乙肝肝硬化患者血清TLRs、vWF 水平表達及與患者肝功能的關系

李翠蘭，姚輝前，陳燕春

1.巨野縣人民醫院檢驗科，山東菏澤 274900；2.巨野縣北城醫院普外科，山東菏澤 274900；3.鄆城縣人民醫院檢驗科，山東菏澤 274700

乙肝即為慢性乙型肝炎，由乙型肝炎病毒（hepadnavividae, HBV）引發，HBV 感染呈世界流行性，但不同地區HBV 感染的流行強度存在差異，病死率較高，尤其是HBV 感染相關的肝硬化患者，病死率高達30%[1-2]。乙肝肝硬化是乙肝進展的結果，分為代償期與失代償期，早期無明顯癥狀，隨著疾病的進展，疾病所屬類型不同，臨床癥狀也有所差異，代償期可出現輕度乏力、食欲減退、腹脹等癥狀，失代償期會存在明顯的肝功能失代償現象，對患者的生命健康造成嚴重威脅，所以對乙肝肝硬化患者的早期診斷尤為重要[3-4]。現階段檢查機體肝功能常用的方法為肝細胞穿刺活檢法，但會對機體造成一定創傷，且對技術要求較高，臨床應用受到了限制，需要尋找臨床應用價值更高的可反應機體肝功能的標志物。血清單核細胞Toll 樣受體（toll-like receptors, TLRs）可識別細菌、病毒等病原體相關分子模式，參與免疫、抵御微生物入侵[5-6]。血管性假血友病因子（von willebrand factor, vWF）屬于多聚體糖蛋白，水平高低與機體肝功能有密切關系[7-8]。現階段關于乙肝肝硬化患者的TLRs、vWF 水平表達及與肝功能的相關性的研究較少，本研究在此基礎上選取了巨野縣人民醫院2020年1 月—2021年1 月診治的26例乙肝肝硬化患者作為觀察組，選取同期本院收治的26 例未發生肝硬化的乙肝患者為對照組進行研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇于本院診治的26 例乙肝肝硬化患者視為觀察組，選取同期本院收治的26 例未發生肝硬化的乙肝患者為對照組。觀察組男16 例，女10 例；年齡40～66 歲，平均（53.24±10.17）歲；肝功能Child-Pugh 分級：A 級10 例，B 級9 例，C 級7 例。對照組男17 例，女9 例；年齡41～67 歲，平均（53.36±10.20）歲；肝功能Child-Pugh 分級：A 級11 例，B 級9 例，C 級6例。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究已獲得本院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①觀察組經影像學、實驗室檢查確診為乙肝肝硬化者；②入院前未接受過肝臟疾病治療者；③配合度高者。

排除標準：①存在心肺功能障礙者；②存在嚴重感染性疾病者；③自身免疫系統障礙引起的肝臟疾病者。

1.3 方法

（1）血清TLRs[單核細胞Toll 樣受體2（TLR2）、單核細胞Toll 樣受體4（TLR4）]、血管性假血友病因子（vWF）水平檢測方法：①血清vWF 水平檢測。采集患者空腹外周靜脈血5 mL，置入含檸檬酸三鈉的試管中，1 500 r∕min 離心15 min，分離血清，利用酶聯免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）檢測患者vWF 水平。②血清單核細胞Toll樣受體（TLR2、TLR4）水平檢測方法。采集患者外周靜脈血2 mL，置于抗凝管內，分別為每位患者標記A、B 兩支試管，A 試管為陰性對照組，B 試管中加入聚乙烯（polyethylene, PE）標記的鼠抗人TLR2、TLR4，劑量為10 μL，加入抗原提呈細胞（antigenpresenting cells, APC）標記的抗體10 μL，然后加入100 μL 抗凝全血；利用流式細胞儀檢查細胞混懸液，利用平均熒光強度幾何均數表示TLRs（TLR2、TLR4）水平。

（2）肝功能分級：根據肝功能分級Child-Pugh分級標準評價患者的肝功能，包含5 個指標，總分5～15 分，分值越高，肝功能越差，A 級為分值≤6 分，B 級為分值7～9 分，C 級：10～15 分[7]。

1.4 觀察指標

①比較兩組的血清單核細胞Toll 樣受體（tolllike receptors, TLRs)（TLR2、TLR4）、血管性假血友病因子（von willebrand factor, vWF）水平。

②比較觀察組不同肝功能分級患者的血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平。

③分析乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平和肝功能的之間的關系。

1.5 統計方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據處理，符合正態分布的計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以[n(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平比較

觀察組血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平比較(±s)

表1 兩組患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平比較(±s)

組別觀察組（n=26）對照組（n=26）t 值P 值TLR2（%）72.41±4.66 42.61±4.50 23.456＜0.001 TLR4（%）82.34±5.66 69.40±5.71 8.207＜0.001 vWF（ng∕mL）32.59±2.25 18.51±2.44 21.631＜0.001

2.2 觀察組不同肝功能分級患者的血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平比較

觀察組26 例乙肝肝硬化患者，經肝功能分級Child-Pugh 分級標準評價顯示，肝功能A 級10 例（38.46%），B 級9 例（34.62%），C 級7 例（26.92%），A級乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF水平及Child-Pugh 評分低于C 級、B 級，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 觀察組不同肝功能分級患者的血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平比較(±s)

表2 觀察組不同肝功能分級患者的血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平比較(±s)

注：與A 級相比，*P＜0.05；與B 級相比，△P＜0.05

肝功能分級A 級（n=10）B 級（n=9）C 級（n=7）F 值P 值TLR2（%）61.26±4.22（74.36±4.37）*（88.52±5.69）*△69.832＜0.001 TLR4（%）71.20±6.55（83.69±6.29）*（102.31±8.97）*△38.668＜0.001 vWF（ng∕mL）22.31±2.09（34.19±2.16）*（45.22±2.37）*△228.922＜0.001 Child-Pugh 評分（分）4.11±0.32（8.01±0.65）*（12.14±1.08）*△272.319＜0.001

2.3 乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平和肝功能的之間的關系分析

肝功能A 級、B 級、C 級與血清TLRs（TLR2、TLR4）均呈正相關（P＜0.05）。見表3。

表3 乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平和肝功能的之間的關系分析

2.4 乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平評價肝功能的效能分析

血清TLR2 的AUC、敏感度、特異度分別為1.000、100.00%、100.00%，TLR4 的AUC、敏感度、特異度分別為0.953、92.30%、92.30%，vWF 的AUC、敏感度、特異度分別為1.000、100.00%、100.00%，見表4。

表4 乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平評價肝功能的效能

3 討論

本研究結果顯示，觀察組TLR2（72.41±4.66）% 、TLR4（82.34±5.66）% 水平高于對照組（42.61±4.50）%、（69.40±5.71）%（P＜0.05），A 級乙肝肝硬化患者TLR2、TLR4 水平及Child-Pugh 評分低于C 級、B 級（P＜0.05），證實了TLR2、TLR4與乙肝肝硬化患者肝功能損傷有密切關系，與機體的肝功能損傷程度呈正相關。阿迪萊·圖爾蓀尼亞孜等[9]學者的研究中乙肝肝硬化組的TLR2、TLR4 分別為（73.09±7.89）% 、（83.57±10.23）%，高于正常對照組的（42.52±5.69）%、（68.11±9.26）%（P＜0.05），認為血清TLR2、TLR4與乙肝肝硬化患者的肝功能狀態存在密切聯系，與本研究觀點一致。分析原因：血清TLRs 可激活機體內的炎癥介質，如白細胞介素-6（interleukin-6, IL-6）、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α, TNF-α）等。TLR2、TLR4 屬于TLRs，均存在于細胞表面，被激活后可發生遷移，且TLR2能夠識別脂多肽等配體[10-11]。且TLR4 與TLR2具有相似的識別病原菌的功能，同時還能識別病原菌的核酸，另外可刺激體外經分離的外周單個核細胞，使其分泌大量IL-6、TNF-α 等促炎因子，引起機體的炎癥反應，加重乙肝肝硬化患者的肝功能異常程度，因此可發現TLR2、TLR4與機體的肝功能損傷程度呈正相關[12-13]。而血清TLR2 的AUC、敏感度、特異度分別為1.000、100.00%、100.00%，TLR4 的AUC、敏感度、特異度分別為0.953、92.30%、92.30%，反應了血清TLR2、TLR4 評估肝功能狀態的可靠性。

觀察組vWF 水平高于對照組，A 級乙肝肝硬化患者vWF 水平及Child-Pugh 評分低于C 級、B 級（P＜0.05），隨著乙肝肝硬化等級的升高，vWF 水平也隨之升高，反應了乙肝肝硬化患者的vWF 水平會異常升高，且其水平變化與機體肝功能損傷程度呈正相關。莊焱等[14]學者的研究中，急性肝病患者的vWF水平為158.30～194.10 ng∕mL，慢性肝病組的為vWF水平為185.30～235.35 ng∕mL，認為vWF 可用于評估不同類型肝病患者的肝功能狀態，慢性肝病患者的vWF 水平高于急性肝病毒患者，與本研究觀點有相似之處。分析原因：vWF 屬于一種超大分子的糖蛋白，來源于血管內皮細胞，可參與機體炎癥的發生、組織的損傷等病理生理過程，當機體肝臟發生病變時，由于肝炎病毒、細菌衍生物、內毒素等因素的共同作用，內皮細胞發生活化、損傷，導致其分泌vWF的水平增加，所以可得出vWF 水平升高代表機體的乙肝肝硬化等級升高[15]。而經繪制ROC 曲線發現，vWF 的AUC、敏感度、特異度分別為1.000、100.00%、100.00%，說明了vWF 在反應乙肝肝硬化患者肝功能時的可靠性。

綜上所述，乙肝肝硬化患者血清TLRs（TLR2、TLR4）、vWF 水平會有所升高，且隨著肝臟損傷程度的加劇，其水平會隨之升高。