宮頸疾病患者陰道微生態失衡對其免疫功能的影響分析

吳守燕

福建省邵武市婦幼保健院檢驗科 354000

陰道微生態是由陰道解剖結構及局部免疫系統、陰道微生物、宿主內分泌系統共同組成的動態平衡系統。健康狀態下,微生態系統處于平衡狀態能夠抵御病原菌感染,確保生殖道的健康,若優勢菌定植率下降、大量病原菌繁殖則會導致陰道微生態失衡,很容易誘發宮頸病理性改變[1]。近年來,大量的研究證實陰道微生態菌群與宮頸炎、宮頸癌的發生、進展相關[2-3]。有報道表明宮頸上皮內病變(CIN)、宮頸癌(CC)的發生也與機體免疫系統有關,以T淋巴細胞亞群為主的免疫細胞在抗腫瘤中發揮巨大的作用[4]。目前宮頸疾病陰道微生態及細胞免疫等相關研究較多,但兩者在宮頸疾病中的關聯性研究較少。基于此,本研究旨在分析宮頸疾病患者陰道微生態失衡對免疫功能的影響,現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年3月—2021年3月收治的宮頸疾病患者89例作為觀察對象,依據pH試紙及陰道分泌物涂片檢查結果分為兩組:陰道微生態正常組(正常組)43例,年齡25～73歲,平均年齡(45.7±6.5)歲;體質指數(BMI)18.4～26.4kg/m2,平均BMI(23.7±2.8)kg/m2;疾病類型:宮頸炎30例、CIN 9例、CC 4例。陰道微生態失衡組(失衡組)46例,年齡29～76歲,平均年齡(46.8±6.0)歲;BMI 18.4～26.4kg/m2,平均BMI(23.7±2.8)kg/m2;疾病類型:宮頸炎28例、CIN 13例、CC 5例。兩組患者基本資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 選擇標準 納入標準:(1)所有患者均經病理學檢查確診,臨床資料完整;(2)對試驗知情且自愿參與患者;(3)經醫院倫理委員會批準實施。排除標準:(1)合并腫瘤,且近期行放療、化療及免疫治療患者;(2)合并免疫系統疾病、內分泌系統、血液系統疾病患者;(3)宮頸手術史或子宮切除患者;(4)妊娠期、哺乳期女性;(5)檢查前3d內陰道沖洗或性生活者。

1.3 方法

1.3.1 陰道微生態平衡判斷:用窺陰鏡充分暴露受檢者的陰道、宮頸組織,采用長棉簽刮取陰道側壁1/3處分泌物。使用陰道微生態聯合測定試劑盒測定過氧化氫(Hydrogen peroxide,H2O2)、白細胞酯酶(Leukocyteesterase,LE)及唾液酸苷酶(Neuraminidase,NRH)活性3種指標。陰道微生態環境判斷標準:H2O2<2mmol/L(呈藍色)為陽性,LE呈綠色或藍色即陽性、NRH呈紫色或紅色即為陽性,該3項均為陽性診斷為陰道微生態正常,任一項為陰性即表示陰道微生態失衡[5]。

1.3.2 陰道分泌物微生物檢查:用窺陰鏡充分暴露受檢者的陰道、宮頸組織,采用醫用長棉簽刮取。(1)用高倍鏡10個視野下計數滴蟲,有活動的滴蟲即為陰道毛滴蟲感染。(2)將分泌物標本置于無雙抗培養基中7d,取無菌容器上層清液500μl,制作PCR模板檢測評估支原體感染情況。(3)在分泌物標本中滴加反應液檢測衣原體感染狀況。(4)將分泌物標本懸浮于涂于載玻片上,假絲酵母菌經石炭酸復紅染色(陽性標準:呈紅色,顯微鏡油視鏡可觀察菌絲及芽生孢子)、淋菌行革蘭染色(陽性:呈紅色且顏色較深)、霉菌行石炭酸棉藍染色(霉菌細胞、菌絲及產孢結構均為亮藍色,顯微鏡可觀察菌絲和芽生孢子);10個高倍視野下計數乳酸桿菌數量并計算其定植密度。(5)使用人乳頭瘤病毒(HPV)特定檢測試劑盒檢測,即用檢測和中的取樣刷自行取樣,再將刷頭涂抹至自測卡(卡片變色即取樣成功),報告送至檢測中心。或使用實時熒光聚合酶鏈式反應(PCR)檢測是否出現HPV感染。

1.3.3 免疫細胞檢測:分別于空腹狀態采集周靜脈血液5ml,分別放置于2個依地酸(EDTA)抗凝管中,將抗凝管上下顛倒5次左右混勻備用。一管3 000r/min離心10min,取上層血清置于-20℃冰箱中待檢,使用ELISA法測定血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)及免疫球蛋白M(IgM)水平。采用淋巴細胞分離液密度梯度離心法分離有核細胞,用流式細胞儀(Attune NxT)檢測CD3+、CD4+、CD8+水平,計算CD4+/CD8+。

1.4 觀察指標 (1)陰道分泌物病原菌檢出情況。記錄兩組患者陰道毛滴蟲、支原體、衣原體、假絲酵母菌、淋菌、霉菌及HPV等檢出情況。(2)優勢菌及乳酸桿菌定植密度對比。即顯微鏡下陰道分泌物菌群中生物量/定植密度最大的細菌為優勢菌;比較兩組患者分泌物中乳酸桿菌定植密度情況。陰道分泌物涂片革蘭染色后使用顯微鏡油視鏡觀察(×100),選取20個高倍視野乳酸桿菌數量,計算每個高倍視野乳酸桿菌數量即為乳酸桿菌定植密度。(3)免疫功能指標。對比兩組患者體液免疫及細胞免疫指標的差異。

2 結果

2.1 兩組患者陰道分泌物微生物檢出率比較 失衡組患者的陰道毛滴蟲、支原體、衣原體、霉菌以及HPV感染檢出率均顯著高于正常組,數據差異有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組患者陰道分泌物微生物檢出率比較[n(%)]

2.2 兩組患者陰道微生態優勢菌及乳酸桿菌定植密度比較 正常組優勢菌中乳酸桿菌占比顯著高于失衡組,且乳酸桿菌定植密度顯著高于失衡組,組間差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者陰道分泌物優勢菌及乳酸桿菌定植密度比較

2.3 兩組患者免疫功能指標比較 失衡組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及IgA、IgG、IgM水平均顯著低于正常組(P<0.05),CD8+則高于正常組,差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者免疫細胞表達水平比較

3 討論

女性陰道內聚集大量的微生物,健康狀態下陰道微環境中的乳酸桿菌等為優勢菌,其通過分泌H2O2、乳酸和細菌素等物質來殺滅致病菌,維持酸性環境和微環境平衡。若陰道內菌群多樣性減少或增加,酸性環境發生改變(pH>4.5),則致病菌成為優勢菌,微生態失衡便會引發生生殖道感染性疾病、宮頸疾病等;此外,宮頸疾病也會加劇陰道微生態紊亂以形成惡性循環,嚴重威脅女性的身體健康[6]。近年來,隨著分子生物學、流行病學等研究的不斷深入,人們發現陰道微生態環境改變不僅在生殖道感染性疾病起到非常重要作用,還會影響宮頸疾病、宮頸癌發生和進展。目前研究發現,HPV感染后陰道局部免疫改變在患者病情歸轉起著重要的作用,HPV病毒感染是宮頸癌前病變、宮頸癌發生及進展的重要因素[7-8];另外,腫瘤的發生也與機體免疫功能降低密切相關。T淋巴細胞作為細胞免疫反應的參與者是調節免疫反應、維持免疫平衡的關鍵;自然殺傷細胞能夠殺滅病灶細胞起到治療的目的[9]。雖然陰道微生態及免疫功能均是誘發宮頸病變的重要因素,本研究就該兩者間的關系進行分析,以期能夠在宮頸病變預防治療中提供理論參考。

本文結果顯示,失衡組患者陰道毛滴蟲、衣原體、支原體、HPV感染及霉菌檢出率均顯著高于正常組,且失衡組乳酸桿菌為優勢菌的占比、乳酸桿菌定植密度均低于正常組(P<0.05)。李慧等[10]的研究發現,慢性宮頸炎患者陰道分泌物中衣原體、支原體、滴蟲、細菌性陰道病(BV)等檢出率顯著高于正常宮頸婦女,而宮頸癌組陰道分泌物中上述微生物檢出率高于宮頸炎和正常宮頸組,而乳酸桿菌定植密度則低于其他兩組,與本研究結果相符合。李小雪等[11]的研究表明,陰道微環境紊亂、HPV感染均能夠增加宮頸病變的患病風險,且在中重度CIN的發生和進展中存在協同作用。Kovachev等[12]的一項研究發現32名宮頸癌患者陰道微生態紊亂占比為71.9%。陰道微生態菌群的主要特點是多樣性,通過對健康女性陰道細菌進行16S rRNA基因測序發現,陰道微生物群至少有5種主要類型,其中4種是乳酸桿菌為主要的菌群定植。乳酸桿菌與宿主細胞受體之間有著高度親和作用,因此能夠組織致病菌與宿主細胞受體相結合,從而降低病原菌感染的風險。本文結果發現,失衡組乳酸桿菌占比明顯低于正常組,且乳酸桿菌定植密度也低于正常組。進一步說明陰道微生物乳酸桿菌失去主導地位,乳酸桿菌定植量急劇下降,產生的H2O2減少、pH值升高,微環境失調屏障作用消失,無法及時清除滴蟲、支原體等致病微生物,從而引發病變。

T淋巴細胞亞群是細胞免疫功能中最重要的細胞群,Ig則是體液免疫功能中的蛋白家族,在機體免疫功能下降時則表現為免疫細胞和免疫球蛋白水平下降。本文失衡組患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+以及IgA、IgG、IgM免疫球蛋白水平均低于正常組,說明陰道微生態失衡會導致宮頸疾病患者細胞免疫和體液免疫受到不同程度的損傷。分析原因可能是宮頸疾病患者因為滴蟲、支原體、HPV成為優勢菌后會大量消耗抗原、抗體,在患者局部免疫功能無法清除致病菌時病原菌便會與宿主細胞合成E6、E7等蛋白,從而躲避免疫系統的監視,而隨著病情的進展微環境更趨于紊亂,機體免疫力會持續下降。

綜上所述,宮頸疾病患者陰道微生態失衡會導致乳酸桿菌的優勢菌占比降低,并減少其定植密度,還會降低機體細胞免疫、體液免疫功能。本研究有兩點不足:(1)未能對陰道微生態失衡患者的程度再分幾個亞組進行研究;(2)沒有將乳酸桿菌定植密度與免疫功能指標進行相關性分析,希望在之后的研究中開展多中心研究,以獲得更為準確的數據。