內(nèi)皮脂肪酶基因rs2000813 位點(diǎn)多態(tài)性與冠心病的關(guān)系研究

宋星明，帕麗達(dá)·阿布來提，哈力沙·艾日肯江，迪麗胡瑪爾·阿布來提，高穎

冠心病（coronary heart disease，CHD）主要是由脂代謝紊亂、冠狀動脈內(nèi)皮損傷、慢性炎癥反應(yīng)等綜合因素造成的［1］。研究表明，基因遺傳突變可參與CHD的眾多病理生理過程［2］。近年血脂代謝紊亂、慢性炎癥反應(yīng)相關(guān)臨床預(yù)防、治療用藥及臨床診療指南的相繼發(fā)布，在很大程度上解決了CHD診療的部分問題，但CHD發(fā)病率升高的趨勢仍未在根本上得到遏制［3］。為了從源頭發(fā)現(xiàn)問題、解決問題，研究基因遺傳突變在CHD患者血脂代謝、炎癥反應(yīng)、血管內(nèi)皮損傷等過程中的調(diào)控機(jī)制成為CHD預(yù)防與治療領(lǐng)域新的科研突破口［4］。血管內(nèi)皮細(xì)胞在炎癥因子、內(nèi)毒素等刺激下可生成大量內(nèi)皮脂肪酶（endothelial lipase，EL），其在脂蛋白代謝中發(fā)揮了重要作用，并參與了炎癥反應(yīng)、代謝紊亂和動脈粥樣硬化等病理生理過程［5］。目前國內(nèi)外有關(guān)EL基因rs2000813位點(diǎn)多態(tài)性與CHD的關(guān)聯(lián)性研究較少，且部分研究結(jié)果異質(zhì)性較大。本研究旨在分析EL基因rs2000813位點(diǎn)多態(tài)性與CHD的關(guān)系，以期為CHD的臨床診療新思路、新方法的形成提供理論依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2019—2021年于新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院行冠狀動脈造影檢查的CHD患者903例為病例組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）因典型心絞痛癥狀或無創(chuàng)性檢查提示有心肌缺血證據(jù)就診，冠狀動脈造影檢查明確心外膜下冠狀動脈狹窄＞50%，并診斷為CHD［6-7］；（2）自愿參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）臨床資料不完整者；（2）患有高血壓心臟病、先天性心臟病、主動脈夾層、重度心力衰竭、心源性休克、惡性心律失常、腫瘤、自身免疫性疾病、精神疾病及肝腎功能不全、腦血管疾病者。選取同期于新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院經(jīng)冠狀動脈造影或冠狀動脈CTA檢查確診的非CHD（神經(jīng)官能癥、肋間神經(jīng)炎等非心源性胸痛疾病）患者628例為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）因典型心絞痛癥狀或無創(chuàng)性檢查提示有心肌缺血證據(jù)就診，冠狀動脈造影檢查明確心外膜下冠狀動脈狹窄≤50%，排除CHD；（2）自愿參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)同病例組。本研究已在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理中心備案（IACUC20170925-02），患者均簽署相關(guān)知情同意文件。

1.2 研究方法

1.2.1 一般資料收集 收集患者一般資料，包括性別、年齡、民族、吸煙史、飲酒史、高血壓發(fā)生情況、糖尿病發(fā)生情況、BMI。

1.2.2 生化指標(biāo)檢測 采集患者清晨空腹靜脈血，送至新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，采用全自動生化分析儀（日本OLYMPUS，1000/2700型）檢測生化指標(biāo)，包括三酰甘油（triglyceride fatty acid，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（highdensity lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol cholesterol，LDL-C）、載脂蛋白A（apolipoprotein A，Apo-A）、載脂蛋白B（apolipoprotein B，Apo-B）、脂蛋白a（lipoprotein a，Lp-a）。

1.2.3 EL基因rs2000813位點(diǎn)多態(tài)性檢測 抽取患者肘靜脈血3 ml，加入2% EDTA抗凝，5 000 r/min離心10 min（離心半徑16 cm），分離白細(xì)胞，以酚-氯仿法抽取外周血白細(xì)胞基因組DNA，于-80 ℃環(huán)境下保存?zhèn)溆谩NA樣本外送高通量測序以檢測EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型及等位基因。rs2000813上游引物序列為：5'-AAACTCGTGTCAGCCCTGCAGAC-3'；下游引物序列為：5'-AAACTCGTGTCAGCCCTGCAGAT-3'。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以相對數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布的計(jì)量資料以M（P25，P75）表示，兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用Kolmogorov檢驗(yàn)；采用Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)評估研究群體遺傳平衡狀態(tài)；采用多因素Logistic回歸分析探討女性疑似CHD患者發(fā)生CHD的影響因素；采用GraphPad Prism 8.0.2繪制ROC曲線以評估EL基因rs2000813位點(diǎn)CT基因型及其聯(lián)合其他影響因素對女性疑似CHD患者發(fā)生CHD的預(yù)測效能。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料、生化指標(biāo)比較 兩組年齡、漢族者占比、TG、Lp-a比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；病例組男性占比、有吸煙史者占比、有飲酒史者占比、高血壓發(fā)生率、糖尿病發(fā)生率、BMI、TC、LDL-C、Apo-B高于對照組，HDL-C、Apo-A低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組一般資料、生化指標(biāo)比較Table 1 Comparison of baseline data and biochemical parameters between the two groups

2.2 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)結(jié)果 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)結(jié)果顯示，對照組、病例組EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型分布及等位基因頻率均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（χ2值分別為0.681、0.469，P值分別為0.630、0.685）。

2.3 兩組EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較 兩組EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 兩組EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較〔n（%）〕Table 2 Comparison of genotype and allele frequency at rs2000813 locus of EL gene between the two groups

2.4 兩組不同性別患者EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較 兩組男性患者EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。兩組女性患者EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組女性患者EL基因rs2000813位點(diǎn)等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；病例組女性患者EL基因rs2000813位點(diǎn)CC基因型占比低于對照組，CT基因型占比高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

表3 兩組男性患者EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較〔n（%）〕Table 3 Comparison of genotype and allele frequency at rs2000813 locus of EL gene of male patients between the two groups

表4 兩組女性患者EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較〔n（%）〕Table 4 Comparison of genotype and allele frequency at rs2000813 locus of EL gene of female patients between the two groups

2.5 女性疑似CHD患者發(fā)生CHD影響因素的多因素Logistic回歸分析 以年齡（實(shí)測值）、民族（賦值：漢族=1，少數(shù)民族=0）、吸煙史（賦值：有=1，無=0）、飲酒史（賦值：有=1，無=0）、高血壓（賦值：有=1，無=0）、糖尿病（賦值：有=1，無=0）、BMI（實(shí)測值）、TG（實(shí)測值）、TC（實(shí)測值）、HDL-C（實(shí)測值）、LDL-C（實(shí)測值）、Apo-A（實(shí)測值）、Apo-B（實(shí)測值）、Lp-a（實(shí)測值）、EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型（賦值：CC=0，CT=1，TT=2）為自變量，女性疑似CHD患者CHD發(fā)生情況為因變量（賦值：發(fā)生=1，未發(fā)生=0），進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，高血壓、糖尿病、BMI、TC、HDL-C、Lp-a、EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型為女性疑似CHD患者發(fā)生CHD的影響因素（P＜0.05），見表5。

表5 女性疑似CHD患者發(fā)生CHD影響因素的多因素Logistic回歸分析Table 5 Multivariate Logistic regression analysis of influencing factors of CHD in female patients with suspected CHD

2.6 EL基因rs2000813位點(diǎn)CT基因型及其聯(lián)合其他影響因素對女性疑似CHD患者發(fā)生CHD的預(yù)測效能ROC曲線分析結(jié)果顯示，EL基因rs2000813位點(diǎn)CT基因型及其聯(lián)合其他影響因素（高血壓、糖尿病、BMI、TC、HDL-C、Lp-a）預(yù)測女性疑似CHD患者發(fā)生CHD的AUC分別為0.554〔95%CI（0.508，0.600）〕、0.770〔95%CI（0.732，0.808）〕，見圖1。

圖1 EL基因rs2000813位點(diǎn)CT基因型及其聯(lián)合其他影響因素預(yù)測女性疑似CHD患者發(fā)生CHD的ROC曲線Figure 1 ROC curve of CT genotype at rs2000813 of EL gene and its combination with other influencing factors in predicting CHD in female patients with suspected CHD

3 討論

研究顯示，HDL-C升高是動脈粥樣硬化的保護(hù)因素，其通過抗炎、抗氧化、抑制血小板聚集、促進(jìn)再內(nèi)皮化等機(jī)制發(fā)揮抗動脈粥樣硬化的作用，且HDL-C與CHD的發(fā)生和患者預(yù)后密切相關(guān)［8］。EL主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞生成，具有較高的磷脂酶活性及偏低的三酰甘油脂肪酶活性，且具有調(diào)控血清HDL-C代謝的作用［9］。既往研究表明，EL是通過調(diào)控血清HDL-C的代謝來影響CHD發(fā)病的［10］，但此后的研究發(fā)現(xiàn)，炎癥狀態(tài)下EL還可促進(jìn)巨噬細(xì)胞在血管內(nèi)皮表面吸附、血小板聚集［11］、血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，其是三酰甘油脂肪酶家族中促動脈粥樣硬化作用最強(qiáng)的代謝酶［12］，而抑制炎癥狀態(tài)下EL過表達(dá)可減輕冠狀動脈粥樣硬化病變程度［13］。

本研究結(jié)果顯示，病例組男性占比、有吸煙史者占比、有飲酒史者占比、高血壓發(fā)生率、糖尿病發(fā)生率、BMI、TC、LDL-C、Apo-B高于對照組，HDL-C、Apo-A低于對照組，與既往研究結(jié)果［14］相似。本研究結(jié)果還顯示，對照組、病例組EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型分布及等位基因頻率均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，提示所選研究個體來自同一孟德爾群體；兩組EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示EL基因rs2000813位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）與疑似CHD患者發(fā)生CHD可能無關(guān)。但ABUDUREYIMU等［15］研究顯示，EL基因SNPs是CHD的影響因素；ELNAGGAR等［16］研究發(fā)現(xiàn)，EL基因rs2000813位點(diǎn)T等位基因可能是CHD的保護(hù)性等位基因；ZHAO等［17］研究發(fā)現(xiàn)，EL基因rs2000813位點(diǎn)CC基因型或C等位基因可能是CHD的遺傳性危險(xiǎn)因素，本研究結(jié)果與之存在差異，分析原因，本研究將疑似CHD患者作為對照人群，而其他研究將健康體檢人群作為對照人群。此外，本研究結(jié)果顯示，兩組男性患者EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示EL基因rs2000813位點(diǎn)SNPs與男性疑似CHD患者發(fā)生CHD可能無關(guān)；兩組女性患者EL基因rs2000813位點(diǎn)等位基因頻率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而病例組女性患者EL基因rs2000813位點(diǎn)CC基因型占比低于對照組、CT基因型占比高于對照組，提示EL基因rs2000813位點(diǎn)等位基因頻率可能與女性疑似CHD患者發(fā)生CHD無關(guān)，而EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型可能與女性疑似CHD患者發(fā)生CHD有關(guān)。進(jìn)一步進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，EL基因rs2000813位點(diǎn)基因型為女性疑似CHD患者發(fā)生CHD的影響因素。MEHILLI等［18］研究發(fā)現(xiàn)，男、女性CHD患者在臨床表現(xiàn)、合并癥、心血管危險(xiǎn)因素等方面存在差異；女性由于炎癥、精神壓力、自主神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌功能障礙等獨(dú)特因素，易發(fā)生內(nèi)皮功能障礙和隱匿型冠狀動脈性心臟病［19］。WANG等［20］研究發(fā)現(xiàn)，性激素可能介導(dǎo)肝臟EL功能，從而影響脂蛋白代謝；增加肝臟EL表達(dá)可以預(yù)防飲食誘導(dǎo)的高膽固醇血癥和動脈粥樣硬化。COLE等［21］研究發(fā)現(xiàn)，EL基因突變導(dǎo)致的EL缺乏與高脂蛋白血癥相關(guān)，EL變異體導(dǎo)致的高脂蛋白血癥在女性中較為常見。

單純SNPs對CHD的影響有限，將傳統(tǒng)的心血管病危險(xiǎn)因素與人類CHD相關(guān)基因的SNPs相結(jié)合，可增加其對CHD的預(yù)測效能。研究顯示，冠狀動脈粥樣硬化病變可能比相應(yīng)的臨床癥狀早出現(xiàn)幾十年［22］，因而積極消除可控危險(xiǎn)因素可以降低不良心臟事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，早期識別無癥狀的晚期冠狀動脈粥樣硬化患者［23］。PATTARABANJIRD等［24］研究顯示，TID3基因rs11574位點(diǎn)GG基因型聯(lián)合CHD傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素預(yù)測冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的正確率為87%，AUC為0.84，其預(yù)測效能高于TID3基因rs11574位點(diǎn)GG基因型單獨(dú)預(yù)測。本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示，EL基因rs2000813位點(diǎn)CT基因型及其聯(lián)合其他影響因素（高血壓、糖尿病、BMI、TC、HDL-C、Lp-a）預(yù)測女性疑似CHD患者發(fā)生CHD的AUC分別為0.554、0.770，提示EL基因rs2000813位點(diǎn)CT基因型聯(lián)合其他影響因素對女性疑似CHD患者發(fā)生CHD有一定預(yù)測效能。

綜上所述，EL基因rs2000813位點(diǎn)SNPs與疑似CHD患者發(fā)生CHD可能無關(guān)，與男性疑似CHD患者發(fā)生CHD可能無關(guān)；而EL基因rs2000813位點(diǎn)CT基因型是女性疑似CHD患者發(fā)生CHD的危險(xiǎn)因素，且其聯(lián)合其他影響因素（高血壓、糖尿病、BMI、TC、HDL-C、Lp-a）對女性疑似CHD患者發(fā)生CHD具有一定預(yù)測效能。但本研究尚存在一定局限性：首先，本研究為單中心研究，樣本量較小，導(dǎo)致入選患者可能存在偏倚，使結(jié)果的代表性受到影響；其次，關(guān)于EL基因rs2000813位點(diǎn)CT基因型聯(lián)合其他影響因素對女性疑似CHD患者發(fā)生CHD的預(yù)測效能，缺乏內(nèi)部驗(yàn)證和外部驗(yàn)證，其實(shí)際臨床應(yīng)用及推廣價(jià)值仍有待進(jìn)一步評估。因此，未來仍需要大樣本量、多中心、前瞻性研究進(jìn)一步證實(shí)EL基因rs2000813位點(diǎn)多態(tài)性對女性疑似CHD患者發(fā)生CHD的預(yù)測價(jià)值。

作者貢獻(xiàn)：宋星明、帕麗達(dá)·阿布來提進(jìn)行研究設(shè)計(jì)；宋星明、哈力沙·艾日肯江、迪麗胡瑪爾·阿布來提進(jìn)行數(shù)據(jù)收集與整理；宋星明進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并撰寫與修訂論文；高穎負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校，對文章整體負(fù)責(zé)、監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。