瑤藥小馬胎藥材質量標準初探*

龔小妹，吳佩瑩，歐春麗，韋桂麗，莫單丹，趙以民，周小雷，王 碩，候小利△

（1. 廣西壯族自治區藥用植物園，廣西 南寧 530023； 2. 廣西醫科大學，廣西 南寧 530021）

小馬胎為紫金牛科植物灰色紫金牛Ardisia fordiiHemsl. 的全株［1］，又名爬地馬胎、小葉不出林、小朗傘、金銀不換、小金不換［1］、細羅傘［2］、兩廣紫金牛等［3］，生于海拔100～800 m 的疏、密林下蔭濕地，或水邊溪旁，主要分布于廣東、廣西［2，4］，多見于廣西昭平、岑溪、桂平、博白、防城、上思、大新、天等、鳳山、河池、羅城、藤縣、白色、金秀、扶綏等地［4-5］。其味微苦、性平，具有活血散瘀、化痰止咳、解毒止血等功效，用于治療肺結核、咳血、嘔血、便血、黃疸、尿路感染、睪丸炎、閉經、跌打損傷等癥，臨床常用于治療肺結核、咽喉腫痛、咳嗽痰多、產后風、骨髓炎等疾病［1］。目前，尚無瑤藥小馬胎藥材質量標準的研究報道，藥材中活性成分檢測指標的缺失會嚴重影響藥材的質量控制，故建立瑤藥小馬胎活性成分的定性、定量檢查方法對于保證其質量具有重要意義。本研究中對其進行性狀、顯微、薄層鑒別及測定灰分、水分、浸出物等含量，為其質量控制提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

CP224S 型電子分析天平（德國Sartorius 公司，精度為0.1 mg）；DM2000 型生物顯微鏡（德國徠卡公司）；SX2 - 4JOA 型箱式電阻爐（上海比爾得儀器實業有限公司）；101- 1 型電熱鼓風干燥箱（上海滬南科學儀器聯營廠）；W201 型恒溫浴鍋（上海申生科技有限公司）；QE-100g 型高速萬能粉碎機（天津泰斯特儀器有限公司）；KQ5200 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為200 W，頻率為40 kHz）；Milli - Q Academic型超純水機（美國Millipore公司）。

1.2 試藥

水為超純水；甲醇（批號為20190228），乙醇（批號為20190502），乙酸（批號為20190522），乙酸乙酯（批號為20180135），均為分析純，購于成都市科龍化工試劑廠；薄層色譜硅膠GF254板（青島海洋化工有限公司，批號 為20170804，規 格 為100 mm × 200 mm，厚 度 為0.20～0.25 mm）；瑤藥小馬胎為廣西壯族自治區藥用植物園中藥標本室人員野外采集，制成臘葉標本，經趙以民副研究員鑒定為正品，保存于中藥標本室，以樣品（編號為XMT-3）作為小馬胎的對照藥材，完成樣品收集后，將10 份樣品進行粉碎處理，過40 目篩，備用。樣品信息見表1。

表1 小馬胎樣品信息Tab.1 Information of Ardisiae Fordii Herba samples

2 方法與結果［7-10］

2.1 化學成分

小馬胎主要化學成分有巖白菜素、11-O-（3′，5′-二羥基-4′-甲氧基沒食子酰基）-巖白菜素、山柰酚-3 -O-β-D- 葡萄糖苷、羽扇豆醇、槲皮素、香草醛、沒食子酸乙酯、4 - 羥基- 3 - 甲氧基苯甲酸乙酯、α-菠甾醇［6］。

2.2 形態特征

小馬胎為紫金牛科植物灰色紫金牛Ardisia fordiiHemsl. 的全株。小灌木，高30～60 cm，具匍匐狀根莖；幼時莖密被銹色鱗片及微柔毛，通常除側生特殊花枝外，無分枝。葉片堅紙質，橢圓狀披針形或倒披針形，頂端漸尖或鈍，基部楔形且鈍或近圓形，長2.4～5.5 cm，寬1.0～1.6 cm，全緣，兩面無毛，背面被銹色鱗片，中脈于葉面下凹，背面明顯隆起，側脈極多，連成近邊緣的邊緣脈；葉柄長3 mm。傘形花序，少花，著生于側生特殊花枝頂端，花枝長6～9 cm，全部具葉或中部以上具葉；花梗長7 mm，常于近基部具苞片2片；花長4 mm，花萼僅基部連合，長1.5 mm，萼片卵形，頂端急尖或近圓形，具腺點和緣毛，多少被小鱗片；花瓣紅色或粉紅色，廣卵形，頂端急尖，具腺點，無毛，長4 mm；雄蕊為3/4花瓣長，花藥卵形，頂端急尖，背部無腺點；雌蕊較花瓣略短，子房球形，無毛，具腺點；胚珠5 枚，1 輪。果球形，直徑5 mm，有的達8～9 mm，深紅色，具疏鱗片，具腺點。花期6月至8月，果期10月至12月，有時達2月。有的植株有上部枝開花，下部枝結果的情況［2］。全年均可采收，洗凈，曬干。原植物及標本分別見圖1 A和圖1 B。

2.3 鑒別

2.3.1 性狀鑒別

本品根及根莖圓柱形，稍彎曲，疏生須根。莖圓柱形，長20～60 cm。表面棕褐色，幼枝密被銹色鱗片及微柔毛。單葉互生，葉片堅紙質，略卷曲，橢圓狀披針形或倒披針形，長2.5～5.5 cm，寬1.0～1.5 cm，先端尖，基部楔形全緣，灰綠色，葉背被銹色鱗片。莖頂偶見深紅色球形核果，直徑5～7 cm，表面具腺點。氣微，味微苦、澀［1］。詳見圖1 C。

圖1 小馬胎植物照片A.Original plant B.Specimens C.Medicinal materialsFig.1 Photos of Ardisiae Fordii Herba

2.3.2 切片顯微特征

根莖橫切面：木栓層有3～5 列長方形木栓細胞組成，細胞壁呈棕黃色，石細胞排列成環狀，顏色更深，有少量含油滴的油室和淀粉粒，外層偶見草酸鈣結晶；皮層由10 余列薄壁細胞組成，內皮層不明顯，富含淀粉粒。油室散在，皮層內外兩側最多，在橫切面呈2條顏色較深的環帶；中柱鞘纖維（1～2 列）列成環狀；韌皮部較窄，形成層明顯；木質部發達，導管通常由單個或2～3個相聚徑向排列，油室散在，顏色較深；髓部薄壁細胞較大，多呈類多角形，富含淀粉粒，偶見草酸鈣結晶及油滴。詳見圖2。

圖2 小馬胎根莖橫切面顯微圖1.Cork layer 2.Stone cell 3.Cortex 4.Oil chamber 5.Endodermis 6.Phloem 7.Xylem 8.Pith 9.Pericyclic fiber 10.Starch granuleA.Micrograph B.Enlarged micrographFig.2 Micrographs of rhizome transverse section of Ardisiae Fordii Herba

莖橫切面：表皮有多細胞（2～5 個）非腺毛；皮層內有分泌腔散在，分泌腔直徑30～90 μm，含深紅色至棕紅色分泌物和淀粉粒；有石細胞單個散在，或2～3個成群；內皮層明顯；中柱鞘纖維束排列成環；韌皮部較窄；木質部由導管和木纖維組成；髓部主要由薄壁細胞組成，有含深紅色至棕紅色分泌物和淀粉粒的分泌腔；皮層及髓部細胞中富含淀粉粒，并有草酸鈣簇晶和草酸鈣方晶散在，草酸鈣簇晶較多。詳見圖3。

圖3 小馬胎莖橫切面顯微圖1.Epidermis 2.Cork layer 3.Cortex 4.Endodermis 5.Pericyclic fiber 6.Phloem 7.Xylem 8.Pith 9.Nonglandular hair 10.Stone cell 11.Calcium oxalate square crystal 12.Secretory cavity 13.Calcium oxalate cluster crystal 14.Starch granule 15.VesselA.Micrograph B.Enlarged micrographFig.3 Micrographs of stem transverse section of Ardisiae Fordii Herba

2.3.3 粉末顯微特征

本品粉末為棕黃色。草酸鈣簇晶多見，棱角尖銳和短鈍并存，直徑10～30 μm，木纖維單個散在或成束直徑8～30 μm，壁連珠狀增厚，周圍薄壁細胞含草酸鈣簇晶；石細胞棕紅色，壁厚，長方形或長不規則形，直徑15～25 μm，單個散在或成簇存在；導管多為具緣紋孔導管或螺紋導管，直徑5～15 μm；葉表皮細胞表面有明顯紋路，氣孔不定式；非腺單細胞，少見；淀粉粒眾多，單粒呈圓形、橢圓形、不規則形，直徑3～10 μm，偶有點狀臍點，復粒由2～3分粒組成。詳見圖4。

圖4 小馬胎粉末顯微圖1.Epidermal cell 2.Calcium oxalate cluster crystal 3.Stone cell 4.Cork cell 5.Nonglandular hair 6.Starch granule 7.Fiber bundle 8.Stoma 9.Xylem parenchyma 10.VesselFig.4 Micrograph of Ardisiae Fordii Herba powder

2.3.4 薄層色譜鑒別

取樣品粉末2 g，用甲醇定容至50 mL，超聲（功率200 W，頻率40 kHz）30 min，抽濾提取液并蒸干，加甲醇5 mL 充分溶解，即為供試品溶液。取瑤藥小馬胎對照藥材2 g，提取方法與供試品溶液相同，即為對照藥材溶液。按2020年版《中國藥典（四部）》通則0502 薄層色譜法，取對照藥材溶液和供試品溶液各8 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）- 氯仿-甲醇（8∶2∶0.5，V/V/V）為展開劑，用10%硫酸乙醇試液顯色，顯色溫度為105 ℃。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置顯相同淺紫紅色主斑點。色譜圖見圖5。

圖5 瑤藥小馬胎薄層色譜圖1-3.XMT-3（reference medicinal material） 4.XMT-1 5.XMT-2 6.XMT-4 7.XMT-5 8.XMT-6 9.XMT-7 10.XMT-8 11.XMT-9 12.XMT-10Fig.5 TLC chromatograms of Yao medicine Ardisiae Fordii Herba

2.4 浸出物、總灰分、酸不溶性灰分、水分測定

以乙醇為溶劑，分別按2020年版《中國藥典（四部）》通則2201，0832，2302，2302項下方法測定浸出物、水分、總灰分、酸不溶性灰分。

10 批樣品的總灰分為5.16%～13.19%，平均為8.97%；酸不溶性灰分為0.83%～5.73%，平均為2.75%；70%乙醇浸出物為11.74%～19.18%，平均為15.26%；水分為7.91%～13.32%，平均為10.42%。鑒于本品來自野生資源，產地和采收情況較復雜，暫訂為總灰分不得過14.0%，酸不溶性灰分不得過6.0%，70%乙醇浸出物不得少于11.0%，水分不得過14.0%。結果見表2和表3。

表2 小馬胎對照藥材（編號為XMT-3）在不同溶劑中浸出物檢查結果（%）Tab.2 Results of extract test of reference medicinal material of Ardisiae Fordii Herba（No.XMT-3）in different solvents（%）

表3 10批小馬胎樣品水分、灰分及浸出物檢查結果（%）Tab.3 Results of water，ash and extract test of 10 batches of Ardisiae Fordii Herba samples（%）

3 討論

在瑤藥小馬胎藥材的薄層鑒別中，曾考察了自制板和預制板的展開效果，結果在自制板和市售板上均能檢出相應主斑點；對展開劑進行了考察，結果以石油醚（60～90 ℃）-氯仿-甲醇（8∶2∶0.5，V/V/V）為展開劑時，斑點清晰，能與其他斑點分開；對不同展開溫度和相對濕度進行了考察，結果小馬胎藥材在該薄層系統中的耐受性良好，耐受條件為溫度30 ℃，相對濕度60%。

在瑤藥小馬胎藥材浸出物溶劑的選擇中，考察了以不同體積分數乙醇溶液和水為溶劑時對浸出物的影響，結果不同溶劑的浸出物不同，水溶性稍小于醇溶性浸出物，隨著乙醇體積分數的升高，浸出物含量增加。為降低藥材無效成分的溶出度，并重點兼顧富集小馬胎黃酮類脂溶性、水溶性等主要活性成分，最終選擇70%乙醇作為醇浸出物的體積分數。

綜上所述，本研究中建立的瑤藥小馬胎質量標準可行，可科學、有效地控制小馬胎藥材的質量。擬訂瑤藥小馬胎的總灰分不得過14.0%，酸不溶性灰分不得過6.0%，70%乙醇浸出物不得少于11.0%，水分不得過14.0%。