活性調節蛋白、高遷移率族蛋白1在真菌感染性鼻-鼻竇炎患者中表達水平及與T淋巴細胞亞群相關性

王 偉, 趙姍姍, 張 明, 季 民

1.濰坊醫學院,山東 濰坊 261053;2.同濟大學附屬東方醫院膠州醫院 耳鼻咽喉頭頸外科,山東 青島 266300

真菌感染性鼻-鼻竇炎是真菌在鼻腔、鼻竇內引起的一種特異性感染性疾病,主要表現為單側鼻塞、流膿涕、鼻涕帶血或有惡臭[1-2]。活性調節蛋白(regulated upon activation normal T-cell expressed and secreted,RANTES)是CC趨化因子家族成員,受T細胞調控、表達及分泌。高遷移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)是一種保守的非組蛋白DNA結合蛋白,參與炎癥的發生病理過程。有研究報道,RANTES、HMGB1多在鼻上皮細胞中呈高表達,參與鼻竇炎的發病[3-4]。免疫功能失衡及炎癥因子大量釋放是慢性鼻竇炎的重要誘因[5-6]。本研究旨在探討RANTES、HMGB1在真菌感染性鼻-鼻竇炎中的表達水平及其與T淋巴細胞亞群的相關性。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2020年4月至2022年5月同濟大學附屬東方醫院膠州醫院收治的120例真菌感染性鼻-鼻竇炎患者為研究對象,并將其納入B組。納入標準：符合真菌感染性鼻-鼻竇炎相關診斷標準[7];經CT掃描診斷為慢性鼻-鼻竇炎;保守治療效果不理想。排除標準：哮喘免疫性疾病;既往鼻竇部手術史;惡性腫瘤;相關呼吸道疾病。另選取同期40例健康體檢者納入A組。A組中,男性23例,女性17例;年齡20～61歲,平均年齡(40.5±16.4)歲。B組中,男性60例,女性60例;年齡21～62歲,平均年齡(41.5±16.4)歲;病程3～13個月,平均病程(8.0±4.0)個月;鼻腔黏膜Lund-Kennedy鼻內鏡評分法評估患者的臨床癥狀,輕度72例,中度27例,重度21例。兩組研究對象性別、年齡比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準。所有研究對象均知情并簽署同意書。

1.2 研究方法 抽取所有研究對象空腹靜脈血4 ml,200 r/min離心15 min,離心半徑5 cm,于-60℃冰箱內保存備用。采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法檢測RANTES水平。采用酶聯免疫吸附法檢測血清HMGB1水平,將待檢血清標本置于室溫中,配置標準品,清洗并拍干酶標板,依次加入標準液、樣本、檢測抗體,封板,震蕩均勻后置于室溫中孵育2 h,洗板,加入酶標記物,震蕩,置于室溫中孵育45 min,加入終止液終止反應,于450 nm處測吸光值,計算HMGB1水平。取兩管潔凈試管做抗凝處理,分別將20 μl的CD4+、CD8+單克隆抗體導入試管,室溫37℃孵育30 min,加入融血劑溶血,2 000 r/min離心2 min,棄上清液,洗滌,加入固定劑150 μl,將0.5 ml的PBS混合均勻制備為懸液,應用流式細胞儀檢測CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平。

2 結果

2.1 兩組血清RANTES、HMGB1、T淋巴細胞亞群水平比較 B組RANTES、HMGB1、CD4+、CD4+/CD8+水平高于A組,CD8+水平低于A組,差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 B組不同嚴重程度患者血清RANTES、HMGB1、T淋巴細胞亞群水平比較 中度與重度患者RANTES、HMGB1、CD4+、CD4+/CD8+水平高于輕度患者,CD8+低于輕度患者,差異有統計學意義(P<0.05)。重度患者RANTES、HMGB1、CD4+、CD4+/CD8+水平高于中度患者,CD8+水平低于輕度患者,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3 多因素Logistic回歸分析結果 將真菌感染性鼻-鼻竇炎作為因變量,將RANTES、HMGB1、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+作為自變量納入多因素Logistic回歸分析。結果顯示,RANTES、HMGB1、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+是真菌感染性鼻-鼻竇炎發生的獨立危險因素(P<0.05)。見表3。

2.4 血清RANTES、HMGB1表達與T淋巴細胞亞群水平相關性 RANTES、HMGB1表達與CD4+、CD4+/CD8+水平呈正相關(P<0.05),與CD8+水平呈負相關(P<0.05)。見表4。

表1 兩組血清RANTES、HMGB1、T淋巴細胞亞群水平比較

表2 B組中不同嚴重程度患者的T淋巴細胞亞群水平比較

表3 多因素Logistic回歸分析結果

3 討論

真菌感染性鼻-鼻竇炎是臨床常見的侵襲性疾病,病程較長,且不易根治,極易復發[8-9],患者易出現頭疼、發熱、消化功能與睡眠質量下降等癥狀,若未及時治療,會增加眼部、肺部并發癥的發生風險,甚至死亡[10-11]。RANTES是血管平滑肌細胞、T淋巴細胞、血小板分泌的一種趨化因子[12-13]。

表4 血清RANTES、HMGB1表達與T淋巴細胞亞群水平相關性

T淋巴細胞亞群是機體細胞免疫指標。有研究報道,機體免疫功能與疾病嚴重程度密切相關,高水平的CD69、RANTES是慢性鼻-鼻竇炎患者鼻息肉的獨立危險因素[14]。本研究發現,RANTES在真菌感染性鼻-鼻竇炎患者中呈高表達。這提示,RANTES在鼻上皮細胞的炎癥浸潤中起到重要作用,其誘導T細胞結合產生生物學效應,參與免疫應答調節,促進炎癥的發展。

HMGB1是一種促炎性細胞因子,廣泛存在于生物體各細胞中,與晚期糖基化、Toll樣受體結合,促進炎癥因子分泌[15]。HMGB1在炎癥反應中作為一種警報信號,能夠激活免疫細胞,刺激免疫細胞遷移,促進識別細菌產物,抑制凋亡細胞的吞噬作用,進而維持炎癥反應[16]。有研究報道,HMGB1可誘導內皮細胞活化,增加炎癥細胞的存活,引起組織細胞損傷,導致炎癥發生[17]。本研究發現,HMGB1在真菌感染性鼻-鼻竇炎患者中呈高表達,提示HMGB1參與炎性反應的發生發展,與既往研究[18]結果一致。

T淋巴細胞亞群是檢測機體細胞免疫的指標,能夠對機體多種疾病進行診斷,并根據其病機進行分析,有利于患者預后[19-20]。本研究中,CD4+、CD4+/CD8+在真菌感染性鼻-鼻竇炎患者中隨病情嚴重程度呈上升趨勢,CD8+呈下降趨勢,提示真菌感染性鼻-鼻竇炎患者細胞免疫失衡,免疫功能降低[21]。本研究還發現,RANTES及HMGB1表達與CD4+、CD4+/CD8+水平呈正相關,與CD8+水平呈負相關,且RANTES、HMGB1、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+是真菌感染性鼻-鼻竇炎發生的獨立危險因素,提示其可作為診斷真菌感染性鼻-鼻竇炎患者的生物標志物。

綜上所述,RANTES、HMGB1在真菌感染性鼻-鼻竇炎中呈高表達,與CD4+、CD4+/CD8+呈正相關、與CD8+呈負相關,能夠在一定程度上起預測真菌感染性鼻-鼻竇炎病情的作用。