喉癌組織中let-7a表達及其臨床意義

董玉科 李玉杰 黃 煒 李 韜 黨燕偉 許連方 申 曉 李蓓瑩 李鴻燕 黃麗潔

喉癌屬于臨床上常見的惡性腫瘤疾病之一,發病率范圍為5.7%～7.6%[1]。研究報道[2],2015年在我國范圍內新發喉癌達到2.64萬,其中死亡人數達到了1.45萬,且此類疾病的發病率依舊呈現上升趨勢。喉鱗狀細胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)屬于喉癌中較為常見的類型,占據95%以上。近幾年,臨床常通過手術、放化療及生物治療等方式用于喉癌患者,近期預后有效得到改善,但是患者遠期生存效果并不理想。研究報道[3],晚期喉癌患者5年生存率僅僅51%左右,此類患者常見死因為局部復發及轉移。近年來,人們生活質量明顯得到改善,使得患者對生存質量提出更高的要求,以往治療理念是提高生存幾率,現如今轉變為盡可能保留患者喉功能。由此,積極探討喉癌細胞生物學行為特征,在診斷、治療喉癌方面具有重要意義。因此,積極尋找敏感性、特異性高的生物標志物屬于目前研究重點。MicroRNA屬于一類非編碼小RNA,其與微泡包裹,或者結合于蛋白質復合物中,從而分泌至細胞外,再輸送至兩個鄰近的遠處的細胞,最終發揮調節作用。miRNA主要通過調節細胞通路,用于治療癌癥等。let-7a屬于MicroRNA分子中的成員之一,能與癌基因的3＇非編碼翻譯區相互作用,進而下調靶基因表達,最終抑制腫瘤細胞的生長、浸潤等[4]。關于喉癌let-7a水平與喉癌的關系尚且需要進一步探討,為尋找新型生物標志物提供參考,內容如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

將2019年12月至2022年12月在本院就診的80例經病理檢查確診為喉癌的患者作為研究對象。其中男性48例,女性32例,年齡≤60歲43例,>60歲37例,腫瘤類型:聲門上型9例,聲門型65例,聲門下型6例,分化程度:高分化52例,中低分化28例,TNM分期:Ⅰ～Ⅱ期59例,Ⅲ～Ⅳ期21例,49例吸煙,44例飲酒,淋巴結轉移:無54例,有26例。

1.2 研究方法

采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測let-7a表達。依據Trizol試劑盒(生產廠家:上海名勁生物科技有限公司)說明書步驟操作提取血清總RNA,采用Super Script Ⅲ試劑盒(北京智杰方遠科技有限公司)將上述獲取的RNA進行反轉錄操作,合成cDNA。采用qRT-PCR MasterMix試劑盒(北京百奧萊博科技有限公司)進行qRT-PCR,用于檢測let-7a水平。具體反應條件:95 ℃預變性30 s,95 ℃變性5 s,50 ℃復性15 s,75 ℃延伸30 s,包括40個cycles。內參基因為U6,let-7a引物來源于生工生物工程(上海)股份有限公司。采用2-△△Ct計算let-7a相對表達量。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 let-7a表達與喉癌患者臨床病理參數的關系

let-7a表達量在分化程度、TNM分期、淋巴結轉移方面比較,P<0.05,在性別、年齡、腫瘤類型、吸煙史及飲酒史方面比較,P>0.05。見表1。

表1 let-7a表達與喉癌患者臨床病理參數的關系

2.2 ROC曲線分析let-7a水平診斷喉癌的價值

ROC曲線分析顯示,曲線下面積(Area Un-der Curve,AUC)為0.851,95%置信區間為0.775～0.933,靈敏度為73.9%,特異度為78.2%,let-7a相對表達量的最佳臨界值為0.77。見圖1。

圖1 ROC曲線分析let-7a水平診斷喉癌的價值

3 討論

let-7屬于一類序列、表達模式、調控功能均高度保守的miRNA,let-7a是let-7家族成員之一。研究報道[5],let-7a屬于腫瘤抑制因子。let-7a在肺癌[6]、乳腺癌[7]、淋巴瘤[8]等疾病中表達較低,說明低水平的let-7a在多種腫瘤疾病的發生和發展中具有重要作用。研究顯示[9],let-7a可負性調控基因表達水平,抑制頭頸癌疾病進展。又如周斌等的研究稱[10],甲狀腺乳頭狀癌患者let-7a表達水平明顯下調。let-7a在不同惡性腫瘤疾病的作用及可能存在的機制越來越深入,let-7a可指望成為評估腫瘤患者病情、預后的分子標志物。目前關于miRNA與腫瘤疾病的關系研究報道較多,但是關于let-7a與喉癌的關系值得深入探討。

本次研究結果顯示,喉癌患者let-7a表達量在分化程度、TNM分期、淋巴結轉移方面比較,P<0.05,此項研究結果說明let-7a水平的下降與喉癌細胞侵襲、轉移存在關系。研究稱[11],上調喉癌細胞中let-7a表達,可通過靶向抑制高遷移率族蛋白A2(high Mobility Group A2,HMGA2)表達,進一步控制細胞增殖、遷移等,而通過下調let-7a,并促進HMGA2表達上升后,腫瘤細胞惡性程度增強。ROC曲線分析顯示,let-7a水平診斷喉癌AUC為0.851,靈敏度為73.9%,特異度為78.2%,說明let-7a對喉癌患者病情監測具有一定參考價值。

綜上所述,let-7a水平在喉癌呈低表達,其水平變化與分化程度、TNM分期、淋巴結轉移有關,且且可作為預測喉癌發病風險敏感指標。但是let-7a輔助診斷喉癌的價值依舊存在限制,腫瘤疾病的發生機制較為復雜,無法以miRNA發生變化來解釋,或許可能存在更多血清miRNA變化及機制的探討有利于挖掘喉癌疾病發生機制。