抗磷脂酶A2受體抗體在膜性腎病中的診斷價值和療效評估*

萬智敏,王人柯,黎村艷△

1.湖南師范大學第一附屬醫院/湖南省人民醫院檢驗科,湖南長沙 410005;2．湖南師范大學醫學院醫學檢驗系,湖南長沙 410006

膜性腎病是腎病綜合征常見病理類型之一,膜性腎病中以特發性膜性腎病(IMN)為主,約占75%。繼發于傳染病、實體器官腫瘤、自身免疫性疾病和某些藥物等引起的膜性腎病稱之為繼發性膜性腎病,約占膜性腎病的20%～25%[1]。目前臨床對膜性腎病診斷的金標準為腎組織穿刺活檢,但腎組織穿刺活檢具有血腫、感染及取材不達標等風險,臨床應用多受限,臨床腎功能常用指標存在特異性弱、靈敏度低等缺點,對膜性腎病的診斷價值低。自JR-BECK等[2]檢測出抗磷脂酶A2受體(PLA2R)抗體并證實其與IMN有很強的關聯性以來,抗PLA2R抗體在IMN中的研究越來越多[2-3]。本研究擬通過檢測抗PLA2R抗體在不同類型的膜性腎病中的表達水平,以及與其他腎功能指標相結合來探究抗PLA2R抗體對膜性腎病的診斷價值,有助于臨床對膜性腎病的診斷、監測及預后評估。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究通過湖南省人民醫院倫理委員會審核批準。本研究屬于回顧性研究免除患者知情同意書。選取2020-2021年湖南省人民醫院收治的IMN患者40例作為A組,繼發性膜性腎病患者10例作為B組,其他腎病患者20例作為C組,體檢健康者20例作為D組。納入標準:(1)A組、B組及C組患者符合臨床相關診斷標準及診斷結果[4];(2)A組患者無其他可繼發膜性腎病的疾病,如腫瘤、感染、自身免疫性疾病、藥物暴露等;(3)D組采用體檢健康者腎功能檢測指標;排除標準:(1)臨床診斷不明確者;(2)無診斷結果卻已出院者;(3)合并腎臟疾病以外的嚴重全身系統性疾病者。資料分布:A組男21例、女19例,年齡27～79歲,平均(50.29±6.05)歲;B組男7例、女3例,年齡33～70歲,平均(53.25±9.77)歲,其中細菌感染相關性膜性腎病5例,乙型肝炎相關性膜性腎病3例,狼瘡相關性膜性腎病1例,腫瘤相關膜性腎病1例;C組男12例、女8例,年齡16～74歲,平均(49.93±10.62)歲,其中糖尿病性腎病1例,腎囊腫1例,免疫球蛋白(Ig)A腎病3例,腎結石1例,微小病變型腎病4例,高血壓腎病3例,慢性腎功能不全1例,肥胖相關性腎病1例,痛風性腎病1例,梗阻性腎病1例,紫癜性腎病2例,狼瘡性腎病1例;D組男6例、女14例,年齡25～77歲,平均(42.60±8.12)歲。4組年齡、性別比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2儀器與試劑 全自動熒光免疫分析儀(Sprinter XL+Europattern)購自歐蒙醫學實驗診斷有限公司,LABOSPECT008AS全自動生化分析儀購自日本日立公司,抗PLA2R抗體IgG檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗)購自歐蒙醫學實驗診斷有限公司,清蛋白(ALB)和肌酐(CREA)試劑均購自上海科華生物工程股份有限公司,24 h尿蛋白試劑購自湖南永和陽光生物科技股份有限公司。

1.3方法

1.3.1血清抗PLA2R抗體檢測方法 采用抗PLA2R抗體IgG檢測試劑(酶聯免疫吸附試驗)于歐蒙全自動熒光免疫分析儀上進行試驗。(1)標本溫育:向反應微孔中分別加入100 μL校準品、陰性對照、陽性對照或稀釋后的標本,室溫(18～25 ℃)溫育30 min;(2)清洗:用稀釋后的450 μL清洗緩沖液清洗反應微孔3次;(3)酶結合物溫育:加100 μL酶結合物至每一微孔,室溫(18～25 ℃)溫育30 min;(4)清洗:棄去微孔板內液體,如上述步驟清洗;(5)底物溫育:加100 μL底物液至每一微孔,室溫(25～30 ℃)避光溫育15 min;(6)終止反應:滴加100 μL終止液至每一微孔;(7)比色:450 nm比色。

1.3.2腎功能指標檢測方法 采用日立全自動生化分析儀對血清標本進行檢測,采用酶法檢測CREA水平,采用溴甲酚綠法檢測血清ALB水平,采用比色法測定24 h 尿蛋白定量(24 h UP)水平。

1.4觀察指標 觀察A、B、C、D 4組患者血清抗體陽性率(抗PLA2R抗體水平>20 RU/mL即判定為陽性),并比較4組腎功能相關指標ALB(正常范圍在30～50 g/L)、CREA(正常范圍在59～104 μmol/L)、24 h UP(正常值<100 mg)水平。

2 結 果

2.14組抗PLA2R抗體及腎功能相關指標水平比較 A組抗PLA2R抗體水平高于B、C、D 3組,差異有統計學意義(P<0.05)。A組CREA、ALB、24 h UP水平與B組比較,差異無統計學意義(P>0.05),D組ALB水平高于其他3組,CREA水平低于其他3組,差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 4組抗PLA2R抗體及腎功能相關指標水平比較[M(P25,P75)或

2.2抗PLA2R抗體的診斷效能 A組抗PLA2R抗體陽性患者33例,陽性率為82.5%。B組抗PLA2R抗體陽性患者2例,陽性率為20.0%。A組和B組抗PLA2R抗體陽性率比較,差異有統計學意義(P<0.05);C組和D組抗PLA2R抗體陽性率均為0.0%。抗PLA2R抗體對IMN診斷靈敏度為82.5%,特異度為99.0%,其AUC為0.882。

2.3多因素Logistic回歸分析結果 將抗PLA2R抗體、ALB、24 h UP及CREA納入多因素Logistic回歸分析,結果顯示高水平24 h UP和抗PLA2R抗體是IMN發生的獨立危險因素(P<0.05),見表2。

2.4診斷價值比較 24 h UP和抗PLA2R抗體聯合檢測與抗PLA2R抗體單獨檢測IMN患者比較,聯合檢測的AUC為0.930,大于抗PLA2R抗體單獨檢測的AUC(0.882),見圖1。

圖1 聯合檢測與抗PLA2R抗體單獨檢測IMN患者的ROC曲線圖

表2 多因素Logistic回歸分析結果

2.5IMN患者抗PLA2R抗體與ALB、CREA、24 h UP的相關性研究 結果顯示抗PLA2R抗體與ALB、CREA、24 h UP之間不存在線性相關關系(P>0.05)。

2.6IMN患者免疫抑制劑治療前后抗PLA2R抗體水平變化 從IMN患者中收集到8例使用免疫抑制劑治療2～3個月后病情緩解的患者,治療前抗PLA2R抗體水平為267.68(190.22,450.87)RU/mL,治療后抗PLA2R抗體水平為128.61(35.66,351.09)RU/mL,治療后與治療前比較,水平明顯降低(Z=-2.197,P<0.05)。

3 討 論

目前大多數的研究認為IMN是由于腎小球臟層的上皮細胞(足細胞)中抗原表位的暴露,導致原位免疫復合物的形成,激活補體,最終在局部形成攻膜復合物,從而導致腎小球臟層損傷的疾病[5-6]。隨著對抗PLA2R抗體研究的不斷深入,發現抗PLA2R抗體在IMN診斷中有著較高的特異度和靈敏度,當與腎功能常規指標聯合運用時,則可大大提高膜性腎病的診斷效率[7]。因此抗PLA2R抗體在膜性腎病的檢測中具有廣闊的應用前景。

本研究40例IMN患者中抗PLA2R抗體陽性率為82.5%,繼發性膜性腎病患者中抗PLA2R抗體陽性率為20.0%,其他腎病患者及體檢健康者抗PLA2R抗體陽性率為0.0%,IMN患者抗PLA2R抗體水平高于其他3組,抗PLA2R抗體對IMN的診斷具有較高的靈敏度,可見抗PLA2R抗體作為靶抗原在IMN的發病機制中起重要的作用,與相關研究結論大致相同[8-10];有學者提出抗PLA2R抗體為IMN特有的一項血清學標志物[11],所以對于抗PLA2R抗體和IMN是否存在特異性關系還需要更多的臨床研究去證實。本研究中D組ALB水平高于其他3組,CREA水平低于其他3組,差異有統計學意義(P<0.05)。這與有關報道中膜性腎病患者血清抗PLA2R抗體滴度與患者腎小球濾過率、血清總蛋白和ALB等指標均呈負相關較一致,提示了膜性腎病中抗PLA2R抗體水平越高,腎功能損傷越嚴重[12]。

抗PLA2R抗體檢測IMN的靈敏度為82.5%,特異度為99.0%,AUC為0.882,說明抗PLA2R抗體對IMN的診斷具有較高的診斷效能。24 h UP為腎病病理分期和療效評估的重要指標,其與抗PLA2R抗體一樣均會對IMN產生明顯的影響,且二者聯合檢測的AUC為0.930,大于抗PLA2R抗體單獨檢測的AUC(0.882),說明抗PLA2R抗體和24 h UP的聯合檢測對于診斷IMN具有重要的臨床價值,與有關研究報道類似[13-14]。

本研究中抗PLA2R抗體與ALB、CREA、24 h UP之間不存在線性相關關系,此結論與部分研究存在差異[15],結果不同的原因考慮為不同研究之間抽樣的差別,以及研究對象之間地域的差別。

從IMN患者中收集到8例使用免疫抑制劑治療2～3個月后病情緩解的患者,治療后與治療前比較,抗PLA2R抗體水平明顯降低(Z=-2.197,P<0.05),與相關研究結論較一致[16]。但本研究雖提示抗PLA2R抗體對IMN療效監測可能存在一定的價值,但因研究的對象數量較少,抗PLA2R抗體對IMN療效監測的確切價值還需進一步研究。

綜上所述,抗PLA2R抗體是IMN診斷的一項十分重要的檢測指標,抗PLA2R抗體比CREA、ALB、24 h UP等腎功能指標在對IMN的判斷上更具有診斷價值。在臨床上聯合應用抗PLA2R抗體及24 h UP更有利于IMN的診斷。抗PLA2R抗體與ALB、CREA、24 h UP之間不存在線性相關關系。抗PLA2R抗體對IMN療效監測的價值還需進一步研究。