三陰性乳腺癌患者中S1PR1、Caspase-3 的表達及其與病理特征的關系分析

范學亮， 王中山， 王春鋒

（鄭州金域臨床檢驗中心 病理科， 河南 鄭州 450016）

三陰性乳腺癌 （TNBC） 是雌激素受體、 孕激素受體、 表皮生長因子2 均表達為陰性的一類乳腺癌。 相比其他乳腺癌，TNBC 的發病年齡更小， 侵襲性更強， 對激素不敏感， 預后較差， 嚴重危及患者生命［1］。 1－磷酸神經鞘氨醇受體1 （S1PR1）是具有生物活性的鞘脂類代謝物， 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－3（Caspase－3） 是Caspase 家族的一種［2］。 研究［3］顯示S1PR1、Caspase－3 在腫瘤細胞的增殖、 侵襲過程中起到了重要作用，而TNBC 的發生發展離不開細胞的異常增殖。 本研究探討S1PR1、 Caspase－3 在TNBC 中的表達及其與病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料回顧性分析2021 年8 月至2022 年8 月我中心76 例乳腺癌患者的病歷資料， 其中TNBC 患者20 例 （TNBC組）， 非TNBC 患者56 例 （非TNBC 組）。

1.2 檢測方法①標本處理。 將術中切除的乳腺癌組織標本用10%中性福爾馬林固定， 石蠟包埋， 切片機連續4 μm 切片；之后將標本切片放在烤片機上烘烤2 h， 并在60 ℃恒溫箱中靜置一夜。 ②檢測操作。 采用免疫組化EnVision 法染色并檢測標本組織中S1PR1、 Caspase－3 表達。 在0.01 mmol／L 檸檬酸鈉緩沖液中高溫高壓修復切片抗原， 先用3% H2O2孵育20 min， 再用5% BSA 封閉30 min， 分別 滴加S1PR1、 Caspase－3 一抗，在4 ℃下孵育過夜； 在室溫下滴加HRP 標記的抗兔IgG 孵育50 min， 并通過DAB 顯色； 之后用蘇木精復染、 脫水、 封片。 以陽性組織切片作為陽性對照， 以PBS 液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定采用數字切片掃描儀將免疫組化切片轉換為數字切片， 并用相關軟件進行圖像處理判讀。 細胞漿內呈現棕色或淺棕色顆粒為Caspase－3 陽性細胞， 細胞質呈棕黃色為S1PR1 陽性細胞。 染色強度按比例計數后， 根據百分比進行分類， 細胞總數200 個， 陽性細胞占比≤5%為陰性 （－）， 5%＜陽性細胞≤25%為弱陽性 （＋）， 25%＜陽性細胞≤50%為陽性（＋＋）， 陽性細胞＞50%為強陽性 （＋＋＋）。

1.4 統計學方法采用SPSS 21.0 統計軟件處理數據。 計量資料以±s 表示， 采用t 檢驗； 計數資料以n （%） 表示， 采用χ2檢驗。 P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床病理特征TNBC 組年齡≤50 歲11 例， ＞50 歲9 例；絕經前9 例， 絕經后11 例； 腫瘤直徑≤2 cm 8 例， 腫瘤直徑＞2 cm 12 例； 有淋巴結轉移9 例， 無淋巴結轉移11 例； TNM 分期Ⅰ期6 例， Ⅱ期9 例， Ⅲ期5 例； 組織學分級Ⅰ級3 例， Ⅱ級12 例， Ⅲ級5 例。 非TNBC 組年齡≤50 歲31 例， ＞50 歲25例； 絕經前23 例， 絕經后33 例； 腫瘤直徑≤2 cm 21 例， 腫瘤直徑＞2 cm 35 例； 有淋巴結轉移36 例， 無淋巴結轉移20例； TNM 分期Ⅰ期17 例， Ⅱ期26 例， Ⅲ期13 例； 組織學分級Ⅰ級8 例， Ⅱ級42 例， Ⅲ級6 例。 兩組的臨床病理特征均無明顯差異 （P ＞0.05）。

2.2 S1PR1、 Caspase－3 表達TNBC 組標本中S1PR1、 Caspase－3 的陽性表達率高于非TNBC 組 （P ＜0.05）。 見表1。

表1 兩組乳腺癌標本中的S1PR1、 Caspase－3 表達比較 ［n （%）］

2.3 S1PR1、 Caspase－3 陽性表達與TNBC 病理特征的關系不同年齡、 月經狀況、 腫瘤直徑、 組織學分級的TNBC 患者的S1PR1、 Caspase－3 表達無明顯差異 （P ＞0.05）； 但不同淋巴結轉移情況、 TNM 分期的TNBC 患者的S1PR1、 Caspase－3 表達存在差異 （P ＜0.05）。 見表2。

表2 S1PR1、 Caspase－3 陽性表達與TNBC 病理特征的關系［n （%）］

3 討論

TNBC 作為乳腺癌的一種， 因其惡性度高且無靶向藥物治療指征而受到臨床關注。 在基因表達譜上， TNBC 具有顯著的分子水平上的異質性， 且該種異質性使得其生物學行為存在差異， 所以需要進一步對其進行分析， 以便更好地進行分類管理。 S1PR1 是S1PR 的一種， 與已發現的其他4 種S1PR 都屬于G 蛋白偶聯受體， 既參與了細胞生長、 分化、 遷移、 免疫應答等生理過程， 又在多種惡性腫瘤的發生、 發展中起到了一定作用［4］。 Caspase－3 所在的Caspase 家族是調控細胞凋亡的核心機制， 被認為是Caspase 家族最關鍵的一類凋亡執行細胞。當Caspase－3 表達減弱或缺失時， 可能會導致細胞異常增殖或惡性轉化， 在多種惡性腫瘤的發生發展中起到了重要作用。

本研究結果顯示， TNBC 組標本中S1PR1、 Caspase－3 的陽性表達率高于非TNBC 組 （P ＜0.05）， 提示S1PR1、 Caspase－3在TNBC 中表達升高。 研究［5］表明， Caspase－3 在乳腺癌組織中的表達與患者的年齡、 月經狀況無關 （P ＞0.05）， 與TNM 分期及淋巴結轉移情況有關 （P ＜0.05）。 本研究結果顯示， 不同年齡、 月經狀況、 腫瘤直徑、 組織學分級的TNBC 患者的S1PR1、 Caspase－3 表達無顯著差異 （P ＞0.05）， 但不同淋巴結轉移情況、 TNM 分期的TNBC 患者的S1PR1、 Caspase－3 表達存 在 顯 著 差 異 （P ＜0.05）， 提 示S1PR1、 Caspase－3 表 達 與TNBC 患者的年齡、 月經狀況、 腫瘤直徑、 組織學分級無關，與淋巴結轉移情況、 TNM 分期有關。 王娟等［6］的研究結果顯示， S1PR1 表達與TNBC 患者年齡、 腫瘤直徑及臨床分期無關（P ＞0.05）， 但S1PR1 高表達TNBC 患者的組織學分級高、 淋巴結轉移率高 （P ＜0.05）， 與本研究結果一致。

綜上所述， S1PR1、 Caspase－3 在TNBC 患者中表達升高，且兩者的表達與淋巴結轉移情況、 TNM 分期具有密切聯系。S1PR1、 Caspase－3 在TNBC 患者中的表達特性可以為臨床診斷TNBC 及未來研發更有效的治療靶點藥物提供新的方向。