提高酶抑制率法進(jìn)行果蔬農(nóng)藥殘留快速檢測準(zhǔn)確性的建議

李 欣

（大連金普新區(qū)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)發(fā)展服務(wù)中心（大連金普新區(qū)植物保護(hù)中心），遼寧大連 116100）

隨著生活水平的不斷提高，人們對于農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全問題的關(guān)注程度越來越高，隨之而來的農(nóng)藥殘留問題也日益突顯。農(nóng)藥具有防治農(nóng)作物病蟲害，促進(jìn)農(nóng)作物豐產(chǎn)豐收等優(yōu)點。農(nóng)藥在推動農(nóng)業(yè)發(fā)展的同時，也對人體健康產(chǎn)生了一定危害。為了確保將“問題”果蔬控制在餐桌之外，農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)的使用不可或缺，特別是農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)，憑借著檢測成本低和操作簡便等優(yōu)勢，在蔬菜、水果大量上市前的初篩環(huán)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用[1-2]。

在果蔬種植過程中農(nóng)藥殘留超標(biāo)主要集中在以下4個方面。①部分種植戶仍在使用國家明令禁止和限制使用的劇毒、高殘留農(nóng)藥。此類農(nóng)藥毒性大且殘留期長，甚至?xí)ΨN植用地造成嚴(yán)重污染。②部分種植戶忽視了農(nóng)藥濃度的使用比例，認(rèn)為使用低毒農(nóng)藥不會有農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題，從而出現(xiàn)過量使用低毒農(nóng)藥現(xiàn)象。③無視農(nóng)藥的使用范圍和安全間隔期規(guī)定。有的種植戶沒有嚴(yán)格按照農(nóng)藥的標(biāo)簽標(biāo)識的使用范圍和安全間隔期使用農(nóng)藥，擴(kuò)大農(nóng)藥使用范圍、不到安全間隔期時間就采收蔬菜，從而導(dǎo)致果蔬中農(nóng)藥殘留超標(biāo)。④在蔬菜種植過程中忽視其他環(huán)節(jié)，也有可能造成農(nóng)藥殘留超標(biāo)的情況發(fā)生。例如，將發(fā)酵后的雞糞作為蔬菜肥料使用，但是為殺滅雞糞中的蟲害，有的農(nóng)戶會使用劇毒農(nóng)藥，從而致使蔬菜農(nóng)藥殘留超標(biāo)的現(xiàn)象也時有發(fā)生。

目前，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥是蔬菜種植過程中被普遍使用的殺蟲劑。自2002年起，甲胺磷、甲基對硫磷、毒死蜱等66種農(nóng)藥被陸續(xù)規(guī)定為在蔬菜和果樹等農(nóng)作物中禁止使用和限制使用的農(nóng)藥，其中，有很多種農(nóng)藥是有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥。自2024年9月1日起，甲拌磷、水胺硫磷、甲基異柳磷、滅線磷這4種有機(jī)磷類農(nóng)藥也將禁止銷售和使用，由此看出，對蔬菜中這兩類農(nóng)藥殘留量進(jìn)行檢測顯得尤其重要。

對農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留量進(jìn)行測定是農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管工作中的重要環(huán)節(jié)。實驗室常采用儀器分析，如利用色譜、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等檢測技術(shù)方法對農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留量進(jìn)行檢測分析。這些檢測技術(shù)出具的結(jié)果十分精準(zhǔn)，但因需要高昂的成本且很難在現(xiàn)場進(jìn)行檢測等因素，在基層農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測機(jī)構(gòu)中未能得到廣泛推廣。相比較而言，農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)因應(yīng)用簡便、使用成本低、靈敏度高等優(yōu)勢，在基層農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中得到廣泛使用。酶抑制率法是目前發(fā)展較為成熟的農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)，能針對蔬菜和水果中的有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥進(jìn)行快速篩選測定。

1 酶抑制率法的特點

1.1 酶抑制率法的檢測原理

酶抑制率法僅適用于對樣品中有機(jī)磷類農(nóng)藥和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量進(jìn)行快速篩選測定。其檢測原理是在特定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能夠抑制膽堿酯酶的正常功能，且抑制程度與樣品中兩種農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常條件下，酶能催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝物（乙酰膽堿）進(jìn)行水解，水解物與顯色劑產(chǎn)生顯色反應(yīng)，生成黃色物質(zhì)。使用速測儀對待測液吸光值隨時間的變化值進(jìn)行測定，得到抑制率。通過抑制率數(shù)值即可判斷出被測樣品中有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)。

1.2 酶抑制率法的優(yōu)點

①檢測過程所需時間短，且樣品前處理過程比較簡單，單個蔬菜、水果樣品檢測所需時間僅約30 min，大大節(jié)約了農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測分析時間。②儀器設(shè)備體積小，重量輕，便于攜帶，能夠滿足對樣品進(jìn)行現(xiàn)場檢測的工作需求。③操作過程簡便，易于掌握，對操作人員不需要太高的技能要求，通過短期培訓(xùn)基本可掌握儀器的操作方法。④經(jīng)濟(jì)適用、成本低。目前，市面上有幾十種功能相同或相近的農(nóng)藥殘留快速檢測儀器設(shè)備，所以速測儀器的購買、運行、維護(hù)的成本與高精農(nóng)殘檢測設(shè)備相比均比較低，適合在基層日常檢測工作中廣泛使用。⑤可同時對樣品中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類兩大類農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測。

1.3 酶抑制率法的缺點

1.3.1 容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果

酶抑制率法對檢測條件控制比較嚴(yán)格，檢測結(jié)果容易出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象，造成檢測結(jié)果誤判。假陽性結(jié)果是由于酶的活性降低或滅活，導(dǎo)致底物不發(fā)揮作用，底物不能水解，不能與顯色劑結(jié)合。檢測樣品自身成分、檢測環(huán)境的溫度、操作人員操作行為等因素均可能對酶活性造成影響[3]。

1.3.2 呈現(xiàn)假陰性結(jié)果

受提取時間、緩沖液成分等因素的影響，檢測結(jié)果也會出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象。假陰性結(jié)果是因為樣品中的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥沒有被完全提取出來，導(dǎo)致檢測值比實際值偏低。此外，受酶制劑靈敏度的影響，部分農(nóng)藥有檢出限值，樣品中農(nóng)藥含量低于檢出限也會出現(xiàn)陰性結(jié)果。

1.3.3 檢測范圍的局限性

由于酶抑制率法檢測原理的局限性，只能對樣品中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量進(jìn)行快速測定，對于樣品中這兩大類農(nóng)藥以外的其他類農(nóng)藥，如擬除蟲菊酯類、有機(jī)氯類等農(nóng)藥殘留則無法檢測。

2 提高農(nóng)藥殘留快速檢測準(zhǔn)確性的建議

2.1 規(guī)范抽樣過程

抽樣過程應(yīng)嚴(yán)格遵循抽樣標(biāo)準(zhǔn)《蔬菜農(nóng)藥殘留檢測抽樣規(guī)范》（NY/T 762——2004）的要求進(jìn)行采樣，采取隨機(jī)抽樣的方式。抽取的樣品應(yīng)能充分代表該批產(chǎn)品的特征，且樣品應(yīng)該為成熟的或待上市的樣品；抽樣過程嚴(yán)格按規(guī)程操作，準(zhǔn)確記錄樣品相關(guān)信息，認(rèn)真填寫抽樣單；抽樣人員應(yīng)了解所抽取樣品的生產(chǎn)、管理情況，確保抽取的樣品符合農(nóng)藥安全間隔期規(guī)定；且需保證樣品在運輸過程中不得變質(zhì)、損壞、污染等[4-5]。

2.2 嚴(yán)格遵守檢測試劑的適用要求

檢測實驗中所有試劑配制和貯存條件都有相應(yīng)的要求，應(yīng)嚴(yán)格遵守試劑說明書，注意試劑配制前后的貯存要求，避免試劑因配制或保存不當(dāng)而失活。配制過程中必須使用蒸餾水或純凈水配制緩沖液，以減少對檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的干擾。為了使酶保持正常的活性，獲得準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，檢測室溫度應(yīng)盡量維持在20～25 ℃。

2.3 樣品前處理過程應(yīng)區(qū)別對待

檢測過程中應(yīng)確保實驗室現(xiàn)場清潔，避免其他雜質(zhì)對樣品造成污染，從而影響檢測結(jié)果。針對有明顯污垢的樣品，可擦拭表面的泥土和其他雜質(zhì)后再進(jìn)行下一步操作，但不能用水清洗樣品；針對葉綠素含量較高的蔬菜樣品，在制樣過程中則不宜切得太碎，以免影響檢測結(jié)果。針對含植物次生物質(zhì)等對酶的活性有影響的樣品，如蒜、蔥、蘿卜、芹菜、韭菜和蘑菇等，容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果，為了降低樣品自身成分對結(jié)果的干擾，應(yīng)根據(jù)情況采取增加平行檢測次數(shù)、整株蔬菜浸提等方法進(jìn)行處理。

2.4 個別水果和蔬菜等樣品的取樣方式

一般制樣過程遵循“食什么部位取什么部位”的原則。通過多年檢測實驗，總結(jié)出個別特殊的蔬菜和水果等樣品取樣方式，詳見表1。

表1 個別蔬菜和水果等樣品取樣方式

2.5 避免檢測設(shè)備、檢測用易耗品等對結(jié)果的干擾

檢測人員應(yīng)重視對儀器設(shè)備的養(yǎng)護(hù)，為避免濕度因素對檢測設(shè)備的影響，實驗室的相對濕度應(yīng)保持在45% RH～65% RH。為保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，農(nóng)藥殘留快速檢測儀在進(jìn)行實驗時應(yīng)先進(jìn)行預(yù)熱，并按儀器要求進(jìn)行定期校正，或由相關(guān)部門進(jìn)行定期校準(zhǔn)。為避免交叉污染，檢測時應(yīng)使用專用移液器。同時，注意檢測試劑的使用應(yīng)遵循“只出不進(jìn)”的原則，從容器中吸出后的試劑不能再放回容器中，以免對試劑造成污染。檢測過程中使用的易耗品，如試劑反應(yīng)盤、試管等應(yīng)及時清洗，且必須使用蒸餾水或純凈水進(jìn)行清洗，也不能同時將它們置于容器中清洗，以免造成相互污染、損壞等。

2.6 提高檢測員的操作水平

在實際檢測過程中，每個操作細(xì)節(jié)都可能對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，規(guī)范地進(jìn)行每一步操作，才能使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確、科學(xué)。檢測人員應(yīng)經(jīng)過系統(tǒng)地培訓(xùn)才可進(jìn)行實驗操作。檢測人員在進(jìn)行檢測過程中一定要規(guī)范操作流程，如加入試劑時，應(yīng)保持移液器豎直，當(dāng)移液槍頭有試劑時，切勿將移液器平放或倒置，以免對移液器造成污染，從而污染其他試劑或樣品，加底物與上機(jī)之間的間隔要盡可能短等，因此要求檢測人員應(yīng)熟練掌握操作流程。總之，檢測人員應(yīng)不斷總結(jié)經(jīng)驗并養(yǎng)成良好的操作習(xí)慣，能夠預(yù)判出每個操作步驟可能對檢測結(jié)果存在的影響因素，盡量避免人為誤差對檢測結(jié)果的不利影響。

2.7 對陽性樣品檢測結(jié)果的處理

根據(jù)國家推薦標(biāo)準(zhǔn)《蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測》（GB/T 5009.199——2003），大連市金普新區(qū)區(qū)級農(nóng)藥殘留快速檢測出現(xiàn)陽性檢測結(jié)果處理方法為檢測結(jié)果抑制率≥50%，判定為疑似陽性樣品，對疑似陽性樣品應(yīng)重復(fù)檢測5次以上，樣品陽性重現(xiàn)率≥80%，判定為不合格樣品；樣品陽性重現(xiàn)率＜80%，為合格樣品。有條件的情況下，對于不合格樣品應(yīng)通過定量分析實驗進(jìn)行進(jìn)一步檢測，確定具體農(nóng)藥品種和含量。

3 結(jié)語

綜上所述，酶抑制率法是一種準(zhǔn)確性較高的農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)，在大量蔬菜水果上市前的初篩排查環(huán)節(jié)中起著重要作用，可廣泛應(yīng)用于基層檢測機(jī)構(gòu)、種植基地、農(nóng)貿(mào)市場等場合，然而該檢測技術(shù)仍存在一定的缺陷，但是只要重視產(chǎn)生誤差的原因并盡量減小誤差，規(guī)范每一步的操作步驟，也可提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，酶抑制率法農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)也將得到不斷優(yōu)化和調(diào)整，在提升農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性中起著越來越重要的作用。