蔬菜中吡蟲啉殘留高效液相色譜檢測方法改進

劉桂伶

1.阜康市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，新疆昌吉 831500

2.阜康市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心，新疆昌吉 831500

吡蟲啉（imidacloprid，IMI）是我國（亞）熱帶農(nóng)業(yè)實踐過程中使用量最大、最廣的新煙堿類農(nóng)藥種類之一，廣泛用于蚜蟲、葉蟬和薊馬等蟲害防治[1]，具有廣譜、高效、低毒、低殘留的特點，其為煙堿乙酰膽堿受體的效應(yīng)體[2-3]，作用于昆蟲神經(jīng)，對防治刺吸式口器害蟲有特效[4]。自1991 年投放市場以來，吡蟲啉在世界范圍內(nèi)得到廣泛應(yīng)用。由于吡蟲啉的大量使用，對環(huán)境生物和人類的危害也日益明顯[5]。2021 年阜康市吡蟲啉商品年使用量0.84 t，在糧食作物、蔬菜及瓜果上均有使用。

2008 年4 月8 日國家質(zhì)檢總局、國家標(biāo)準(zhǔn)委員會發(fā)布了GB/T 23379-2009《水果、蔬菜及茶葉中吡蟲啉殘留的測定高效液相色譜法》。該標(biāo)準(zhǔn)中的高效液相色譜法是目前基層實驗室常用的吡蟲啉檢測方法，但在采用該標(biāo)準(zhǔn)檢測過程中，由于基層實驗室儀器設(shè)備、人員條件有限，存在樣品處理耗時長，回收率不理想等問題。本研究針對前處理及檢測條件進行了改進，簡化樣品前處理步驟，提高了方法的添加回收率，旨在為吡蟲啉的快速、有效檢測提供了重要依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器

標(biāo)準(zhǔn)品及試劑：吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品（100 mg/L，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研監(jiān)測所）；乙腈（色譜純，sigma）；乙腈（AR，天津大茂）；Supelclea ENVI-18 固相萃取柱（上海楚定公司）；純凈水（中國娃哈哈公司）；氯化鈉（AR，天津致遠）；氫氧化鈉（AR，天津致遠）。

儀器：LC-15C 高效液相色譜儀（日本島津公司）；氮氣發(fā)生器（北京譜萊析科技公司）；氮吹儀（上海安譜公司）；固相萃取儀（上海安譜公司）；IKA T8 高速勻漿機（德國IKA 公司）；TGL 16M 離心機（鹽城凱特實驗儀器公司）；MS 3 基本型渦旋震蕩器（德國IKA 公司）。

1.2 樣品來源

番茄、黃瓜樣品均為阜康市本地生產(chǎn)。

1.3 試驗分析方法

1.3.1 樣品提取及凈化

提取：稱取10 g 果蔬樣品于50 mL 離心管中，加入乙腈20 mL，氯化鈉5 g，10 000 r/min 高速勻漿提取1 min，將離心管放入離心機內(nèi)，在5 000 r/min 離心5 min。

濃縮：取5 mL 上層有機相氮吹至近干，加2 mL 25%乙腈水溶液渦旋將樣品充分溶解，待凈化。

凈化：加樣前依次用5 mL 乙腈活化、5 mL 25%乙腈水溶液平衡ENVI-18 固相萃取柱，然后移取全部樣品濃縮液至固相萃取柱，依次用10 mL 20 mmol/L 的NaOH 溶液、10 mL 水洗柱，棄去，抽干柱，用1 mL 乙腈洗脫并收集洗脫液定容至1 mL，過0.22 μm 濾膜，待測。

1.3.2 吡蟲啉測定條件

色譜柱：C18柱（5 μm，150×4.6 mm）；

流動相：乙腈/水=25/75；

流速：1 mL/min；柱溫：30℃；

檢測波長：270 nm；

進樣量：20 μL。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將100 mg/L 的吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈稀釋配得0.05、0.1、0.5、1、5 mg/L 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述高效液相色譜條件下進行測定，以吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積為橫坐標(biāo)x，質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時使用稀釋溶劑乙腈作為樣品空白溶液。外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的線性范圍及定量限

將配制好的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進行上機檢測，結(jié)果表明在0.05～5 mg/L 范圍內(nèi)，吡蟲啉的峰面積與對應(yīng)的質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=1.08e-005x+5.76e-003，相關(guān)系數(shù)為R2=0.9999（見圖1），吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖（見圖2）。吡蟲啉的方法定量限為0.05 mg/kg（以最低添加質(zhì)量分數(shù)為定量限）。

圖1 吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖

2.2 方法的準(zhǔn)確度與精密度

在空白番茄、黃瓜樣品中添加吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)溶液，以添加回收率評價方法的準(zhǔn)確度，以回收率平行測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）評價方法的精密度。分別向空白番茄、黃瓜樣品中添加吡蟲啉的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，添加水平為0.05 mg/kg、0.10 mg/kg、0.20 mg/kg，每個添加水平重復(fù)測定5次（見表1）。吡蟲啉在番茄、黃瓜中的添加回收率76.0%～107.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在4.7%～11.5%之間，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。空白樣品、添加回收試驗樣品譜圖（見圖3～圖6）。

表1 吡蟲啉在番茄、黃瓜中添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）

圖4 黃瓜樣品中添加回收（0.1 mg/kg）譜圖

圖5 番茄空白樣譜圖

圖6 番茄樣品中添加回收（0.1mg/kg）譜圖

3 結(jié)論

相對于國家標(biāo)準(zhǔn)本方法主要進行了以下改進：1.標(biāo)準(zhǔn)中要求樣品勻漿提取兩次，第一次加乙腈勻漿提取后加入氯化鈉再重復(fù)提取一次，本方法改為在樣品中加入乙腈和氯化鈉勻漿提取一次，通過改進可縮短樣品前處理時間；2.標(biāo)準(zhǔn)中用于濃縮的上清液為10 mL，本方法將上清液減至5 mL，減少樣品濃縮液的體積不僅可以縮短濃縮時間同時對環(huán)境也比較友好；3.將樣品濃縮的方式由旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)改為氮吹，此項改進針對基層儀器設(shè)備、人員短缺的問題可以得到有效的改善，便于大批量樣品的同時處理；4.將氮吹近干的樣品先用0.5 mL 乙腈溶解后，再加入1.5 mL 水充分溶解后全部過ENVI-18 固相萃取柱進行凈化處理，提高回收率效果明顯；5.檢測條件由梯度洗脫改為等度洗脫，流動相為：乙腈/水=25/75，通過試驗證明在此流動相配比條件下，吡蟲啉出峰良好，而且可以明顯縮短樣品檢測時間。

本試驗方法吡蟲啉的平均回收率為76.0%～107.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在4.7%～11.5%之間（n=5），準(zhǔn)確性和精密度均較好，符合測定要求。