氣相色譜-串聯質譜法測定百合（干）中7 種有機磷農藥殘留

萬 靜，王健雄

（1.昆明市食品藥品檢驗所 食品檢驗中心，云南昆明 650032；2.云南水投供水投資有限公司，云南昆明 650051）

百合是一種藥食兩用的植物，其中淀粉、蛋白質、膳食纖維、維生素C、氨基酸及多種礦質元素的含量豐富，營養價值較高[1]。隨著我國對食品安全監管越來越嚴格，人們對食品安全越來越重視，農副產品中農藥殘留的檢測必不可少。有機磷類農藥（Organophosphorus Pesticides，OPPs）因種類多、廣譜性、藥效好、易降解等優點而被廣泛應用，但進入人體會產生神經毒性，嚴重時可導致呼吸麻痹而死亡，且有機磷農藥易降解的特性為檢驗檢測帶來了一定難度[2]。因此，本文選用QuEChERS 前處理技術，結合靈敏度高、通量高、抗干擾能力強的氣相色譜-串聯質譜法（Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，GC-MS/MS）進行檢測[3]，為百合（干）中7 種有機磷農藥殘留快速檢測、準確定量提供技術基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

7 種有機磷農藥（滅線磷、治螟磷、甲基對硫磷、毒死蜱、水胺硫磷、甲基異柳磷、蠅毒磷標準品）：100 mg·L-1；乙腈、乙酸乙酯：色譜純；Bond Elut QuEChERS 提取鹽包：4 g 硫酸鎂、1 g 檸檬酸鈉、0.5 g 檸檬酸氫二鈉、1 g 氯化鈉；PSA、C18、GCB：分析純。

1.2 儀器與設備

氣相色譜-三重四級桿串聯質譜儀7890B-7000D；AL104 電子天平；旋渦混合器（Multi Reax）；大容量冷凍離心機（Allegra X-30R）；超純水器（Arium?Comfort）；全自動平行濃縮儀（AutoEVA-20Plus）。

1.3 樣品處理方法

1.3.1 樣品的制備取百合（干）制品，粉碎成粉末，充分混勻過三號篩，放入聚乙烯袋中保存。

1.3.2 提取

樣品稱取3.00 g 于50 mL 的離心管，并加入10 mL水，渦旋混勻5 min，靜置30 min，加入15 mL 乙腈和一顆陶瓷均質子，渦旋提取振蕩5 min，再加入Bond Elut QuEChERS 提取鹽包，立即振蕩混勻，再渦旋振蕩5 min，5 000 r·min-1離心5 min。

1.3.3 凈化

吸取8 mL 提取液加到15 mL 離心管中（內含885 mg 硫 酸 鎂、300 mg PSA、100 mg C18、15 mg GCB），渦旋振蕩5 min，5 000 r·min-1離心5 min，取2 mL 凈化液于40 ℃水浴中氮吹至近干，加入1 mL 乙酸乙酯溶解，過0.22 μm 濾膜，待測定。

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜條件色 譜 柱：DB-5MS UI 石 英 毛 細 管 柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進樣口溫度：280 ℃；載氣流速：1.0 mL·min-1；不分流進樣，進樣量：1.0 μL；升溫程序：40 ℃保持1 min，以40 ℃·min-1升溫至120 ℃，再以8 ℃·min-1升溫至300 ℃保持5 min。

1.4.2 質譜條件

電子轟擊電離（EI）；電離能量70 eV，離子源溫度280 ℃，傳輸線溫度280 ℃，四極桿溫度150 ℃；溶劑延遲為4 min，多反應監測模式（MRM），目標農藥選擇一對定量離子、兩對定性離子，其具體參數見表1。

表1 7 種農藥質譜條件

1.5 標準系列制備

7 種農藥基質混合標準溶液配制：定量吸取各標準品于同一容量瓶，用乙酸乙酯稀釋成1.0 mg·L-1，再用空白百合（干）基質溶液進行稀釋，制成濃度為5 μg·L-1、10 μg·L-1、50 μg·L-1、100 μg·L-1、200 μg·L-1和300 μg·L-1的基質混合標準溶液。

1.6 基質效應評價

基質效應（ME）普遍存在于質譜分析中，對于GC-MS/MS 而言，絕大部分農藥存在基質增強效應，可按照公式（1）計算。當-20%＜ME＜20%時 為 弱 基 質 效 應； 當-50% ＜ME≤-20% 或20%≤ME＜50%為中等基質效應；當ME≤-50%或ME≥50%為強基質效應[4]。

式中：Sm為基質匹配標準曲線斜率；Ss為純溶劑標準曲線斜率。

2 結果與分析

2.1 提取條件選擇

百合（干）含水率較低，在萃取前加入適量水使其完全浸潤后，再加入萃取溶劑能更易滲透到細胞組織，從而增加萃取效果。乙腈對農藥的溶解性較好，在提取過程中易于提取，且共萃物少，農藥回收率高[5-6]。因此，本研究采用乙腈作為提取溶劑。

2.2 凈化條件選擇

QuEChERS 方法中凈化的填料主要是PSA、C18、GCB、MgSO4，可以有效去除樣品中的有機酸、糖類、脂類、色素等雜質，但各自使用量并非越多越好，因此本文對PSA、C18、GCB 的使用量進行考察。百合（干）顏色略黃，選用15 mg GCB 除色素，并分成4 組對PSA、C18用量作進一步考察（①885 mg MgSO4+15 mg GCB+150 mg PSA；②885 mg MgSO4+15 mg GCB+150 mg PSA+50 mg C18；③885 mg MgSO4+15 mg GCB+300 mg PSA+100 mg C18；④885 mg MgSO4+15 mg GCB+400 mg PSA+400 mg C18），在加入量為0.05 mg·kg-1百合（干）樣品中，按1.3 方法進行提取、凈化，結果表明，當只有PSA 凈化時，其農藥回收率均偏高，而在加入C18凈化后，凈化效果有所提高，說明PSA、C18聯合使用能有效去除百合飲片中的部分脂類物質。組合④中蠅毒磷回收率明顯下降，原因是PSA、C18過多對農藥產生吸附。組合③回收率最好，因此凈化條件選擇組合③。

2.3 回收率及精密度

當空白樣品添加量為0.025 mg·kg-1、0.050 mg·kg-1、0.100 mg·kg-1時，按照上述方法進行提取凈化，7 種農藥的回收率為71.79%～111.87%，相對標準偏差（RSD）在0.53%～4.59%，結果見表2。由表2 可知，本方法回收率高，重復性好，同時滿足《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）[7]中對回收率及精密度的要求。

表2 7 種農藥在百合（干）中3 個水平下的添加回收率和相對標準偏差

2.4 線性關系、檢出限、基質效應

按1.5 配制基質混合標準溶液，縱坐標為農藥定量離子的峰面積，橫坐標為基質混合標準溶液的質量濃度，制作標準曲線；對0.005 mg·L-1加標量樣品平行測定10 次，計算標準偏差得到方法檢出限；繪制純溶劑和基質標準曲線，并用公式（1）對基質效應進行評價，結果見表3。

表3 7 種農藥方法檢出限與基質效應

在0.005 ～0.300 mg·L-1，7 種農藥線性關系良好，相關系數（R2）均大于0.99，方法檢出限為0.80 ～2.43 μg·kg-1；7 種農藥均表現為強基質效應。因此，百合（干）中7 種有機磷農藥應采用基質標準曲線進行定量。

3 結論

本研究采用QuEChERS 前處理技術，基質匹配標準曲線的氣相色譜-串聯質譜法（GC-MS/MS），建立了百合（干）中7 種有機磷類農藥快速、準確定量的分析方法。樣品采用乙腈提取，加到內含885 mg硫酸鎂、300 mg PSA、100 mg C18、15 mg GCB 的分散固相萃取管中凈化，該方法在0.005 ～0.300 mg·L-1內線性關系良好，相關系數（R2）＞0.99，方法檢出限為0.80 ～2.43 μg·kg-1，平均回收率為71.79%～111.87%，相對標準偏差（n=6）小于5%。本方法方便快速，靈敏度高，重復性好，能有效消除基質效應，適合于對百合（干）中多種有機磷農藥含量的高效測定。