溶液固定組織,常規石蠟包埋,分別進行切片處理,厚度4 μm,再予以枸櫞酸緩沖溶液修復組織抗原,并煮沸,約10 min后,再加入適量3%過氧化氫溶液(H2O2),加山羊血清,室溫環境下封閉,約30 min后,加入一抗抗體(Rap1b,1∶200),于4 ℃孵育,過夜,次日,加入對應的二抗抗體(1∶1000),室溫環境下孵育,約30 min后,二氨基聯苯胺溶液(DAB)顯色,再予以蘇木精溶液復染,脫水,封片,電鏡觀察。選取2名病理學專家人員判定。 Rap1b染色后呈現棕黃色顆粒表示為陽性。0分表示陽性細胞占比<5%;1分表示陽性細胞占比為6%～25%;2分表示陽性細胞占比26%～50%;3分表示洋相細胞占比為51%～75%;4分表示陽性細胞占比>75%。棕色3分,棕黃色2分,黃色1分,未著色0分。陽性細胞數及染色強度綜合評估,總分數<2分表示陰性,≥2分表示陽性。

1.3 觀察指標

(1)Rap1b蛋白陽性率;(2)Rap1b蛋白表達與子宮內膜癌患者臨床病理參數的關系;(3)子宮內膜癌患者的預后與Rap1b蛋白表達相關性。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 癌組織與正常組織中Rap1b蛋白陽性率比較

癌組織Rap1b蛋白陽性率(70.73%)顯著高于正常組織,差異具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 癌組織與正常組織中Rap1b蛋白陽性率比較(例,%)

2.2 Rap1b蛋白表達與子宮內膜癌臨床病理參數的關系

不同病理分級、不同FIGO分期、有無淋巴結轉移的子宮內膜癌患者Rap1b蛋白表達陽性率比較,差異均具有統計學意義(P<0.05)。不同病理類型、不同肌層浸潤程度比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 Rap1b蛋白表達與子宮內膜癌臨床病理參數的關系(例,%)

2.3 子宮內膜癌患者的預后與Rap1b蛋白表達的關系

經過3年隨訪后,82例子宮內膜癌患者中死亡8例,存活率為90.24%(74/82),其中8例死亡患者中Rap1b蛋白陽性有6例。23例復發,復發率為20.73%(17/82)。Rap1b陽性組3年累積存活率[87.93%(51/58)]低于Rap1b陰性組[95.83%(23/24)](χ2=1.204,P=0.273)。見圖1。

圖1 生存曲線

3 討論

不同的病理性途徑激活,可導致子宮內膜癌腺體細胞生長異常,進一步促進疾病進展。比如體質量指數的增加或雌激素活性異常上升后,均可以促進子宮內膜腺體的異常分化,從而進一步增加疾病發生風險[7]。臨床上主要通過評估子宮內膜癌患者病理特征指標,從而為患者制定符合疾病病情的診療方案,也可評估患者的預后恢復情況。糖鏈蛋白125(CA125)、糖鏈蛋白199(CA199)等均可以作為疾病病情的評估指標,但是參考價值較低,尤其對于不同臨床病理分期或不同分化程度的患者預測價值均較低[8]。影像學檢查在腫瘤疾病病理特征中具有重要作用,但是也具有一定不足,如存在滯后性,導致疾病診斷的假陰性率高[9]。本研究分析Rap1b蛋白在子宮內膜癌患者中的表達水平,可為臨床提供定量化參考。Rap1b屬于Ras家族關鍵成員之一,其活性被異常激活之后,可參與多種腫瘤疾病的發生和發展[10]。如劉云昊的研究中[11],研究表示Rap1b在胃癌組織內表達明顯較正常組織高,且與患者預后不良呈現正相關關系。又如高雅茹等研究報道[12],下調Rap1b蛋白表達,可以抑制卵巢癌細胞遷移及侵襲,進而抑制卵巢癌疾病進展。又如張靈敏等研究發現[13],調節Rap1b蛋白表達可以促進是食管鱗狀細胞癌細胞的遷移等。上述研究均表明Rap1b蛋白表達參與多種癌癥疾病的發生和發展。而本次研究也顯示,Rap1b蛋白在癌組織中表達較正常組織高,研究結果與以往Rap1b蛋白在其他腫瘤疾病中的結果具有一致性,基于此實驗結果,進一步推測Rap1b蛋白參與了子宮內膜癌疾病進展。

Rap1b蛋白表達與子宮內膜癌患者臨床病理參數的關系,發現不同病理分級、不同FIGO分期、是否出現淋巴結轉移的子宮內膜癌患者Rap1b蛋白表達陽性率比較,均存在差異性,說明FIGO分期越晚、組織分化程度越差或者淋巴結轉移,Rap1b蛋白表達陽性率越高。分析其原因可能由于Rap1b蛋白通過調節PI3K/AKT/mTOR通路或β-catenin通路等抑制子宮內膜癌自噬、凋亡或促進其生長轉移,促進子宮內膜癌細胞生物學行為,最終加劇疾病進展[14-15]。但是在不同病理類型、不同肌層浸潤程度比較,不存在統計差異,表明子宮內膜癌細胞穿過基底膜組織過程中,Rap1b蛋白對其無任何影響[16-17]。經過3年的隨訪發現,Rap1b陽性組2年累積存活率87.93%(51/58)低于Rap1b陰性組95.83%(23/24)(χ2=1.204,P=0.273)。通過檢測Rap1b蛋白陽性與患者預后可能有關,無顯著性差異可能與納入樣本量數少有關。

綜上所述,Rap1b蛋白表達與子宮內膜癌疾病進展密切相關,可以成為子宮內膜癌疾病早期診斷、治療及預測預后的指標。但是本次研究也存在局限性,實驗次數數較少,研究結果準確性待進一步提高。