不同產地蒙古黃芪莖葉UPLC指紋圖譜建立及化學模式識別研究

王強雄，郭 盛，李會偉，謝逸俊，尚爾鑫，段金廒

不同產地蒙古黃芪莖葉UPLC指紋圖譜建立及化學模式識別研究

王強雄，郭 盛*，李會偉，謝逸俊，尚爾鑫，段金廒*

南京中醫藥大學 中藥資源產業化與方劑創新藥物國家地方聯合工程研究中心/江蘇省中藥資源產業化過程協同創新中心/國家中醫藥管理局中藥資源循環利用重點研究室，江蘇 南京 210023

建立蒙古黃芪莖葉UPLC指紋圖譜及含量測定方法，并對不同產地多個批次蒙古黃芪莖葉樣品進行比較分析，為蒙古黃芪莖葉資源的利用與質量控制提供參考。采用ACQUITYTMUPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），以0.1%甲酸水-乙腈為流動相，梯度洗脫，檢測波長為350 nm，建立蒙古黃芪莖葉指紋圖譜；采用電噴霧離子源-四極桿-飛行時間質譜（ESI-Q-TOF/MS）對共有峰進行鑒定；同時建立其含量測定方法。結合聚類分析和主成分分析法，對不同批次蒙古黃芪莖葉進行質量評價。建立了蒙古黃芪莖葉UPLC指紋圖譜，共標定了25個共有峰，并鑒定了其中13個色譜峰，均為黃酮類成分；建立了異槲皮苷、紫云英苷、異鼠李素-3--葡萄糖苷的含量測定方法；17批黃芪莖葉的相似度在0.933～0.987；通過聚類分析將樣品分為2大類；主成分分析與聚類分析結果一致。通過UPLC指紋圖譜結合化學模式識別方法，建立了一種快速、有效的蒙古黃芪莖葉品質評價方法，可為蒙古黃芪莖葉的資源化利用提供客觀依據。

黃芪；蒙古黃芪莖葉；品質評價；異槲皮苷；紫云英苷；異鼠李素-3--葡萄糖苷；資源化利用

黃芪為我國常用大宗藥材，截至2019年，全國黃芪種植面積已超6.5萬km2，年產量約7萬t[11]。據不完全統計，作為黃芪藥材的主要基原植物，蒙古黃芪(Fisch.) Bunge var.(Bge.) Hsiao，每年在藥材的種植和采收過程中會產生近20萬t的莖葉資源，長久以來未得到有效利用，造成資源浪費和環境污染[22]。事實上早在漢末的《名醫別錄》中就記載了黃芪莖葉具有“療渴及筋攣，癰腫疽瘡”的功效[33]；清代《本草正義》中也記載：“黃耆莖葉療渴，亦升清滋液之功。治筋攣者，亦稟溫和之性，而且有宣通絡詠之力也。其治癰腫疽瘡，則莖葉有外行性，乃能疏通氣血，而消腫化壅，與根之偏于補益者，固自有別耳”[44]。現代研究表明，蒙古黃芪莖葉中含有黃酮類、皂苷類、多糖類等多種活性成分[55-66]，具有調節免疫、抗氧化、改善胃腸道功能等生物學作用[77-88]。近年來, 人們逐漸發現蒙古黃芪莖葉資源的潛在價值，并已將其開發為茶飲[99]、功能性食品[1010]、畜禽飼料、中獸藥[1111]等產品，應用于食品、保健品、畜禽養殖等多個領域。其中，蒙古黃芪莖葉作為飼料原料用于畜禽養殖，呈現出促進畜禽生長繁殖、提高免疫性能、調節腸道健康等多種功能，并可改善畜禽產品品質[1212]，是目前蒙古黃芪莖葉資源的主要利用形式。

隨著蒙古黃芪莖葉資源價值的逐漸發現和開發利用，有效保證其資源品質、控制其產品質量將成為蒙古黃芪莖葉資源可持續利用的重要環節，因此亟需建立其質量控制和品質評價方法。據此，本研究采用超高效液相色譜（UPLC）法建立蒙古黃芪莖葉的指紋圖譜及含量測定方法，并采用超高效液相色譜串聯四極桿飛行時間質譜法（UPLC-Q- TOF/MS）對共有峰進行定性鑒別。結合聚類分析、主成分分析等化學模式識別技術，探討不同產地蒙古黃芪莖葉的品質差異。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters ACQUITY UPLC系統（美國Waters公司），SynaptTMQ-TOF質譜儀（美國Waters公司），MassLynxTM4.1質譜工作站軟件（美國Waters公司），Milli-Q超純水制備儀（美國Milli-pore公司），BSA224S-CN萬分之一天平（德國賽多利斯公司），DHG-9023A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司），MicroCL17R型高速冷凍離心機（賽默飛世爾科技有限公司），KH-500型超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司）。

1.2 材料

對照品異鼠李素-3--葡萄糖苷（批號CFS202102）購自武漢天植生物技術有限公司；異槲皮苷（批號PRF8030703）、紫云英苷（批號PRF9072622）購自成都普瑞法科技開發有限公司；山柰素（批號Y05J9H63012）購自上海源葉生物科技有限公司，質量分數均大于98%。乙腈和甲酸均為色譜純，均購自德國Merck公司，超純水為實驗室自制，其他化學試劑均為分析純（南化試劑公司）。17批黃芪莖葉樣品信息見表1，經南京中醫藥大學段金廒教授鑒定為豆科植物蒙古黃芪(Fisch.) Bunge var.(Bge.) Hsiao的莖和葉。17批樣品均置于熱風烘箱55 ℃烘干，粉碎后過40目篩，于陰涼干燥處保存備用。

表1 不同批次蒙古黃芪莖葉樣品信息

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒定質量的異鼠李素-3--葡萄糖苷、異槲皮苷、紫云英苷、山柰素對照品適量，用甲醇分別配成質量濃度為0.192、0.106、0.149、0.218 mg/mL的對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取上述不同批次蒙古黃芪莖葉樣品粉末2.0 g，置于100 mL具塞錐形瓶中，精密加入40 mL 75%乙醇，靜置30 min后室溫超聲（40 kHz）提取1 h，放至室溫后補足減失質量，13 000 r/min離心10 min，取上清液，經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.3 色譜條件

色譜柱：ACQUITYTMUPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），流動相為0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脫：0～1 min，95%～90% A；1～31 min，90%～75% A；31～36 min，75%～55% A；36～37 min，55%～20% A；37～38 min，20%～5% A；38～39 min，5%～95% A；體積流量0.4 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量2 μL，檢測波長為350 nm。

2.4 質譜條件

ESI源；掃描方式：ESI+、ESI-模式；萃取電壓4.0 V；錐孔電壓30 V；毛細管電壓3.0 kV；脫溶劑氣溫度400 ℃；離子源溫度120 ℃；脫溶劑氣流量800 L/h；錐孔氣流量50 L/h；碰撞能量6～40 eV，離子能量1 V；質量掃描范圍100～1000。

2.5 UPLC指紋圖譜方法學考察

2.5.1 精密度試驗 取S1號樣品，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液，連續進樣6次，按“2.3”項色譜條件進行分析，計算各色譜峰的保留時間和峰面積。結果表明，各共有峰保留時間的RSD值均小于0.21%，峰面積的RSD值均小于2.73%，說明儀器精密度良好。

2.5.2 重復性試驗 取S1號樣品6份，按照“2.2”項下方法分別制備供試品溶液，按“2.3”項色譜條件進行分析，計算各色譜峰保留時間和峰面積。結果表明，各共有峰保留時間的RSD值均小于0.16%，峰面積的RSD值均小于2.82%，說明該方法重復性良好。

2.5.3 穩定性試驗 取S1號樣品，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h進樣，按“2.3”項色譜條件進行分析，計算各色譜峰的保留時間和峰面積。結果表明，各共有峰保留時間的RSD值均小于0.28%，峰面積的RSD值均小于2.87%，說明樣品在24 h內具有較好的穩定性。

2.6 蒙古黃芪莖葉UPLC指紋圖譜的建立及相似度評價

2.6.1 指紋圖譜的建立及參照峰的確定 取17批蒙古黃芪莖葉樣品，按“2.2”項制備供試品溶液，按“2.3”項色譜條件進行分析，記錄色譜圖，并導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（國家藥典委員會，2012.130723版），去除溶劑峰（0～3 min）及尾部雜峰（37～40 min），以S1分析得到的圖譜為參照圖譜，設置時間窗寬度為0.1，采用中位數法生成疊加指紋圖譜（圖1-A），采用多點校正，經全譜峰匹配后生成對照圖譜，結果見圖1-B。在所有樣品圖譜中19號峰分離度良好，位置較為居中，峰面積較大且穩定，因此選擇19號峰為參照峰。

2.6.2 共有峰的指認 根據所有蒙古黃芪莖葉樣品的UPLC圖譜分析，指認了25個共有峰（圖1-B），共有峰的峰面積之和大于90%。共有峰的相對保留時間RSD值在0～0.903%，相差較小；相對峰面積的RSD值相差較大，在0～80.578%，表明不同批次蒙古黃芪莖葉中的化學成分含量差異較大。

3-異槲皮苷 6-紫云英苷 7-異鼠李素-3-O-葡萄糖苷 25-山柰素

2.6.3 共有峰的鑒定 通過UPLC-Q-TOF/MS分析，共鑒定出13個共有峰（表2），分別為異槲皮苷（峰3）、槲皮素-3--(6''--丙二酰基)-β--葡萄糖苷（峰5）、紫云英苷（峰6）、異鼠李素---葡萄糖苷（7）、山柰酚-3--(6''--丙二酰基)-葡萄糖苷（峰8）、異鼠李素-3--(6''--丙二酰基)-葡萄糖苷（峰9）、沙苑子苷（峰10）、6''-丙二酸沙苑子苷單酯（峰13）、isorhamnetin-3--robinobioside-7--glucoside（峰14）、rhamnocitrin-3--β- neohesperidoside（峰17）、kaempferol-4￠-methylether- 3-β--glucoside（峰19）、kaempferol-4￠- methylether-3-β--malonylglucoside （峰21）、山柰素（峰25）。其中峰3、6、7、25經對照品品指認（圖1-C），其余共有峰通過質譜信息結合參考文獻推測得出。通過紫外吸收特征可推測25個共有峰均為黃酮類化合物（最大吸收波長在250 nm和350 nm附近）。從質譜信息中進一步發現多數化合物有162、146、308等糖基碎片離子掉落，因此可推測多為黃酮苷類化合物[1313]。此外，中性丟失、C環的重排和開裂得到的特征性碎片離子可以進一步幫助推測環上的取代基以及苷元母核結構[1414]。以峰10為例，其在負離子模式下有623.158 8的準分子離子峰，可初步推測該化合物相對分子質量為624，分子式為C28H32O16，碎片離子461.110 3是由其失去1個六碳糖基所得，再失去1個六碳糖基得到碎片299.055 0，依據文獻報道推測其為沙苑子苷。

表2 蒙古黃芪莖葉樣品UPLC指紋圖譜共有峰的鑒定

*表示通過對照品確認

*means that confirmed by reference substance

已有研究顯示黃芪植物中分布著大量的丙二酰基型黃酮苷類化合物[1515]。以峰8為例，其紫外吸收特征與紫云英苷（峰6）基本一致，在負離子模式下有533.108 8的準分子離子峰，可初步推測該化合物相對分子質量為534，分子式為C24H22O14，碎片離子489.101 1為其脫羧產生[M－H－CO2]?，碎片離子285.044 3則是準分子離子失去1分子六碳糖基以及碎片86（推測其為丙二酰基）所得，因此推測該化合物為山柰酚-3--(6''--丙二酰基)-葡萄糖苷。

此外，還有5個共有峰代表的化合物由于質譜信息不足，暫時無法確定糖苷鍵的取代位置及糖的種類。分別為quercetin--hexoside-pentoside（峰1）、quercetin--hexoside-pentoside（峰2）、 isorhamnetin--hexoside（峰16）、isorhamnetin--malonyl-hexoside（峰18）、rhamnocitrin-- malonyl-neohesperidoside（峰20）。具體結果及質譜信息見表2及圖2。

圖2 蒙古黃芪莖葉正離子(A) 和負離子(B) 模式下總離子流圖

2.6.4 相似度計算 以對照圖譜為參照（設置為1），計算各批次樣品相似度，結果見表3。17批蒙古黃芪莖葉樣品的相似度在0.933～0.987，提示這17批蒙古黃芪莖葉樣品的化學成分組成基本相似。

2.7 3個主要成分含量測定

在前期實驗中用對照品共比對出蒙古黃芪莖葉指紋圖譜共有峰中的4個峰，分別為異槲皮苷（峰3）、紫云英苷（峰6）、異鼠李素-3--葡萄糖苷（峰7）和山柰素（峰25），其中前3個成分含量相對較高，因此選擇這3個成分建立其含量測定方法并測定17批樣品中含量。

表3 17批蒙古黃芪莖葉樣品相似度分析結果

2.7.1 對照品溶液制備 精密稱取干燥至恒定質量的異槲皮苷、紫云英苷、異鼠李素-3--葡萄糖苷標準品適量，用甲醇配成質量濃度分別為0.212、0.298、0.192 mg/mL的混合對照品溶液貯備液。

2.7.2 供試品溶液制備及色譜條件 供試品溶液制備方法同“2.2”項，色譜條件同“2.3”項。

2.7.3 線性關系考察 取適量混合對照品溶液貯備液，用甲醇稀釋成系列濃度的混合對照品溶液，按“2.3”項色譜條件測定，以質量濃度為橫坐標（），峰面積為縱坐標（），計算線性回歸方程和相關系數（）。結果見表4，所有標準曲線在線性范圍內均呈良好的線性關系（均≥0.999 5）。

表4 蒙古黃芪莖葉3個成分線性方程及相關系數

2.7.4 精密度試驗 取混合對照品溶液，按“2.3”項色譜條件連續進樣6次，記錄各成分的峰面積，并計算RSD值。RSD值均小于0.74%，表明儀器精密性良好。

2.7.5 重復性試驗 取S1號樣品6份，按照“2.2”項下方法分別制備供試品溶液，按“2.3”項色譜條件連續進樣分析，記錄各色譜峰峰面積，并計算RSD值。RSD值均小于2.62%，表明該方法重復性良好。

2.7.6 穩定性試驗 取S1號樣品，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h進樣，按“2.3”項色譜條件進行分析，記錄各色譜峰的峰面積，并計算RSD值。RSD值均小于2.42%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.7.7 加樣回收率試驗 分別稱取S1號樣品6份，每份1.0 g，按照對照品量-樣品中含量約1∶1的比例分別加入3個對照品粉末，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3”項色譜條件進行分析，記錄各色譜峰的峰面積，并計算回收率和RSD值。異鼠李素-3--葡萄糖苷、異槲皮苷、紫云英苷的加樣回收率分別為100.97%、102.34%、102.59%，RSD值均小于1.99%，表明本方法準確度良好。

2.7.8 樣品含量測定 取17批蒙古黃芪莖葉樣品，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3”項色譜條件進行測定，記錄峰面積，并根據線性回歸方程計算各樣品中3個成分的含量，結果見表5，17批樣品中異鼠李素-3--葡萄糖苷、異槲皮苷、紫云英苷的質量分數分別為0.121 5～1.068 6、0.203 2～1.603 7、0.068 3～0.260 0 mg/g。不同產地蒙古黃芪莖葉中3個黃酮類成分含量無顯著差異，但不同生長時期的樣品間存在較大差異，如甘肅岷縣產的2年生蒙古黃芪莖葉，9月底采收的樣品（S3）中異鼠李素-3--葡萄糖苷、異槲皮苷、紫云英苷含量分別為10月底采收樣品（S4）的2.1、2.8、1.5倍；10月上旬在甘肅宕昌縣采收的2年生蒙古黃芪莖葉（S7）中異鼠李素-3--葡萄糖苷、異槲皮苷、紫云英苷含量分別為3年生蒙古黃芪莖葉（S8）的2.0、1.8、1.3倍。

表5 17批蒙古黃芪莖葉樣品中3個成分的含量測定結果

2.8 化學模式識別分析

2.8.1 聚類分析 將17批蒙古黃芪莖葉的25個共有峰的峰面積數據導入SPSS 21.0統計軟件，采用組間聯接的聚類方法，以平方歐氏距離為樣品間距離進行聚類分析，結果見圖3。從圖中可知，當距離為25時，17批蒙古黃芪莖葉樣品可以分成2大類，產地為甘肅的S1、S2、S3、S5、S6、S7號樣品歸為I類，剩余的3個甘肅產樣品（S4、S8、S9）與其他2個產地的樣品歸為II類。當距離為15時，I類樣品又可以分為a、b 2小類，其中S1號樣品為一類，S2、S3、S5、S6、S7號樣品分為一類。S1號樣品采收時間為7月，其余樣品則集中在9月下旬至10月，由此推測采收時間跨度大導致了S1號樣品與其他樣品出現差異。當距離為5時，產地為內蒙古的S10、S11、S12、S13號樣品可以分為一小類，甘肅產的S4、S8、S9號樣品與產地為寧夏的4個樣品為另一小類。造成部分甘肅產的蒙古黃芪莖葉樣品無法與寧夏產蒙古黃芪莖葉樣品區分開的原因可能是寧夏與甘肅在地理位置上相鄰，緯度相近，氣候條件相似，因此蒙古黃芪莖葉的品質相對接近。以上結果表明聚類分析可在一定程度上區分不同產地蒙古黃芪莖葉，推測產地是引起蒙古黃芪莖葉出現質量差異的重要因素之一，除產地因素外，采收時間等因素也會在一定程度上影響蒙古黃芪莖葉的質量差異。

2.8.2 主成分分析 將17批蒙古黃芪莖葉樣品共有峰的峰面積結果導入SIMCA 14.1軟件，進行主成分分析。以特征值大于1為提取標準[2121]，得到3個主成分（PC1、PC2、PC3），PC1的方差貢獻率最高，為74%，PC2和PC3的貢獻率分別為9.5%和7.3%，三者累積方差貢獻率達90.8%，可以解釋絕大部分變量信息。以PC1和PC2為坐標軸建立坐標系進行投影，得到17批蒙古黃芪莖葉樣品的PCA得分散點圖（圖4），從圖中可以較為明顯地區分3個產地的蒙古黃芪莖葉樣品，這與聚類分析結果一致。此外，從圖中發現產地為甘肅的9個批次樣品較為分散，推測基于這9個批次樣品的采收時間（7、9、10月）和種植年限（1、2、3、3～10年）相差較大，由此提示蒙古黃芪莖葉的品質可能與采收時間及種植年限相關。根據各個批次蒙古黃芪莖葉樣品的主成分得分，結合3個主成分的方差貢獻率，可計算出各批次蒙古黃芪莖葉的綜合得分（乙醇），公式為綜=0.741＋0.0952＋0.0733，結果見表6。綜合得分越高，表明峰面積相對越大，對應的成分含量相對越高[2222]。由結果可知，甘肅產蒙古黃芪莖葉排名靠前，寧夏產蒙古黃芪莖葉次之，而內蒙古產蒙古黃芪莖葉排名較后。出現此差異的原因可能是內蒙古平均緯度較高，入冬較早，蒙古黃芪地上部分提前枯萎，從而導致活性成分含量下降。在甘肅所有樣品中S4、S8、S9號樣品排名最后，其中S4號樣品采收時間為10月底，S8號樣品種植年限為3年，S9號樣品種植年限為3～10年。在寧夏的4個樣品中，S16號樣品排在最后，其采收時間也為10月底，再次提示蒙古黃芪莖葉的質量可能與采收時間以及種植年限相關。

圖3 17批蒙古黃芪莖葉樣品聚類分析樹狀圖

圖4 17批蒙古黃芪莖葉樣品PCA得分圖

表6 17批蒙古黃芪莖葉樣品主成分得分和綜合得分

3 討論

在黃芪藥材的種植及采收過程中，大量的莖葉資源常被遺棄或者就地焚燒，造成資源浪費。近年來，蒙古黃芪莖葉的資源價值逐步被發現，并被開發為茶飲、功能性食品、畜禽飼料及中獸藥等產品，但由于缺少質量控制方法，導致其原料質量參差不齊。為建立蒙古黃芪莖葉質量控制方法，本研究通過考察提取溶劑、提取方式、料液比、流動相體系、檢測波長等條件，首次建立了蒙古黃芪莖葉UPLC指紋圖譜及含量測定方法，并對指紋圖譜共有峰進行了定性鑒別。同時結合聚類分析、主成分分析等化學模式識別技術，進一步分析了不同產地、不同批次蒙古黃芪莖葉樣品間的化學組分差異。

本課題組前期研究[6]及文獻報道[2323]顯示，蒙古黃芪莖葉中次生代謝產物以黃酮類成分居多，且含量高于皂苷類、酚酸類等化學成分。據此，本研究選擇黃酮類成分作為蒙古黃芪莖葉質量評價的依據。本研究從蒙古黃芪莖葉中共鑒定出13個黃酮類成分的化學結構，其中包括5個丙二酰基黃酮類化合物。有研究表明，多種豆科植物可以通過連接丙二酰基來儲存不易溶解的黃酮苷或苷元類成分，當植物細胞受到侵害時易水解其儲存形式釋放苷或苷元[2424]，且在提取過程中，丙二酰基黃酮苷及其水解后的黃酮苷總量不會發生明顯變化[2525]。上述研究結果提示可以其總量來評價蒙古黃芪莖葉的質量。同時，采用聚類分析和主成分分析對17批蒙古黃芪莖葉樣品的指紋圖譜數據進行處理，從一定程度上區分了內蒙古、甘肅以及寧夏3個產地的蒙古黃芪莖葉，并推測產地、采收時間等因素均會對蒙古黃芪莖葉的聚類結果產生影響，但限于樣本數量及代表性有限，相關結果仍需進一步驗證。此外，發現甘肅產蒙古黃芪莖葉質量較優，內蒙古產蒙古黃芪莖葉質量稍差，推測這可能與地理位置以及氣候等環境因素相關。目前，人工栽培的蒙古黃芪種植年限多為2年，采收時間為9月下旬至10月上旬，本研究發現采收時間晚于藥材采收期、種植年限超過2年均會對蒙古黃芪莖葉的質量產生較大影響，具體表現為黃酮類成分含量顯著下降。提示在利用蒙古黃芪莖葉資源時，應在采收1年生、2年生黃芪根部后及時收集其莖葉，避免資源的低效利用。

綜上，本實驗建立了一種快速、穩定的蒙古黃芪莖葉品質評價及含量測定方法，為蒙古黃芪莖葉資源的精細化利用和開發提供了客觀依據，并為控制和評價蒙古黃芪莖葉品質提供了參考。同時，后續研究還可基于蒙古黃芪莖葉指紋圖譜信息與其生物學活性進行關聯分析，通過譜-效關系分析建立反映其內在質量的品質評價方法[2626]。此外，本研究主要以黃酮類成分為依據對蒙古黃芪莖葉進行質量評價，后續可結合蒙古黃芪莖葉中的皂苷類、多糖類等其他活性成分，對其質量進行綜合評價。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Study on establishment of UPLC fingerprints and chemical pattern recognition of the stems and leaves ofvar.(Bge.) Hsiao from different regions

WANG Qiang-xiong, GUO Sheng, LI Hui-wei, XIE Yi-jun, SHANG Er-xin, DUAN Jin-ao

National and Local Collaborative Engineering Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization and Formulae Innovative Medicine, Jiangsu Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization, State Administration of Traditional Chinese Medicine Key Laboratory of Chinese Medicinal Resources Recycling Utilization, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, 210023, China

To establish the UPLC fingerprint and content determination method of the stems and leaves ofvar.（Bge.）Hsiao(SLAM), and to compare and analyze multiple batches of SLAM from different origins, so as to provide reference for the utilization and quality control of SLAM resources.ACQUITYTMUPLC BEH C18column (100 mm×2.1 mm, 1.7 μm) was used. Mobile phase was 0.1% formic acid water and acetonitrile, gradient elution, detection wavelength was 350 nm; The common peaks were identified by electrospray ion source-quadrupole-time-of-flight mass spectrometry (ESI-Q-TOF/MS); At the same time, the content determination method was established. Cluster analysis and principal component analysis were used to evaluate the quality of SLAM of different batches.The UPLC fingerprint of SLAM was established, 25 common peaks were calibrated, and 13 chromatographic peaks were identified, all of which were flavonoids; The content determination method of isoquercitrin, astragalin and isorhamnetin-3--glucopyranoside was established; The similarities of 17 batches of SLAM were in the range of 0.933—0.987. The samples were divided into two categories by cluster analysis. The results of principal component analysis and cluster analysis are consistent.A rapid and effective method for quality evaluation of SLAM was established by UPLC fingerprint and chemical pattern recognition method, which can provide objective basis for the resource utilization of SLAM.

Radix Astragali; stems and leaves ofvar.; quality evaluation; resource utilization; isoquercitrin; astragalin; isorhamnetin-3--glucopyranoside

R286.2

A

0253 - 2670(2023)13 - 4312 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.13.024

2022-12-09

國家中醫藥管理局中醫藥創新團隊及人才支持計劃項目（ZYYCXTD-D-202005）；中央本級重大增減支項目（2060302）；寧夏重點研發計劃（2017BY079）

王強雄（1997—），男，碩士研究生，從事中藥資源化學與資源循環利用研究。E-mail: wqx0906@163.com

通信作者：郭 盛，副研究員。E-mail: guosheng@njucm.edu.cn

段金廒，教授。E-mail: dja@njucm.edu.cn

[責任編輯 時圣明]