慢性萎縮性胃炎患者血清和胃黏膜組織中hsamiR-122-5p 的表達及臨床意義

黃小玲 林尤冠 林道壯

慢性萎縮性胃炎（CAG）是一種與幽門螺桿菌（Hp）感染密切相關的、伴胃黏膜上皮及腺體萎縮的胃部疾病。該病惡變率較低，但若患者病程較長、病情較重或存在胃癌相關高危因素，其惡變率可達50%[1-2]。胃鏡和病理檢查是目前診斷CAG 的主要手段[3]。然而，有研究報道胃鏡檢查對CAG 的檢出率僅為17.7%，病理檢查對CAG 的檢出率為25.8%，這提示胃鏡和病理檢查均存在檢出率較低和漏診率較高的問題[4-5]。因此，亟待探尋更多的檢測手段以準確診斷CAG。Liu 等[6]分析了CAG 與慢性非萎縮性胃炎患者血清外泌體中miRNA 表達譜的差異，發現CAG 患者血清外泌體中hsa-miR-122-5p 和hsa-miR-122-3p 的表達均上調，但hsa-miR-122-3p 的表達不穩定，這提示血清外泌體中的hsa-miR-122-5p 有潛力成為CAG 診斷的生物標志物。研究表明，hsa-miR-122-5p 與胃癌的早期病變有關，且可有效區分萎縮性胃炎與胃癌[7]。本研究通過測定CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平，探究其對CAG 的診斷價值及與患者病理特征的相關性，以期為CAG 的臨床診斷和病情評估提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選 擇2019 年12 月 至2021 年6 月 瓊 海 市 中 醫院消化內科收治的60 例CAG 患者納入研究組，另選擇同期在該院接受胃鏡檢查的60 名健康體檢者納入對照組。研究組中男性34 例，女性26例，年齡25～69 歲，平均年齡為（45.78±10.23）歲，平均BMI 為（22.14±1.68） kg/m2；根據胃黏膜萎縮程度劃分，輕度16例，中度26例，重度18 例；根據腸上皮化生程度劃分，無腸上皮化生21 例，輕度19 例，中度12 例，重度8 例；根據異型增生程度劃分，無異型增生43 例，輕度10 例，中度4 例，重度3 例。對照組中男性34 人，女性26 人，年齡24～70 歲，平均年齡為（46.11±10.26）歲，平均BMI 為（22.21±1.73）kg/m2。2 組的性別、年齡、BMI 差異均無統計學意義（P均＞0.05），具有可比性。所有受試者均簽署知情同意書，本研究獲得醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入和排除標準

研究組的納入標準：（1）年齡為18～80 歲；（2）符合《中國慢性胃炎共識意見（2012 年，上海）》[8]中的診斷標準，并經胃鏡及病理檢查確診；（3）入組前未接受CAG 相關治療；（4）意識清楚，無認知功能障礙。排除標準：（1）合并消化道潰瘍；（2）合并其他系統嚴重疾病或惡性腫瘤；（3）有抗生素等藥物濫用史；（4）妊娠期或哺乳期婦女。

對照組的納入標準：（1）年齡為18～80 歲；（2）胃鏡及病理檢查均顯示胃黏膜無異常。排除標準：（1）近3 個月內有抗炎藥物、胃藥等影響本次檢驗結果的治療史；（2）其余同研究組。

1.3 樣本收集和處理

血清樣本：抽取受試者清晨空腹肘靜脈血5 mL，1 500 r/min 離心10 min，分離血清，-80 ℃冰箱保存，待測。胃黏膜組織樣本：胃鏡下取受試者的胃黏膜組織，-80 ℃冰箱保存，待測。

1.4 血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平檢測

采用實時熒光定量PCR 法測定血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平。采用TRIzol法（試劑盒購自上海康朗生物科技有限公司，貨號KL058）提取血清和胃黏膜組織的總RNA，使用NanoDropTMOne 紫外-可見光分光光度計（購自美國Thermo Fisher 公司）測定RNA 的濃度和純度。按照BioSciTMWitEnzy First-Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒說明書操作，合成cDNA。應用Primer 3.0軟件設計引物，引物序列見表1。PCR 反應條件：95 ℃預變性5 min；之后95 ℃變性10 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35 個循環。以U6 作為內參，采用2-△△Ct法計算血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的相對表達量。

表1 引物序列

1.5 統計學方法

應用SPSS 20.0 軟件對數據進行統計學分析。符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，2 組間比較采用獨立樣本t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用SNK-q檢驗。計數資料以例（%）表示，組間比較采用卡方檢驗。等級資料比較采用Mann-WhitneyU秩和檢驗。采用Pearson 相關系數法分析CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平與病理特征的相關性。采用ROC 曲線分析CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平對疾病的診斷效能。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2 組血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平比較

如圖1 所示，與對照組比較，研究組血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p的表達水平均顯著升高，差異均有統計學意義（P均＜0.05）。

圖1 2 組血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平比較

2.2 血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平對CAG 的診斷價值分析

ROC 曲線分析結果顯示，血清hsa-miR-122-5p的表達水平診斷CAG 的敏感度為77.59%，特異度為79.74%，ROC 曲線下面積（AUC）為0.687；胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平診斷CAG的敏感度為71.24%，特異度為69.98%，AUC為0.623；2 項聯合檢測診斷CAG 的敏感度、特異度和AUC分別為79.83%、80.11%和0.695。見圖2。

圖2 CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平診斷CAG 的ROC 曲線

2.3 不同病理特征患者的血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平比較

由表2 可知，隨著CAG 患者胃黏膜萎縮程度、腸上皮化生程度及異型增生程度加重，其血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平均顯著升高，差異均有統計學意義（P均＜0.05）。

表2 不同病理特征患者的血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平比較

2.4 CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平與病理特征的相關性分析

Pearson 相關性分析結果顯示，CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平與其胃黏膜萎縮程度、腸上皮化生程度及異型增生程度均呈顯著正相關（P均＜0.05）。見表3。

表3 CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平與病理特征的相關性分析

3 討論

CAG 為消化內科常見疾病，且被認為是一種胃癌前病變[9]。CAG 發病機制復雜，普遍認為是由多因素共同作用所致，這一特點為該病的診斷和治療帶來困難[10]。因受多種因素影響，故胃鏡檢查和病理檢查診斷CAG 的敏感度均較低，且其均為侵入性檢查，患者依從性較低[11]。因此，亟待尋求新的無創診斷方法，以提高診斷CAG 的準確率，并減輕患者痛苦。

研究顯示，部分miRNA 的異常表達參與了胃黏膜損傷過程，有可能成為鑒別診斷和病理分級的重要參考指標[12]。You 等[13]在CAG 脾氣虛證患者白細胞和血清中發現了一種特異性miRNA——hsa-miR-122-5p，其介導的白細胞特征和功能的基因調控可能是CAG 的重要發病機制。本研究結果發現，與健康人群比較，CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 表達上調，這與以往的研究結果相符[6,13]。ROC 曲線分析結果顯示，CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平診斷CAG 的AUC 分別為0.687、0.623（均＞0.5），且聯合檢測診斷CAG 的AUC 為0.695，這提示hsamiR-122-5p 的表達水平可為CAG 的診斷提供一定參考，且血清和胃黏膜組織聯合檢測有助于提高診斷準確率。因胃黏膜組織的獲取需通過胃鏡檢查，屬于有創性檢查，故臨床可根據實際情況進行選擇。Xu 等[14]的研究發現，miR-122-5p 在胃癌組織和細胞中表達均顯著下調，并可促進胃癌細胞的遷移和侵襲。Liu 等[6]的研究發現，hsa-miR-122-5p 在CAG 患者血清中表達上調，且其表達水平可隨腺體萎縮程度加重而升高。本研究結果顯示，隨著CAG 患者胃黏膜萎縮程度、腸上皮化生程度及異型增生程度加重，其血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平顯著升高，這提示hsa-miR-122-5p 可能參與了CAG 的發生和發展過程，并可能成為該疾病臨床診斷和病情評估的重要生物標志物，其機制可能與調控血管內皮生長因子及其受體表達有關[15-16]。

綜上所述，CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 表達上調，其可能參與了CAG 的發生和發展過程，并有可能成為該疾病臨床診斷和病情評估的新指標。臨床可根據實際情況制定診療方案，以提高診斷CAG 的準確率。本研究尚存在不足之處，如未探討不同中醫證型CAG 患者血清和胃黏膜組織中hsa-miR-122-5p 的表達水平是否存在差異，且本研究的樣本量較小，故需在今后研究中擴大樣本量，進一步探討其在疾病診斷和病情評估中的價值。