利用SSR標記鑒定新疆地方葡萄品種資源親緣關系

王勇 孫鋒 李玉玲 蘇來曼·艾則孜 伍國紅 郭平峰

新疆是我國重要的葡萄種植區(qū)，葡萄面積和產量均居全國首位，同時擁有豐富的葡萄種質資源。在葡萄生產中，主要通過枝蔓扦插、綠枝嫁接等無性繁殖方式繁育苗木，一些小型育苗企業(yè)或果農根據自己的意愿隨意命名，導致“多品同名”或“同物異名”現象嚴重，給苗木市場經營和果農生產造成了很大影響，甚至產生了一定的經濟損失。新疆葡萄瓜果研究所幾十年來不斷在全疆開展葡萄種質資源普查、收集與保存工作，目前已收集疆內大多數地方品種資源，現選擇6組地方品種資源利用SSR標記對其親緣關系進行鑒定，為品種資源利用和新疆葡萄產業(yè)健康發(fā)展提供參考。

1? ?材料與方法

1.1? ?植物材料? ?試驗材料均來自新疆葡萄瓜果研究所葡萄種質資源圃，為4年生6個新疆地方品種近似或疑似組合19個品種，詳見? ? 表1。

1.2? ?引物? ?引物為課題組前期以107份葡萄種質資源為材料篩選出的15對SSR標記，詳見表2。

1.3? ? 試驗方法

1.3.1? ?葡萄基因組DNA的提取? ?參照CTAB改良法提取葡萄試材基因組DNA；通過瓊脂糖凝膠電泳檢測提取的試材基因組DNA的濃度和純度；將DNA溶液分為兩份，1份放入? -20 ℃冰箱中長期保存，1份放入4 ℃冰箱中 備用。

1.3.2? ?反應體系? ?使用PCR反應體系為2×Taq Mix酶10 μL，SSR雙引物混合液（10 μmol/mL）0.8 μL，模板（20 ng/μL）2 μL，dd H2O 7.2 μL；總反應體系為20 μL，PTC-100型PCR儀上進行反應。擴增程序參照王勇等的方法，在操作中根據各引物差異進行體系優(yōu)化。

1.3.3? ?PCR產物的檢測? ?利用2%瓊脂糖凝膠對擴增的PCR產物進行水平電泳檢測，若有擴增結果不理想的，需要進行補充，然后由生物技術公司通過毛細管電泳檢測產物片段種類和大小。……