NSCLC患者血清中PTBP1、CDCP1的表達及臨床預后意義*

熊云剛,成克倫,趙 露,姜 森,顧延會

1.貴州航天醫院病理科,貴州遵義 563000;2.遵義醫科大學附屬醫院呼吸一科,貴州遵義 563000

肺癌是人類癌癥死亡的最常見原因,全球范圍內每年新發病例達180萬例,每年死亡病例達160萬例[1]。非小細胞肺癌(NSCLC)是肺癌最常見的類型,占全部肺癌類型的80%以上。NSCLC的治療方式主要包括手術、放化療及靶向治療等,但術后復發、轉移是NSCLC治療失敗的主要原因[2]。因此,尋找新的有效預測NSCLC患者臨床預后的血清腫瘤標志物,對于改善患者臨床預后具有重要臨床意義。多聚嘧啶束結合蛋白1(PTBP1)屬于異質核糖核蛋白亞家族成員,其作為一種RNA結合蛋白,與異質核RNA結合,影響mRNA前體的加工、代謝和轉運的過程。近年來有研究發現,PTBP1能夠與參與前mRNA剪接的內含子多嘧啶束結合,促進結直腸癌[3]、肺癌[4]等腫瘤的惡性進展及轉移。含CUB結構域的蛋白質1(CDCP1)是含有3個細胞外CUB結構域的跨膜蛋白,其作為Src家族激酶的底物,磷酸化激活后上調下游癌基因的表達,促進腫瘤侵襲和轉移[5-6]。本研究通過檢測NSCLC患者血清PTBP1、CDCP1水平,探討二者與NSCLC患者臨床病理特征及預后的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2020年1月于貴州航天醫院就診的NSCLC患者90例為NSCLC組。納入標準:(1)經組織病理學檢查明確為NSCLC;(2)初次診治;(3)一般身體狀況良好,卡氏功能狀態評分>90分;(4)患者及家屬對本研究知情同意并簽字。排除標準:(1)既往有腫瘤放化療、靶向治療史;(2)合并其他部位惡性腫瘤;(3)妊娠、哺乳期女性;(4)臨床隨訪資料不完整。NSCLC組男62例,28例;年齡34～78歲,平均(62.54±6.98)歲;有吸煙史30例;肺腺癌59例,肺鱗癌31例;腫瘤分期:Ⅰ～Ⅱ期57例,Ⅲ～Ⅳ期33例;腫瘤分化程度:中高分化53例,低分化37例;腫瘤最大徑:≤5 cm 58例,>5 cm 32例;合并淋巴結轉移29例。選取同期診治的40例肺部良性疾病患者為良性疾病組,其中男26例,女14例;年齡32～78歲,平均(61.72±7.51)歲;肺錯構瘤18例,肺炎癥病變22例。選取同期體檢的40例體檢健康者為對照組,其中男25例,女15例;年齡34～79歲,平均(61.80±7.39)歲。3組在性別、年齡上比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究經貴州航天醫院倫理委員會審核通過。

1.2方法

1.2.1檢測方法 留取NSCLC患者入院后第2天術前,良性疾病組和對照組清晨空腹靜脈血5 mL,3 000 r/min離心10 min,離心半徑為10 cm,分離上層血清。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測各組血清PTBP1、CDCP1水平。人PTBP1 ELISA試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司。人CDCP1 ELISA試劑盒購自上海科博瑞生物科技公司。實驗步驟根據試劑盒使用說明書進行。根據血清PTBP1、CDCP1水平均值將NSCLC組患者分為PTBP1高表達組和低表達組,CDCP1高表達組和低表達組。

1.2.2隨訪方法 所有NSCLC組患者自確診之日起開始,以門診復查或電話的方式進行隨訪。術后1年內每3個月隨訪1次,術后第2年起每半年隨訪1次,隨訪截止時間2022年2月1日。隨訪內容包括患者生存狀態及腫瘤復發轉移情況。隨訪終點為隨訪結束或患者死亡。

2 結 果

2.1各組血清PTBP1、CDCP1水平比較 NSCLC組血清PTBP1、CDCP1水平明顯高于良性疾病組和對照組,差異均有統計學意義(P<0.05);良性疾病組和對照組血清PTBP1、CDCP1水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組血清PTBP1、CDCP1水平比較

2.2NSCLC組血清PTBP1與CDCP1水平的相關性 Pearson相關分析結果顯示,NSCLC組血清PTBP1與CDCP1水平呈正相關(r=0.721,P<0.001)。

2.3血清PTBP1、CDCP1水平與NSCLC患者臨床病理特征的關系 不同腫瘤分期、淋巴結轉移患者血清PTBP1、CDCP1水平比較,差異有統計學意義(P<0.05);不同年齡、性別、吸煙史、病理類型、病理分化程度、腫瘤最大徑患者血清PTBP1、CDCP1水平比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 血清PTBP1、CDCP1水平與NSCLC患者臨床病理特征的關系

2.4血清PTBP1、CDCP1水平與NSCLC患者生存預后的關系 90例NSCLC患者隨訪6～36個月,平均隨訪時間(29.42±3.61)個月,死亡36例,失訪2例。PTBP1高表達組(44例)和低表達組(46例)NSCLC患者的平均生存時間分別為(27.59±3.32)個月、(31.47±3.68)個月。Kaplan-Meier生存曲線分析結果顯示,PTBP1高表達組患者累積生存率低于PTBP1低表達組患者(χ2=5.910,P=0.015)。CDCP1高表達組(47例)和低表達組(43例)平均生存時間分別為(27.34±3.29)個月、(32.27±3.54)個月。CDCP1高表達組患者累積生存率低于CDCP1低表達組患者(χ2=7.544,P=0.006)。見圖1。

注:A、B分為血清CDCP1、PTBP1水平與NSCLC患者生存預后的生存曲線圖。

2.5影響NSCLC患者生存預后的單因素及多因素Cox回歸分析 以NSCLC患者的生存預后為因變量(死亡=1,存活=0,生存時間=t),納入年齡(≥60歲=1,<60歲=0)、性別(男=1,女=0)、吸煙史(有=1,無=0)、腫瘤最大徑(>5 cm=1,≤5 cm=0)、病理類型(肺鱗癌=1,肺腺癌=0)、淋巴結轉移(有=1,無=0)、腫瘤分期(Ⅲ～Ⅳ期=1,Ⅰ～Ⅱ期=0)、病理分化程度(低分化=1,中高分化=0)、PTBP1(高表達=1,低表達=0)、CDCP1(高表達=1,低表達=0)為自變量,單因素及多因素Cox回歸分析結果顯示,腫瘤分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、PTBP1高表達、CDCP1高表達是影響NSCLC患者生存預后的獨立危險因素。見表3、4。

表3 影響NSCLC患者生存預后的單因素Cox回歸分析

表4 影響NSCLC患者生存預后的多因素Cox回歸分析

3 討 論

2019年中國肺癌的發病率為58.56/100 000,死亡率為53.23/100 000,并且發病率、死亡率均呈明顯上升趨勢[7]。NSCLC是最常見的肺癌類型,早期癥狀不明顯,多數患者就診時已處于晚期,已出現腫瘤血行或淋巴結轉移。NSCLC的治療包括手術及放化療等,但對于晚期患者,即使經積極綜合治療后患者遠期預后仍然較差[8]。NSCLC診斷的金標準是病理活檢,但具有一定的有創性及腫瘤播散的風險。血清腫瘤標志物是理想的診斷方式,具有方便、經濟等優點。目前NSCLC的血清腫瘤標志物包括癌胚抗原、鱗狀上皮癌抗原等,但上述指標在其他疾病中水平也會升高,限制了臨床應用[9]。深入研究NSCLC疾病機制,尋找能夠有效反映NSCLC患者生存預后的血清標志物,具有重要臨床意義。

PTBP1蛋白相對分子質量為58×103,是異質核糖核蛋白亞家族成員,其通過與RNA序列中的嘧啶富集區結合,影響mRNA成熟、定位和翻譯等過程。有研究發現,PTBP1能夠通過調節腫瘤細胞代謝和T/B淋巴細胞的免疫反應,促進腫瘤的侵襲轉移,導致患者不良預后[10]。本研究中,NSCLC患者血清PTBP1水平升高,提示PTBP1可能參與NSCLC的發生過程。有學者證實,NSCLC中CircGLIS4作為分子海綿結合并抑制miR-644a的表達,miR-644a的表達降低導致其直接作用靶點PTBP1 mRNA穩定性增加,進而促進PTBP1的表達[11]。本研究中,NSCLC患者血清PTBP1水平與腫瘤分期及淋巴結轉移有關,表明PTBP1的水平升高促進NSCLC的進展。有學者發現,腫瘤細胞中PTBP1水平升高可通過激活磷酸酶張力蛋白同源物/磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶/蛋白激酶B通路,誘導腫瘤細胞自噬的發生,促進腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲[12]。有研究報道,細胞PTBP1水平升高能夠上調細胞周期素依賴激酶D1及B細胞淋巴瘤2的表達,促進誘導細胞周期G1/S期的轉化,進而促進腫瘤細胞增殖,并抑制腫瘤細胞凋亡[13]。本研究中,血清PTBP1高表達的NSCLC患者生存預后較差,并且是影響患者生存預后的獨立危險因素,提示通過檢測血清PTBP1水平有助于評估NSCLC患者的生存預后。分析其原因,可能是PTBP1的水平升高促進腫瘤化療耐藥性形成。有研究發現,腫瘤微環境處于缺氧狀態,缺氧條件能夠誘導PTBP1的表達,導致DNA損傷修復相關基因的選擇性剪接發生改變,促進腫瘤細胞耐藥性的形成,導致患者不良預后[14]。

CDCP1也稱為CD318,是相對分子質量為135×103的蛋白,結構上有3個CUB樣結構域結構域、1個跨膜結構域和1個短的細胞內結構域,多表達于胃腸道、呼吸道等上皮組織中。近年來有研究發現,CDCP1在前列腺癌[6]、乳腺癌[15]等多種惡性腫瘤中水平升高,CDCP1可以從細胞表面脫落,分泌到細胞外及外周血中從而被檢測到,是一種新的腫瘤標志物。本研究中,NSCLC患者血清CDCP1水平明顯升高,提示CDCP1可能參與NSCLC的腫瘤發生。CDCP1水平升高的機制與NSCLC中RAS通路的激活有關[16]。有研究發現,具有RAS基因突變患者的人肺癌細胞中的CDCP1的水平明顯高于沒有RAS基因突變的患者,體外細胞實驗證實,Ras的過度激活能夠明顯誘導CDCP1的表達及磷酸化激活,促進腫瘤的遷移和侵襲[17]。本研究中,血清CDCP1水平與腫瘤分期及淋巴結轉移有關,提示CDCP1水平促進NSCLC的腫瘤進展。有研究表明,腫瘤中CDCP1的水平升高能夠激活Wnt/β-連環蛋白信號通路,促進β-連環蛋白進入細胞核,誘導N-鈣黏蛋白的水平升高,E-鈣黏蛋白水平降低,增強腫瘤細胞的侵襲和轉移能力[18]。此外,有研究發現,腫瘤中CDCP1的水平升高能夠促進腫瘤細胞干性形成,促使腫瘤細胞的上皮間質轉化的發生,增強腫瘤的侵襲轉移能力,導致腫瘤進展[19]。本研究發現,血清CDCP1高表達的NSCLC患者生存預后較差,是影響患者生存預后的獨立危險因素,表明血清CDCP1是新的NSCLC腫瘤標志物,檢測NSCLC患者血清CDCP1表達有助于評估NSCLC患者的臨床預后。有研究表明,在T790M突變的肺癌細胞系中存在AXL/CDCP1/SRC通路過度激活的現象,導致腫瘤細胞對化療藥物耐藥性的形成,而沉默CDCP1或AXL的表達后,恢復了對化療藥的敏感性[20]。因此,臨床醫生可根據血清CDCP1水平,對NSCLC患者的預后進行評估,對于高危患者予以積極治療和隨訪,以改善患者生存預后。

本研究通過相關性分析發現,NSCLC患者血清PTBP1與CDCP1水平呈正相關,表明二者可能共同參與NSCLC的發生發展過程。分析其原因是腫瘤中PTBP1水平升高能夠穩定CDCP1 mRNA,促進CDCP1蛋白表達,導致腫瘤惡性進展。有研究表明,腫瘤中hsa_circ_0005358作為一種抑癌因子,通過其215-224序列與PTBP1相互作用,阻止PTBP1穩定CDCP1 mRNA,減少CDCP1蛋白翻譯,進而抑制腫瘤的轉移[21]。

綜上所述,NSCLC患者血清PTBP1與CDCP1水平升高,二者與腫瘤分期及淋巴結轉移有關,共同促進NSCLC的發生發展。血清PTBP1與CDCP1高表達是影響NSCLC患者生存預后的獨立危險因素,是潛在的NSCLC預后相關腫瘤標志物。但本研究也存在一定的不足,本研究樣本量有限,隨訪時間較短,未對不同臨床病理特征的NSCLC患者進行分層分析,結果可能存在一定的偏倚,有待今后開展多中心、前瞻性隨機對照研究,深入探索二者的臨床應用價值。