血清微小RNA-21-3p及白細(xì)胞介素-18水平對急性重癥胰腺炎并發(fā)急性腎損傷的預(yù)測價(jià)值

趙 麗,裴紅紅,白鄭海,邱曉娟,鄔 媛

(西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院急診科,陜西 西安 710004)

急性重癥胰腺炎是急診科常見的疾病,起病急,病情發(fā)展快且兇險(xiǎn),其病因尚未明確,但相關(guān)研究顯示與膽管膽結(jié)石、酗酒、膽道感染、高脂血癥、手術(shù)等因素有關(guān),隨著人們生活習(xí)慣的改變,其發(fā)病率也明顯增加。該疾病主要癥狀有惡心、嘔吐、腹痛,且常伴有休克或者多器官功能衰竭,臨床致死率可達(dá)到50%[1]。急性腎損傷是急性重癥胰腺炎常見的并發(fā)癥之一,風(fēng)險(xiǎn)較高,主要由大量炎癥因子進(jìn)入血液循環(huán)所致,預(yù)后較差,嚴(yán)重威脅患者生命安全。急性重癥胰腺炎患者出現(xiàn)急性腎損傷的概率為15%～44%,患者的病死率超過70%,因此需要采取有效的手段預(yù)測急性腎損傷,為臨床診療提供有效的參考依據(jù)[2]。既往多采用尿素氮、血肌酐等指標(biāo)預(yù)測,但其結(jié)果受尿量、飲食等因素影響,存在誤差及滯后性[3]。微小RNA(microRNA,miR)在細(xì)胞增殖、分化過程中可發(fā)揮調(diào)控作用,其中miR-21-3p與腎臟疾病的發(fā)生有密切關(guān)系。有研究[4]表明,miR-21-3p對膿毒癥患兒并發(fā)急性腎損傷具有較高的預(yù)測價(jià)值。白細(xì)胞介素18(Interleukin-18,IL-18)是具有免疫誘導(dǎo)作用的前炎癥因子,研究[5]發(fā)現(xiàn)急性腎損傷患者經(jīng)體外循環(huán)術(shù)后血清IL-18含量會(huì)上升,可反映腎損傷程度。但目前關(guān)于血清miR-21-3p及IL-18聯(lián)合預(yù)測急性腎損傷的研究較少,為明確血清miR-21-3p及IL-18對急性重癥胰腺炎患者發(fā)生急性腎損傷的預(yù)測價(jià)值,開展以下研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 經(jīng)西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)審核同意,選取2019年7月到2020年4月收治的急性重癥胰腺炎患者120例為研究對象,根據(jù)是否出現(xiàn)急性腎損傷分為急性腎損傷組(46例)和非急性腎損傷組(74例)。急性腎損傷組中,男性25例,女性21例;平均年齡(54.34±6.56)歲;體重指數(shù)(29.21±2.23)kg/m2。非急性腎損傷組中,男性39例,女性35例;平均年齡(55.03±6.98)歲;體重指數(shù)(28.66±2.03)kg/m2。病例納入標(biāo)準(zhǔn):均符合急性重癥胰腺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]且經(jīng)CT及生化實(shí)驗(yàn)確診;發(fā)病至入院時(shí)間不超過72 h;患者年齡18～80歲;簽署知情同意書;患者個(gè)人信息及臨床資料完整且真實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn):合并心血管系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病;患惡性腫瘤;患抑郁癥、老年癡呆等精神性疾病;肝功能不全(轉(zhuǎn)氨酶≥3倍正常值)或者腎功能不全(腎小球?yàn)V過率≤30 ml/min);妊娠或者哺乳期女性。另選擇同期至我院體檢健康者60例為健康組,其中男性32例,女性28例;平均年齡(54.98±5.89)歲;體重指數(shù)(29.03±2.13)kg/m2。三組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

1.2 研究方法

1.2.1 急性腎損傷判斷標(biāo)準(zhǔn):采集患者尿液樣本進(jìn)行檢驗(yàn),包括患者急驟出現(xiàn)進(jìn)行性氮質(zhì)血癥,48 h內(nèi)血清肌酐水平升高>26.5 μmol/L,尿量<0.5 ml/(kg·h),持續(xù)6 h以上。

1.2.2 血清miR-21-3p水平檢測:采集研究對象入院時(shí)的空腹靜脈血5 ml,保存于不含抗凝劑的離心管內(nèi),對樣本進(jìn)行離心處理(3000 r/min離心10 min,離心半徑12 cm),取上層血清置于-80 ℃環(huán)境中保存。全血RNA試劑盒(批號:20190214)由湖南甲骨文生物醫(yī)藥有限公司提供。通過苯酚-胍鹽法提取血清總RNA,使用分光光度計(jì)鑒定,提取總RNA純度和濃度符合標(biāo)準(zhǔn)。將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,以其為模板,根據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)專用試劑盒(批號:20190609,上海金畔生物科技有限公司)說明進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性8 min;95 ℃變性10 s,60 ℃退火50 s,70 ℃延伸10 s,共循環(huán)50次。miR-21-3p引物序列購于上海滬宇生物科技有限公司,引物序列見表1。采用Line Gene K Plus熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀(型號FQD-48A)進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后繪制溶解曲線,記錄循環(huán)閾值。以內(nèi)參U6表達(dá)量作為參照,通過2-ΔΔCt法計(jì)算血清miR-21-3p相對表達(dá)量[7]。

表1 miR-21-3p和U6基因引物序列

1.2.3 血清IL-18水平檢測:抽取研究對象空腹?fàn)顟B(tài)下肘靜脈血3 ml,置于含有抗凝劑的抗凝管內(nèi),離心處理后(3000 r/min離心10 min,離心半徑12 cm)取上清液置于-80 ℃環(huán)境中保存。采用BS-350S全自動(dòng)生化分析儀通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測IL-18水平。試劑盒(批號:20180910)購于北京索萊寶科技有限公司,實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較三組血清miR-21-3p表達(dá)量及IL-18水平。②比較不同臨床資料患者miR-21-3p表達(dá)量、IL-18水平。臨床資料主要包括年齡、性別、體重指數(shù)、病因類型、合并疾病類型、急性生理與慢性健康評分(APACHE Ⅱ評分)、CT分級、胸水。APACHE Ⅱ評分=急性生理評分+年齡評分+慢性健康評分,總分71分,評分越高表示病情越嚴(yán)重。③分析急性重癥胰腺炎并發(fā)急性腎損傷的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。④分析血清miR-21-3p、IL-18對急性重癥胰腺炎并發(fā)急性腎損傷的預(yù)測價(jià)值。

2 結(jié) 果

2.1 三組miR-21-3p表達(dá)量和IL-18水平比較 見表2。與健康組比較,急性腎損傷組、非急性腎損傷組血清miR-21-3p表達(dá)量和IL-18水平更高,且急性腎損傷組血清指標(biāo)高于非急性腎損傷組(均P<0.05)。

表2 三組miR-21-3p表達(dá)量和IL-18水平比較

2.2 不同臨床資料患者miR-21-3p表達(dá)量和IL-18水平比較 見表3。不同APACHE Ⅱ評分、CT分級、有無胸水患者的miR-21-3p表達(dá)量和IL-18水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。不同年齡、性別、體重指數(shù)、病因類型、合并疾病患者的血清指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

表3 不同臨床資料患者miR-21-3p表達(dá)量和IL-18水平比較

2.3 急性重癥胰腺炎并發(fā)急性腎損傷影響因素分析 見表4、5。以是否發(fā)生急性腎損傷作為因變量(是=1,否=0),以患者性別(男性=1,女性=2)、年齡(≤50歲=1,>50歲=2)、病因類型(酒精性=1,膽源性=2,高脂血癥=3,其他=4)、合并疾病(高血壓=1,糖尿病=2)、APACHE Ⅱ評分(<15分=1,≥15分=2)、CT分級(D級=1,E級=2)、胸水(有=1,無=2)、miR-21-3p表達(dá)量(取中位值作為截?cái)嘀?高表達(dá)=1,低表達(dá)=2)、IL-18水平(≤140 pg/ml=1,>140 pg/ml=2)為自變量進(jìn)行Logistic回歸分析。結(jié)果顯示,CT分級、胸水、血清miR-21-3p表達(dá)量和IL-18水平是急性重癥胰腺炎并發(fā)急性腎損傷的影響因素(均P<0.05)。

表4 急性重癥胰腺炎并發(fā)急性腎損傷影響因素單因素分析[例(%)]

表5 急性重癥胰腺炎并發(fā)急性腎損傷影響因素多因素分析

2.4 血清miR-21-3p、IL-18對急性重癥胰腺炎并發(fā)急性腎損傷的預(yù)測價(jià)值 見表6。ROC曲線分析結(jié)果顯示,血清miR-21-3p、IL-18單獨(dú)預(yù)測急性腎損傷有一定價(jià)值,但聯(lián)合預(yù)測的價(jià)值更高(均P<0.05)。

表6 血清miR-21-3p、IL-18對急性重癥胰腺炎并發(fā)急性腎損傷的預(yù)測價(jià)值

3 討 論

急性重癥胰腺炎患者血清中炎癥因子水平較高,大量炎癥因子通過血液循環(huán)至身體各個(gè)臟器,其中腎臟血運(yùn)豐富,易出現(xiàn)急性腎損傷,危及患者生命安全,因此需要盡早預(yù)測急性腎損傷的發(fā)生,采取應(yīng)對措施,從而改善預(yù)后,降低病死率[8]。血肌酐是預(yù)測急性腎損傷的常用指標(biāo),但一般在腎損傷72 h后其含量才會(huì)明顯上升,因此診斷具有滯后性。另外,該指標(biāo)診斷的結(jié)果受到年齡、性別、肌肉量等因素影響[9]。因此,需要尋求更準(zhǔn)確、有效的生物標(biāo)志物預(yù)測急性腎損傷。

微小核糖核酸經(jīng)轉(zhuǎn)錄后對靶基因的表達(dá)有調(diào)控作用,介導(dǎo)細(xì)胞的增殖、分化以及凋亡過程,研究[10]表明微小核糖核酸可評估急性重癥胰腺炎的治療效果和預(yù)后。miR-21-3p與腎損傷的發(fā)生和發(fā)展有密切聯(lián)系,在小鼠急性腎損傷模型中其表達(dá)量明顯增加,且其變化出現(xiàn)在血肌酐、尿素氮水平變化之前,說明miR-21-3p可作為急性腎損傷的早期預(yù)測指標(biāo)[11]。IL-18來自于近端腎小管中單核-巨噬細(xì)胞,腎損傷患者尿檢結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-18水平會(huì)明顯升高,在膿毒癥并發(fā)急性腎損傷患者中具有較高的預(yù)測價(jià)值[12-13]。本研究顯示,與健康組比較,急性腎損傷組、非急性腎損傷組miR-21-3p表達(dá)量和IL-18水平更高,且急性腎損傷組血清指標(biāo)高于非急性腎損傷組。多元Logistic回歸分析顯示,CT分級、胸水、血清miR-21-3p表達(dá)量和IL-18水平與急性重癥胰腺炎并發(fā)急性腎損傷具有相關(guān)性,說明急性重癥胰腺炎伴急性腎損傷患者的miR-21-3p表達(dá)量、IL-18水平會(huì)明顯上升,是急性腎損傷發(fā)生和發(fā)展的影響因素。miR-21-3p可參與腎小管上皮細(xì)胞凋亡調(diào)控,但腎損傷時(shí)在代償性機(jī)制刺激下會(huì)促進(jìn)腎組織的miR-21-3p表達(dá),減輕腎臟缺血再灌注損傷,同時(shí)促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞增殖,起到保護(hù)作用[14-16]。miR-21-3p高表達(dá)時(shí)會(huì)刺激程序性細(xì)胞死亡因子4、磷酸酯酶與張力蛋白同源物來阻止腎小管上皮細(xì)胞凋亡,并活化轉(zhuǎn)化生長因子-β,促進(jìn)腎組織纖維化,從而引起急性腎損傷。急性重癥胰腺炎患者體內(nèi)的IL-18水平較高,可形成爆發(fā)性炎癥反應(yīng),進(jìn)一步導(dǎo)致免疫功能紊亂,從而引發(fā)腎小管毛細(xì)血管微循環(huán)障礙、腎臟缺血再灌注損傷等情況,從而引起急性腎損傷。IL-18水平越高,急性腎損傷越嚴(yán)重[17-20]。ROC曲線分析顯示,血清miR-21-3p、IL-18單獨(dú)預(yù)測急性腎損傷有一定價(jià)值,但聯(lián)合預(yù)測的價(jià)值更高,與宋微等[21]研究結(jié)果相符。

綜上所述,急性重癥胰腺炎患者血清miR-21-3p表達(dá)量及IL-18水平會(huì)明顯上升,CT分級、胸水、血清miR-21-3p表達(dá)量和IL-18水平與急性重癥胰腺炎并發(fā)急性腎損傷密切相關(guān)。血清miR-21-3p及IL-18聯(lián)合檢測對急性重癥胰腺炎并發(fā)急性腎損傷具有較高的預(yù)測價(jià)值,對臨床診療有重要指導(dǎo)意義。