CK、MUC5ac、Ki67表達(dá)與胃癌癌前病變的關(guān)系及對(duì)胃癌早期診斷的價(jià)值*

徐星榕,白菊萍,邊 蕓,權(quán)小玲,姚家喜

1.張掖市第二人民醫(yī)院病理科,甘肅張掖 734000;2.河西學(xué)院附屬?gòu)堃慈嗣襻t(yī)院病理科,甘肅張掖 734000;3.河西學(xué)院附屬?gòu)堃慈嗣襻t(yī)院泌尿外科,甘肅張掖 734000

胃癌是消化內(nèi)科中較為多見(jiàn)的癌癥,好發(fā)于中老年人群[1]。早期胃癌并無(wú)明顯癥狀,部分患者可表現(xiàn)為胃部疼痛、黑便和體重減輕等癥狀[2]。目前胃癌的發(fā)病機(jī)制并不明確,可能與遺傳、飲食、感染等有關(guān)。胃黏膜萎縮和腸化生是一種病理表現(xiàn),均屬于癌前狀態(tài),已有研究證實(shí)其是引起胃癌的危險(xiǎn)因素[3]。細(xì)胞角蛋白(CK)主要分布于上皮細(xì)胞,是一種復(fù)雜的中間絲[4]。CK7和CK20均可體現(xiàn)細(xì)胞的分化階段,在胃癌的發(fā)病及分化中起到關(guān)鍵的作用。黏蛋白(MUC)5ac是一種分泌型糖蛋白,可對(duì)胃黏膜起到保護(hù)的效果,在細(xì)胞生長(zhǎng)、信號(hào)傳導(dǎo)和黏附中發(fā)揮作用[5]。核抗原Ki67是細(xì)胞增殖核抗原的一種,可反映出腫瘤細(xì)胞的增殖活性[6]。上述幾種指標(biāo)在胃癌的檢測(cè)中均有一定意義,但目前與癌前病變的關(guān)系仍有待考究。因此本研究選取張掖市第二人民醫(yī)院收治的胃部不適患者的臨床資料進(jìn)行分析,以研究CK、MUC5ac、Ki67表達(dá)與胃癌癌前病變的關(guān)系及對(duì)胃癌早期診斷的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年10月至2021年10月于張掖市第二人民醫(yī)院就診的102例胃部不適患者為研究對(duì)象,其中男57例,女45例;年齡39～78歲,平均(57.63±5.65)歲,由張掖市第二人民醫(yī)院2名經(jīng)驗(yàn)豐富的胃鏡醫(yī)師和病理醫(yī)師聯(lián)合診斷確診為胃部良性病變患者47例(良性病變組),胃癌癌前病變患者32例(胃癌癌前病變組),早期胃癌患者23例(早期胃癌組)。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)患者均符合《中國(guó)慢性胃炎共識(shí)意見(jiàn)(2017年,上海)》[7]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)患者入院前未接受藥物治療;(3)患者于張掖市第二人民醫(yī)院接受胃鏡和病理檢查;(4)患者對(duì)本研究知情且簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)患者既往合并腸結(jié)核、胃食管反流或腸道腫瘤等消化道惡性病變;(2)患者合并嚴(yán)重肝、腎功能障礙;(4)患者既往接受胃腸道手術(shù);(5)患者存在神經(jīng)認(rèn)知功能障礙,無(wú)法配合研究。

1.2方法 收集患者的病灶組織進(jìn)行檢查,采用10%甲醛溶液進(jìn)行固定,并以梯度濃度乙醇進(jìn)行脫水處理;采用BIOBASE全自動(dòng)包埋機(jī)(濟(jì)南程騰生物技術(shù)有限公司)將組織包埋成塊,再以配套組織切片機(jī)連續(xù)切片;隨后以二甲苯、枸櫞酸鈉緩沖液和過(guò)氧化氫溶液進(jìn)行脫蠟、抗原修復(fù)和過(guò)氧化氫酶阻斷,采用磷酸鹽緩沖液反復(fù)漂洗3次;隨后加入山羊血清封閉,加入稀釋后的鼠抗人CK20單克隆抗體(上海億欣生物科技有限公司)、鼠抗人CK7單克隆抗體(上海億欣生物科技有限公司)、鼠抗人MUC5ac單克隆抗體(艾美捷科技有限公司)和鼠抗人Ki67單克隆抗體(北京普利萊基因技術(shù)有限公司);在4 ℃下孵育過(guò)夜,隨后以磷酸鹽緩沖液反復(fù)漂洗3次后滴加羊抗鼠IgG(北京索萊寶科技有限公司);采用辣根過(guò)氧化物酶顯色試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)進(jìn)行顯色處理,以蘇木精(成都普菲德對(duì)照品科技有限公司)進(jìn)行復(fù)染,梯度乙醇脫水,中性樹脂完成封片;在顯微鏡下對(duì)CK20、CK7、MUC5ac、Ki67表達(dá)進(jìn)行觀察。結(jié)果判定:由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。CK20、CK7陽(yáng)性染色均為淡黃色、棕黃色或者棕褐色,定位在細(xì)胞膜;MUC5ac陽(yáng)性染色為棕黃色,定位在細(xì)胞質(zhì);Ki67陽(yáng)性染色為棕黃色,定位在細(xì)胞核。陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù):陽(yáng)性細(xì)胞在視野內(nèi)占比<5%為0分,占比在5%～<25%為1分,占比在25%～<50%為2分,占比在50%～<75%為3分,占比≥75%為4分;染色強(qiáng)度:淡黃色為1分;棕黃色為2分;棕褐色為3分;陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)分?jǐn)?shù)與染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)相乘為最終得分,0分為陰性,>0分為陽(yáng)性。聯(lián)合診斷標(biāo)準(zhǔn):只要其中任意一項(xiàng)為陽(yáng)性即可判斷為陽(yáng)性。

1.3觀察指標(biāo) 比較3組患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67的表達(dá)情況,并分析CK20、CK7、MUC5ac、Ki67表達(dá)對(duì)于早期胃癌的診斷價(jià)值。

2 結(jié) 果

2.13組患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67表達(dá)情況比較 良性病變組、胃癌癌前病變組和早期胃癌組CK20、CK7、MUC5ac、Ki67陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);胃癌癌前病變組和早期胃癌組CK20、CK7、Ki67陽(yáng)性表達(dá)率均高于良性病變組,MUC5ac陽(yáng)性表達(dá)率低于良性病變組;早期胃癌組CK20、CK7、Ki67陽(yáng)性表達(dá)率均高于胃癌癌前病變組,MUC5ac陽(yáng)性表達(dá)率低于胃癌癌前病變組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67表達(dá)情況比較[n(%)]

2.2胃癌癌前病變患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 胃癌癌前病變組不同性別、年齡、發(fā)病部位和病理類型患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 胃癌癌前病變患者CK20、CK7、MUC5ac、Ki67蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

2.3CK20、CK7、MUC5ac、Ki67陽(yáng)性表達(dá)診斷早期胃癌的價(jià)值分析 通過(guò)繪制ROC曲線分析發(fā)現(xiàn),CK20診斷早期胃癌的曲線下面積(AUC)為0.849,靈敏度為82.6%,特異度為87.2%;CK7診斷早期胃癌的AUC為0.860,靈敏度為87.0%,特異度為85.1%;MUC5ac診斷早期胃癌的AUC為0.827,靈敏度為73.9%,特異度為91.5%;Ki67診斷早期胃癌的AUC為0.838,靈敏度為78.3%,特異度為89.5%;4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷早期胃癌的AUC、靈敏度和特異度分別為0.892、89.0%和92.5%,均高于各項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 CK20、CK7、MUC5ac、Ki67陽(yáng)性表達(dá)診斷早期胃癌的價(jià)值分析

3 討 論

早期胃癌并無(wú)明顯癥狀,大部分患者出現(xiàn)癥狀時(shí)已經(jīng)發(fā)展至終末期,導(dǎo)致預(yù)后效果較差。胃癌是一個(gè)持續(xù)性病理性改變,可經(jīng)歷正常胃黏膜、淺表性胃炎、萎縮性胃炎、腸上皮化生和異型增生等過(guò)程,最終進(jìn)展為胃癌[8]。因此對(duì)胃癌癌前病變和早期胃癌的診斷極為重要。本研究為此展開(kāi)討論,為臨床上胃癌癌前病變和早期胃癌的診斷提供基礎(chǔ)。

CK是細(xì)胞骨架成分的一種,能夠發(fā)揮穩(wěn)定細(xì)胞形態(tài)、運(yùn)動(dòng)和調(diào)節(jié)細(xì)胞分化的能力[9]。CK20是CK的一種,具有較高的上皮特異性,在非上皮細(xì)胞或者組織中均無(wú)表達(dá)。通常情況下,CK20主要分布在細(xì)胞核和細(xì)胞器周圍。當(dāng)癌變細(xì)胞惡性增生時(shí),CK需要適應(yīng)惡性細(xì)胞引起的細(xì)胞形態(tài)和功能的改變,進(jìn)而出現(xiàn)一系列的狀態(tài)重建[10]。CK7最初是在人體卵巢細(xì)胞株中被提取,在乳腺、肺、上皮組織和子宮內(nèi)膜中均呈陽(yáng)性表達(dá)[11]。本研究結(jié)果顯示,胃癌癌前病變組和早期胃癌組CK20和CK7陽(yáng)性表達(dá)率均高于良性病變組。可見(jiàn)CK20和CK7均在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。同時(shí)進(jìn)行診斷價(jià)值分析發(fā)現(xiàn),兩種蛋白對(duì)于早期胃癌的診斷價(jià)值均較高。MUC5ac是胃型分泌型黏蛋白的一種,由胃腸道和呼吸道等上皮細(xì)胞生成,可發(fā)揮保護(hù)黏膜上皮和潤(rùn)滑的效果[12]。MUC5ac是人體黏膜黏液的重要組成部分,與上皮細(xì)胞更新、分化、完整性保持及抵御腫瘤侵襲存在一定的相關(guān)性。張?jiān)路驳萚13]研究發(fā)現(xiàn),MUC5ac在胃癌組織中呈低表達(dá),與患者分化程度和預(yù)后存在相關(guān)性。這與本研究結(jié)果,胃癌癌前病變組和早期胃癌組MUC5ac陽(yáng)性表達(dá)率低于良性病變組一致。本研究結(jié)果還顯示,MUC5ac對(duì)于早期胃癌的診斷價(jià)值較高。這是因?yàn)?胃部出現(xiàn)病理性改變時(shí),MUC5ac也出現(xiàn)變化,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)異常,硫基化、糖基化受到抑制,這均會(huì)影響MUC5ac對(duì)于胃腺的保護(hù),進(jìn)而導(dǎo)致胃癌癌前病變及胃癌[14]。Ki67是大分子蛋白的一種,在細(xì)胞周期G1后期逐漸開(kāi)始表達(dá),在S期及G2期表達(dá)逐步升高,直到M期表達(dá)達(dá)到最高值。Ki67具有DNA結(jié)合特性,是有絲分裂DNA結(jié)構(gòu)的重要維持蛋白,在腫瘤細(xì)胞增殖期表達(dá)明顯升高[15]。本研究結(jié)果顯示,胃癌癌前病變組和早期胃癌組Ki67陽(yáng)性表達(dá)率均高于良性病變組。這與張興旺等[16]研究結(jié)果一致,提示Ki67在胃癌患者病情進(jìn)展中具有重要的檢測(cè)價(jià)值。本研究進(jìn)一步行診斷價(jià)值分析,結(jié)果顯示,Ki67對(duì)于早期胃癌的診斷價(jià)值較高,這也進(jìn)一步證實(shí)Ki67在早期胃癌的檢測(cè)中具有重要意義。另外,本研究對(duì)4項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)發(fā)現(xiàn),其對(duì)于早期胃癌的診斷價(jià)值均高于各項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)。可見(jiàn),4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)能夠彌補(bǔ)各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的不足之處。

綜上所述,CK20、CK7、MUC5ac、Ki67能夠有效反映胃癌癌前病變和早期胃癌情況,4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于胃癌癌前病變和早期胃癌的診斷價(jià)值較高,能夠有效彌補(bǔ)單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的不足。