液相色譜串聯質譜法檢測食品中金剛烷胺的方法研究

張慧芳，劉俊峰，李松濤

（1.山西省檢驗檢測中心食品與糧食檢驗技術研究所，山西太原 030012；2.山西九牛牧業股份有限公司，山西太原 030023）

目前，金剛烷胺被很多國家列為禁用藥物[1]。因其售價較低，養殖戶為應對流感爆發，將金剛烷胺類藥物較多地使用在飼料中[2]，致使金剛烷胺在動物體內形成殘留，食用后會對人體產生特別大的影響[3-4]。因此，我國有必要研究金剛烷胺的檢測方法。高效液相色譜串聯質譜法能夠準確地定性和定量檢測農產品中的獸藥殘留。現行的金剛烷胺檢驗標準《食品安全國家標準 動物性食品中金剛烷胺殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》（GB 31660.5——2019）[5]就采用了高效液相色譜質譜技術。本文主要通過對液相及質譜條件的優化，提高分析的準確性和精密度，進而為雞肉和雞蛋中金剛烷胺的檢測提供一些參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

雞肉和雞蛋樣品購置于超市，均屬包裝食品；金剛烷胺標準溶液（Bepure，證書編號為B0019913）；D15-金剛烷胺（Bepure，證書編號為D0015046）；乙腈（默克）、正己烷（美國Tedia公司）；甲醇（色譜純）、無水硫酸鈉（分析純）；甲酸（色譜純，Fisher公司）、過濾器（北京科德諾思技術有限公司，200 mg/3 mL）；本實驗室純水機制一級超純水。

1.2 儀器與設備

LCMS-4500三重四極桿色譜質譜聯用儀（使用ESI離子源，美國AB SCIEX公司）；BSA124S-CW電子天平（精密度0.000 1 g，常熟雙杰測試儀器廠）；IKA VORTEX 3渦旋儀；離心機（德國SIMGA公司）；SB-5200DTDN超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；UGC-45CE電動升降圓形水浴氮吹儀（優晧聯合）等。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準溶液配制

（1）標準貯備液。分別準確稱取金剛烷胺、D15-金剛烷胺各10 mg，分別轉移至2個10 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，即為1 mg·mL-1的標準配制液。-20 ℃以下保存，有效期為3個月。

（2）標準工作液。用移液槍分別吸取0.1 mL金剛烷胺和D15-金剛烷胺的標準貯備液，各自移入100 mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成金剛烷胺、D15-金剛烷胺濃度為1 μg·mL-1的標準工作液。2～8 ℃保存，有效期為2周。

1.3.2 樣品前處理

參照《食品安全國家標準 動物性食品中金剛烷胺殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》（GB 31660.5——2019）的前處理辦法分別對包裝食品中雞肉和雞蛋樣品進行大量重復處理。

1.3.3 儀器條件

（1）液相條件。兩路流動相：0.1%的甲酸水溶液和甲醇；色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18（2.1×100 mm，3.5 μm）；洗脫條件：見表1；進樣量：10 μL；流速：0.4 mL·min-1；柱溫箱溫度：40 ℃。

表1 液相洗脫條件

（2）質譜條件。質譜條件見表2，監測離子參數條件見表3。

表3 監測離子參數條件

2 結果與分析

2.1 色譜圖

由圖1可知，目標化合物的響應可達5×104，內外標出峰時間重合且穩定，峰形細而尖，信噪比（S/N）遠超過10，結合前期掃描所得定性離子對（152/93）與定量離子對（152/135）以及內標（167.3/150.3）在對應時間穩定出現，充分說明目標物金剛烷胺和D15-金剛烷胺穩定存在，進而可以準確地定性定量研究。

圖1 金剛烷胺和D15-金剛烷胺的色譜圖

2.2 線性范圍、檢出限及定量限信噪比

2.2.1 標準曲線繪制

采用逐級稀釋法配制金剛烷胺的質量濃度為2 ng·mL-1、4 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1和100 ng·mL-1，D15-金剛烷胺質量濃度均為20 ng·mL-1的系列標準溶液，按照1.3.3儀器條件上機測試，以金剛烷胺與D15-金剛烷胺濃度比為橫坐標，兩者的面積比為縱坐標，繪制標準曲線，得標準曲線線性方程為y=0.049 9x+0.002 06，相關系數r為0.999 9，表明在2～100 ng·mL-1時，金剛烷胺的線性關系良好。

2.2.2 檢出限信噪比

方法檢出限為1 μg·kg-1，經公式計算后得上機濃度為2 ng·mL-1，此時定量離子m/z=135的信噪比為573.5，當信噪比為3時，儀器檢出限為0.005 23 μg·kg-1，能滿足標準GB 31660.5——2019的要求。

2.2.3 定量限信噪比

方法定量限為2 μg·kg-1，經公式計算后得上機濃度為4 ng·mL-1，此時定量離子m/z=135的信噪比為1 037，當信噪比為10時，儀器檢出限為0.019 3 μg·kg-1，能滿足標準GB 31660.5——2019的要求。

2.3 回收率與精密度

參照標準GB/T 27404——2008[6]的要求，本試驗分別在雞肉和雞蛋基質的空白樣品中添加1、2、5倍定量限濃度的標準溶液，進行雙平行加標回收試驗，計算回收率，結果見表5。同時，在1倍定量限濃度（4 ng·mL-1）添加水平下做6平行試驗，計算精密度RSD值，結果見表6。經測試，該方法的加標回收率為74.4%～117.9%，RSD為0.65%，均能滿足標準要求。

表5 雞肉和雞蛋基質中加標回收結果

表6 方法精密度試驗結果

3 結論

綜上可知，在濃度為2～100 ng·mL-1時，金剛烷胺的線性關系好，相關系數r為0.999 9，加標回收率在74.4%～117.9%，RSD＜10%。此方法能夠準確測定雞蛋和雞肉基質中的金剛烷胺，有較好的穩定性，且雞蛋基質低于雞肉基質的加標回收率，說明雞蛋基質更復雜，對提取金剛烷胺的影響更大，該試驗可對研究食品中金剛烷胺的檢測提供一些參考依據。