中、美、歐藥典藥材薄層鑒別差異與特征圖譜的應用

李喬喬, 李蘭蘭, 安澤沖, 焦飛艷, 吳瑩瑩, 李林燕, 張明惠, 李新霞

(1新疆醫科大學藥學院, 烏魯木齊 830017; 2天然藥物活性組分與釋藥技術重點實驗室, 烏魯木齊 830000;3澳門科技大學醫學院,澳門 999078; 4新疆中藥(民族藥)制藥共性關鍵技術研究重點實驗室, 烏魯木齊 830000)

薄層色譜鑒別法(Thin layer chromatography, TLC)是將適宜的固定相均勻涂抹在玻璃板、滌綸片或鋁制薄板上,待點樣、展開后根據比移值(Rf值)與適宜的對照物按同法所得色譜圖的Rf值作對比,用于藥材成分的鑒別[1-2]。TLC的特點是可以同時分離多個成分,成本低,色譜圖直觀,信息量大,還具有設備簡單、操作方便、專屬性好、分辨率較高等優點[3-4]。隨著TLC的儀器化及聯用技術的發展,使得TLC在藥材及相關制劑定性定量分析中得以廣泛應用[5-7]。藥材特征圖譜是利用多指標對藥材所含化學成分的種類和數量進行全面、綜合的質量控制。目前特征圖譜常見于高效液相和氣相色譜領域,在薄層色譜領域少見。《美國藥典》(United States Pharmacopoeia, USP)、《歐洲藥典》(European Pharmacopoeia, EP)及《美國草藥綱目》(Herbal Medicines Compendium, HMC)在TLC中多采用特征圖譜,采用1個對照品或替代對照品,實現對藥材的多指標控制。《中國藥典》[8](Chinese Pharmacopoeia, ChP)中TLC通常采用1個對照品或對照藥材鑒別藥材中相應的1個成分。薄層鑒別特征圖譜應用一到兩個易獲得的替代對照品,以Rf值和相對比移值對薄層色譜圖中多個成分定位鑒別,與含量測定的“一測多評”概念相似。本研究選取大蒜粉、甘草浸膏、胡蘆巴和小茴香4味藥材,采用ChP、USP、EP、HMC中TLC方法,分析比較中、美、歐藥典在對照品選擇及結果描述中的差異,并選取經典藥材人參和銀杏葉進行案例比對分析,現報道如下。

1 材料與儀器

1.1 儀器ME204E分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司);硅膠板(青島海洋化工有限公司)。

1.2 試藥丙氨酸(百靈威科技有限公司,批號LR40Q23),蛋氨酸(百靈威科技有限公司,批號LK70Q23),甘草酸銨(中國藥品生物制品鑒定所,批號0731-9704),甘草次酸(中國藥品生物制品鑒定所,批號110723-201715),甘草酸(北京英克萊科技公司,批號RDD-G00402112016),葫蘆巴堿(中國藥品生物制品鑒定所,批號110883-201203),茴香醛(中國藥品生物制品鑒定所,批號110838-201605),百里酚(百靈威科技有限公司,批號18227),茴香腦(四川維克奇生物科技有限公司,批號wkq22022804),4-羥基異亮氨酸(四川維克奇生物科技有限公司,批號wkq22011908),蒜氨酸(新疆埃樂欣藥業有限公司,批號AL210716),大蒜粉(新疆埃樂欣藥業有限公司,批號20191205),甘草浸膏(批號20191204)、胡蘆巴(批號20191025-111)、小茴香(批號20190814-106)購自新奇康藥業股份有限公司。

2 方法與結果

2.1 不同藥典TLC法對大蒜粉的分析USP-43 Powdered Garlic薄層鑒別項下規定,取大蒜粉1 g,加50%甲醇20 mL提取,旋轉蒸發儀濃縮至5 mL,作為供試品溶液。分別取蛋氨酸和蒜氨酸,加50%甲醇溶液,制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5 μL,分別點于同一硅膠薄層板上,以丁醇-正丙醇-冰醋酸-水(3∶1∶1∶1)為展開劑,噴以茚三酮溶液,100～105℃加熱10 min,在日光下檢視斑點。以蛋氨酸和蒜氨酸為對照,Rf值為0.89處有一個紫色斑點,Rf值為0.5處有一個粉紅色斑點為蛋氨酸,Rf值為0.43處有一個粉紅色斑點,Rf值為0.38處有一個亮橙色斑點,Rf值為0.30處有一個粉紫色斑點為蒜氨酸,在蒜氨酸的下方有一個橙粉色的斑點。EP-10.0 Garlic Powder薄層鑒別項下規定,取大蒜粉1 g,加甲醇5 mL,振搖60 s,作為供試品溶液。取丙氨酸對照品5 mg,加水10 mL溶解,用甲醇稀釋至20 mL,作為對照品溶液。吸取供試品溶液10 μL,對照品溶液20 μL,分別點于同一硅膠薄層板上,以冰醋酸-丙醇-水-無水乙醇(1∶1∶1∶2)為展開劑,噴以茚三酮溶液,105～110℃加熱5 min,在日光下檢視斑點。對照品色譜圖中,丙氨酸是位于上1/3處的紫色斑點。供試品色譜圖在與丙氨酸Rf值相同的位置有淺棕色斑點為蒜氨酸,在蒜氨酸的上方和下方通常有暗紫色斑點。USP-43中采用2個對照品,除鑒別大蒜粉中蒜氨酸與蛋氨酸外,采用Rf值規定其他4個成分,共6個成分,采用2個對照品控制6個成分,實現了“一測多評”,見圖1。由于蒜氨酸對照品不易獲得且價格昂貴,所以EP-10.0以丙氨酸替代對照品鑒別大蒜粉中蒜氨酸。從圖1b薄層色譜圖中可以看出丙氨酸與蒜氨酸的Rf值一致,因此采用價格低廉的丙氨酸代替蒜氨酸,使鑒別方法更為經濟、可操作性強。ChP-2020中大蒜的薄層鑒別采用與USP-43和EP-10.0不同的大蒜素為對照品,由于質控指標不同,在此不做比較。

a b注: a為USP薄層鑒別特征圖譜, b為EP薄層鑒別特征圖譜。圖1 USP-43和EP-10.0中大蒜粉TLC色譜圖

2.2 不同藥典TLC法對甘草浸膏的分析ChP-2020甘草浸膏薄層鑒別項下規定,取甘草浸膏1 g,加水40 mL溶解,用正丁醇振搖提取3次,每次20 mL(必要時離心),合并正丁醇液,用水洗滌3次,每次20 mL,正丁醇液蒸干,殘渣加甲醇5 mL使溶解,作為供試品溶液。取甘草酸銨對照品,加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液,作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5 μL,分別點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開劑,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點顯色清晰,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同的橙黃色熒光斑點。USP-43 Powdered Licorice Extract薄層鑒別項下規定,取甘草浸膏,加50%乙醇制成每1 mL含60 mg的溶液,作為供試品溶液。取甘草酸對照品,加70%乙醇制成每1 mL含5 mg的溶液,作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各2 μL,分別點于同一硅膠薄層板上,以丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)為展開劑,置紫外光燈(254 nm)下檢視。規定甘草酸Rf值為0.4,為深紫色斑點,此外還應該有其他斑點。EP-10.0 Liquorice Dry Extract For Flavouring Purposes薄層鑒別項下規定,取甘草浸膏0.3 g,加鹽酸30 mL,回流提取60 min,冷卻后用乙酸乙酯萃取兩次,每次20 mL,混合有機層通過覆蓋無水硫酸鈉的過濾器過濾,將濾液真空干燥,殘留物加乙酸乙酯-甲醇(1∶1)溶液2 mL溶解,作為供試品溶液。分別取甘草次酸和百里酚5 mg,加乙酸乙酯-甲醇(1∶1)溶液5 mL,作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各20 μL,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以氨水-水-乙醇(96%)-乙酸乙酯(1∶9∶25∶65)為展開劑,噴以茴香醛溶液,100～105℃加熱5～10 min,置日光下檢視。混合對照品色譜圖中的紫色斑點為甘草次酸,上方的紅色斑點為百里酚是用于定位的,供試品色譜圖中在與甘草次酸對照品相應位置顯相同顏色斑點的為甘草次酸;在與百里酚相應位置的下方應有1個黃色斑點。結果分析:ChP-2020中以甘草酸銨為對照品鑒別甘草浸膏中的甘草酸銨,未對其余斑點的位置及顏色做出規定。按照 ChP-2020中方法得到的色譜圖中對照品斑點顏色較淺,需加大點樣濃度或點樣量,見圖2a。USP-43以甘草酸為對照品,規定了甘草酸斑點的Rf值,來鑒別甘草浸膏中的甘草酸,且要求供試品色譜圖中存在其他斑點,見圖2b。EP-10.0中以甘草次酸為對照品,鑒別甘草浸膏中已知成分甘草次酸,以百里酚為替代對照品作為定位,指明在百里酚相應位置的下方應該有一個黃色的未知成分斑點,見圖2c。

a b c注: a為ChP-2020 TLC色譜圖, b為USP-43薄層鑒別特征圖譜, c為EP-10.0薄層鑒別特征圖譜。圖2 不同藥典甘草浸膏TLC色譜圖

2.3 不同藥典TLC法對胡蘆巴的分析ChP-2020胡蘆巴薄層鑒別項下規定,取胡蘆巴粉末1 g,加石油醚(30～60℃)30 mL,超聲處理30 min,靜置,棄去上清液,殘渣揮干,加甲醇30 mL,超聲處理30 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇1 mL使溶解,作為供試品溶液。取胡蘆巴堿對照品,加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液,作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各1 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以正丁醇-鹽酸-乙酸乙酯(8∶3∶1)為展開劑,在105℃加熱1 h,放冷,噴以稀碘化鉍鉀試液-三氯化鐵試液(2∶1)混合溶液。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點。HMC Trigonella foenum-graecum seed薄層鑒別項下規定,取胡蘆巴粉末1 g,加甲醇5 mL,65℃水浴加熱5 min,過濾,作為供試品溶液。取4-羥基異亮氨酸對照品,加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作為對照品溶液。吸取供試品溶液4 μL,對照品溶液2 μL,點于同一高效硅膠薄層板上,以正丁醇-冰醋酸-水(7∶2∶1)為展開劑,噴以茚三酮溶液,100～105℃加熱2 min,在可見光和紫外燈(365 nm)下檢視。在可見光下,供試品溶液色譜圖下半部分,最深的棕色斑點為4-羥基異亮氨酸。在4-羥基異亮氨酸下方應有一個較小的斑點(圖中*標記斑點),在4-羥基異亮氨酸上方有3個較淺的斑點(圖中*標記斑點)。在紫外光(366 nm)下,供試品溶液色譜圖下半部分,深棕色斑點為4-羥基異亮氨酸(圖中·標記斑點),在4-羥基異亮氨酸下方有一深棕色斑點(圖中▲標記斑點),在4-羥基異亮氨酸帶上方有兩個較弱的紫色斑點(圖中▼標記斑點),供試品溶液色譜圖上半部分有3個黃色斑點(圖中?標記斑點)。結果分析:ChP-2020中采用生物堿的展開系統及顯色劑,以胡蘆巴堿為對照品鑒別胡蘆巴中的葫蘆巴堿,只鑒別了葫蘆巴藥材中葫蘆巴堿見圖3a。HMC中采用氨基酸展開系統及顯色劑,以4-羥基異亮氨酸為對照品,顯色后先在可見光下檢視了5個斑點成分,又在紫外燈(365 nm)下檢視了6個斑點成分,實現了“一測多評”,見圖3b、3c。

a b c注: a為ChP-2020薄層鑒別色譜圖, b為HMC可見光下薄層鑒別特征圖譜, c為HMC紫外燈(366 nm)下薄層鑒別特征圖譜。圖3 ChP-2020和HMC中胡蘆巴TLC色譜圖

2.4 不同藥典TLC法對小茴香的分析ChP-2020小茴香薄層鑒別項下規定,取小茴香粉末2 g,加乙醚20 mL,超聲處理10 min,濾過,濾液揮干,殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解,作為供試品溶液。取茴香醛對照品,加乙醇制成每1 mL含1 μL的溶液,作為對照品溶液。吸取供試品溶液5 μL,對照品溶液1 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(17∶2.5)為展開劑,噴以二硝基苯肼試液。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同的橙紅色斑點。EP-10.0 Fennel,Sweet薄層鑒別項下規定,取小茴香粉末0.3 g,加二氯甲烷5 mL,振搖15 min,過濾,濾液在60℃水浴蒸干,加0.5 mL甲苯溶解,作為供試品溶液。取60 μL茴香腦對照品,溶解在5 mL己烷中,作為對照品溶液。分別吸取上述兩種溶液各10 μL,點于同一硅膠GF254薄層板上,以己烷-甲苯(1∶2)為展開劑,置紫外燈(254 nm)下檢視;噴以硫酸溶液,140℃下加熱5 min,在日光下檢視。在紫外光(254 nm)下,供試品色譜圖上1/3處的猝滅斑點為茴香腦。硫酸溶液顯色后在可見光下觀察,供試品色譜圖上1/3處的紫色斑點為茴香腦,在茴香腦斑點上方的紅褐色斑點為烯萜。結果分析:ChP-2020中以茴香醛為對照品鑒別小茴香藥材中的茴香醛,見圖4a。EP-10.0中以茴香腦為對照品,利用一張薄層板,顯色前后分別在兩種檢視條件下鑒別了小茴香中的茴香腦和烯萜,實現了“一測多評”,見圖4b、4c。

a b c注: a為ChP-2020薄層鑒別色譜圖, b為EP-10.0薄層鑒別紫外燈(254nm)下特征圖譜, c為EP-10.0薄層鑒別可見光下特征圖譜。圖4 ChP-2020和EP-10.0中小茴香TLC色譜圖

2.5 不同藥典TLC法對人參的分析ChP-2020人參薄層鑒別項下規定,取人參粉末1 g,加三氯甲烷40 mL,加熱回流1 h,棄去三氯甲烷液,藥渣揮干溶劑,加水0.5 mL攪拌濕潤,加水飽和正丁醇10 mL,超聲處理30 min,吸取上清液加3倍量氨試液,搖勻,放置分層,取上層液蒸干,殘渣加甲醇1 mL使溶解,作為供試品溶液。取人參對照藥材1 g,同法制成對照藥材溶液;再取人參皂苷Rb1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rf對照品及人參皂苷Rg1對照品,加甲醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液,作為對照品溶液。吸取上述3種溶液各1～2 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑,噴以10%硫酸乙醇溶液, 105℃加熱至斑點顯色清晰, 2分別置日光和紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜和對照品色譜相應位置上,分別顯相同顏色的斑點或熒光斑點,見圖5a。USP-43 Asian Ginseng薄層鑒別項下規定,取人參粉末1 g,加70%甲醇10 mL浸泡,回流提取15 min,冷卻后加甲醇至10 mL,作為供試品溶液。分別取熊果苷和七葉皂苷對照品,加甲醇制成每1 mL各含5 mg的溶液,作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液20 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以丁醇-乙酸乙酯-水(10∶2.5∶5)的上層溶液為展開劑,噴以茴香醛溶液,在105～110℃加熱10 min,置日光下檢視。對照品溶液色譜圖上1/3處棕色斑點為熊果苷,色譜圖下1/3處灰色斑點為七葉皂苷。供試品色譜圖中,在熊果苷和七葉皂苷相應位置之間有紫灰色區域,上面是人參皂苷Rg1,中間是人參皂苷Re。與七葉皂苷Rf值相同的紫灰色斑點為人參皂苷Rb1,人參皂苷Rb1和人參皂苷Re之間還有較淺斑點,最靠近原點的斑點為人參皂苷Rc。在色譜圖的下1/3處還可以看到其他斑點。根據USP-43對薄層鑒別結果的上述判定要求畫出色譜示意圖,見圖5b。EP-10.0 Ginseng薄層鑒別項下規定,取人參粉末1 g,加70%甲醇10 mL,回流提取15 min,冷卻后加甲醇至10 mL,作為供試品溶液。分別取熊果苷和七葉皂苷對照品5 mg,各加1 mL甲醇,作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液20 μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-水-丁醇(2.5∶5∶10)的上層溶液為展開劑,噴以茴香醛溶液,在105～110℃加熱5～10 min,置日光下檢視。給出標準色譜示意圖,要求鑒別人參中人參皂苷Rg1、Rg2、Rf、Re、Rd、Rc、Rb1、Rb2等9個成分,見圖5c。結果分析:ChP-2020中以人參對照藥材和4個對照品鑒別人參藥材;根據USP-43中薄層鑒別項下描述畫出上圖,以較易獲得的對照品熊果苷和七葉皂苷為替代對照品,根據斑點的相對比移值指認人參藥材中特有的4個成分來鑒別人參;EP-10.0中使用與USP-43相同的替代對照品,直接給出薄層鑒別示意圖,指認9個成分來鑒別人參藥材。通過比較3個國家藥典薄層鑒別方法得出,USP-43和EP-10.0的薄層鑒別控制指標成分更多。

a

b

c注: a為ChP-2020人參TLC色譜圖[9](S:由上至下為人參皂苷Rf、Rg1、Re、Rb1;1:人參對照藥材;2:吉林人參;3:廣東人參), b為根據USP-43人參項下TLC可接受標準畫出的色譜示意圖, c為EP-10.0提供的標準色譜示意圖[10]。圖5 不同藥典中人參薄層色譜示意圖

2.6 不同藥典TLC法對銀杏葉的分析ChP-2020銀杏葉薄層鑒別項下規定,取銀杏葉粉末1 g,加50%丙酮溶液40 mL,加熱回流3 h,濾過,濾液蒸干,殘渣加水20 mL使溶解,用乙酸乙酯振搖提取2次,每次20 mL,合并乙酸乙酯溶液,蒸干,殘渣加15%乙醇5 mL使溶解,加入已處理好的聚酰胺柱(30～60目,1 g,內徑為1 cm,用水濕法裝柱)上,用5%乙醇40 mL洗脫,收集洗脫液,置水浴上蒸去乙醇,水液用乙酸乙酯振搖提取2次,每次20 mL,合并乙酸乙酯溶液,蒸干,殘渣加丙酮1 mL使溶解,作為供試品溶液。取銀杏內酯A對照品、銀杏內酯B對照品、銀杏內酯C對照品及白果內酯對照品,加丙酮制成每1 ml各含銀杏內酯A 0.5 mg、銀杏內酯B 0.5 mg、銀杏內酯C 0.5 mg、白果內酯1 mg的混合溶液,作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5 μL,分別點于同一用4%醋酸鈉溶液制備的硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇(10∶5∶5∶0.6)為展開劑,在15℃以下展開,取出,晾干,在醋酐蒸氣中熏15 min,140～160℃中加熱30 min,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點,見圖6a。USP-43 Ginkgo薄層鑒別項下規定,取銀杏葉粉末1 g,加甲醇10 mL,水浴加熱10 min,冷卻后過濾,作為供試品溶液。取蘆丁、綠原酸、槲皮素對照品,加甲醇制成每1 mL含蘆丁0.6 mg、綠原酸0.2 mg、槲皮素0.2 mg的混合溶液,作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5 μL,分別點于同一高效硅膠薄層板上,以乙酸乙酯-水-甲酸-冰醋酸(100∶26∶11∶11)為展開劑,展開,取出,105℃加熱5分 min,立即噴以5 mg/mL 2-氨基乙基二苯硼酸鹽甲醇溶液,然后噴以50 mg/mL的聚乙二醇400乙醇溶液,置紫外燈(365 nm)下檢視。對照品色譜圖中,下半部分Rf值為0.28處的黃褐色熒光斑點為蘆丁,Rf值為0.36處淺藍色熒光斑點為綠原酸,Rf值為0.92處的黃色熒光斑點為槲皮素。供試品色譜圖中,黃褐色熒光斑點、淺藍色熒光斑點和黃色熒光斑點分別對應蘆丁、綠原酸和槲皮素;供試品色譜圖中蘆丁下方還應有1個黃至黃綠色的斑點;蘆丁和綠原酸之間應有2個黃至黃綠色斑點;綠原酸上方有應兩個黃至黃綠色斑點,還應看到其他的斑點。根據USP-43對薄層鑒別結果的判定,本文畫出色譜示意圖,見圖6b。EP-10.0 Ginkgo leaf薄層鑒別項下規定,取銀杏葉粉末2 g,加甲醇10 mL,65℃振搖水浴10 min,冷卻后過濾,作為供試品溶液。取蘆丁3 mg、綠原酸1 mg溶解在20 mL甲醇溶液中,作為混合對照品溶液。吸取上述兩種溶液各20 μL,分別點于同一硅膠薄層板上,以甲酸-冰醋酸-水-乙酸乙酯(7.5∶7.5∶17.5∶67.5)為展開劑,100～105℃干燥,立即噴以10 g/L二苯基硼酸氨基乙酯甲醇,然后噴以50 g/L聚乙二醇400甲醇溶液,干燥30 min,置紫外燈(365 nm)下檢視。根據標準色譜示意圖,要求鑒別銀杏葉中10個成分,見圖6c。結果分析:ChP-2020中,以4個特征性成分為對照品鑒別銀杏葉藥材;根據USP-43 TLC項下描述畫出上圖,采用蘆丁、綠原酸、槲皮素3個易獲得的對照品鑒別銀杏葉藥材,其中3個為已知的蘆丁、綠原酸和槲皮素,其余5個為未知成分,但對其相對比移值及顏色進行了規定;EP-10.0中,用兩個易得的對照品蘆丁和綠原酸鑒別銀杏葉中10個成分,并對未知成分斑點的位置及顏色做出規定。通過對3個國家藥典薄層鑒別方法比較發現,USP-43中采用了易獲得的替代對照品,且用Rf值和顏色同時指認斑點,并規定了其他斑點的相對比移值;EP-10.0也使用了替代對照品,并直接給出標準色譜示意圖,更為直觀。

注: a為ChP-2020銀杏葉TLC色譜圖[9](S:由上至下為白果內酯、銀杏內酯A、B、C; 1: 銀杏葉對照藥材; 2: 江蘇邳州銀杏葉), b為USP-43銀杏葉項下TLC可接受標準畫出的色譜示意圖, c為EP-10.0提供的標準色譜示意圖[10]。圖6 不同藥典中銀杏葉薄層色譜示意圖

3 討論

ChP-2020年版藥材的薄層鑒別中,常采用對照藥材和/或對照品來鑒別藥材。以對照藥材進行薄層鑒別,是我國藥材薄層鑒別的特色,可以較科學的鑒別藥材中所含成分,但對照藥材種類少、道地藥材認定困難、不易獲得。通常是以對照品來鑒別藥材中相應的一個成分,未見以一個對照品對藥材供試品色譜圖中多個斑點進行薄層鑒別。在USP-43和EP-10.0藥材薄層鑒別中多采用對照品和/或替代對照品,利用Rf值和相對比移值建立特征圖譜,以實現對藥材中多個成分(斑點)的鑒別。在同一色譜條件下,斑點位置相對固定,可對藥材質量進行控制,且大多數的斑點只有相對比移值,并非為已知成分,可避免已知成分在粉末型藥材中的人為添加。USP-43還采用文字描述薄層色譜結果,根據文字描述可繪出適宜的色譜圖;而EP-10.0中的部分藥材質量標準中直接給出標準薄層色譜示意圖,來表述薄層鑒別要求,使要求更為直觀。

目前國內文獻報道[11-15]的薄層鑒別方法,大多采用一個或幾個對照品對藥材或制劑中相應的成分進行鑒別,造成了薄層色譜信息的浪費。USP-43和EP-10.0藥材薄層鑒別結果分析中,充分利用薄層色譜圖的可視斑點信息,建立藥材的特征圖譜。對未知成分斑點相對比移值的規定和要求,可有效避免非法添加及防止摻假行為,從整體上對藥材進行質量控制。

綜上,中、美、歐國家藥典在薄層色譜鑒別中對照品的選擇和結果分析方法的不同,導致薄層色譜鑒別在成本、效率上的較大差異。因此,建議我國藥物分析工作者借鑒“一測多評”的概念,充分利用薄層色譜的可視化信息,建立更科學、高效、低成本的藥材薄層鑒別特征圖譜。