基于RhoA/ROCK通路探究復方中藥對腹水綜合征肉雞肝纖維化的影響

王慧敏，崔 亮，韓宇峰，張 劍，王珂瑤，鄧瑞強，康 杰，郭東清，段智變

（山西農業大學動物醫學學院，山西 太谷 030801）

肉雞腹水綜合征（Ascites syndrome，AS）是一種營養代謝疾病，由遺傳、缺氧、低溫、營養等多因素引起，4~5周齡肉雞多發，嚴重影響養禽業經濟發展[1]。肺動脈高壓是AS主要發病機理[1]，持續肺動脈高壓導致肝纖維化發生[2]。研究AS 肝纖維化發病機理及相關防治藥物具有重要意義。

Rho/ROCK 通路通過介導下游因子調控細胞遷移、凋亡、增殖等功能，參與多種生理病理過程，在肺動脈高壓和肝纖維化形成發病機制中，Rho/ROCK通路發揮關鍵作用[3-4]。Ras同源基因家族成員A（Ras homolog gene family member A，RhoA）、Rho 相關卷曲螺旋形成蛋白激酶（Rho associated oiled coil forming protein kinase，ROCK）、肌球蛋白輕鏈磷酸酶（Myosin light chain phosphatase，ML?CP）、MLCP 調節亞基（Myosin-phosphatase target?ing subunit 1，MYPT1）和磷酸化的肌球蛋白輕鏈（Phosphorylated myosin light chain，P-MLC）是RhoA/ROCK通路核心因子。

顧慶云、韓博等研究發現，復方中草藥和L-精氨酸（L-Arginine，L-Arg）均可有效防治AS[5-6]。本課題組前期研究，由黃芪、丹參、當歸、茯苓等組成的自擬復方中藥水提液和L-Arg通過抑制肝纖維化而有效防治AS[7]。本試驗研究RhoA/ROCK通路在AS 肉雞肝纖維化中損傷機理及自擬復方中藥水提液和L-Arg 作用機制，為AS 發病機制和有效防治藥物提供研究基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料及儀器

分期配合飼料購自山西大象農牧集團，黃芪、當歸、茯苓、丹參等均購自山西省太谷縣藥材公司，RNAiso Plus 試劑盒、SYBR Prime ScripTMRT Reagent Kit（TaKaRa，日本），ChamQ Universal SYBR Qpcr Master Mix（諾唯贊，南京），RhoA、ROCK、MLCP、P-MLC ELISA 試劑盒均購自上海酶聯生物科技有限公司。

光學顯微鏡（Olympus，BX51TF 型），核酸蛋白濃度測定儀（NanoDrop，ND-1000）。

1.2 試驗動物及分組

以分期配合飼料作為基礎日糧，100 羽1 日齡羅斯肉雞常規喂養7日后，隨機分為5組：空白對照組（K 組）、AS 模型對照組（M 組）、復方中藥水提液高劑量組（G 組）、復方中藥水提液低劑量組（D 組）和L-Arg 對照組（L-Arg 組）。……