紅花續斷膏的皮膚安全性研究

韓苗苗，李君霞，劉金磊，趙曉輝*

（1. 山東明仁福瑞達制藥股份有限公司，山東 濟南 250104；2. 山東古金中醫藥科技有限公司，山東 濟南 250104）

紅花續斷膏為紅花、續斷、蜈蚣、象皮、血竭、川烏、草烏等多味中藥制成的黑膏藥，具有活血化瘀，續筋接骨，消腫止痛，補益肝腎之功，對骨折后愈合具有促進作用。本研究采用家兔、大鼠動物試驗對紅花續斷膏的皮膚刺激性、皮膚過敏性進行研究，探討其皮膚安全性，為臨床用藥提供理論依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

HWL-02D全光譜燈（霍尼韋爾）。

1.2 試藥

紅花續斷膏 （山東古金中醫藥科技有限公司，批號：20200818）；空白基質（由麻油、鉛丹熬制而成，山東古金中醫藥科技有限公司）；2, 4-二硝基氯苯（DNCB，北京化工廠，批號：20200710）；硫化鈉（分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：20200109）；無水乙醇（分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：20190820）；麻油（食品級，聊城市金水城油脂食品有限公司，批號：200501）。

1.3 動物

新西蘭兔，普通級，雌雄各2只，共4只，2.3～2.8 kg，濟南西嶺角養殖繁育中心提供，許可證號：SCXK（魯）2015 0001；健康SD大鼠，SPF級，體重200～220 g，雌雄各半，濟南市朋悅實驗動物繁育有限公司提供，許可證號：SCXK（魯）20190003；飼養環境：恒溫26 ℃，相對濕度60 %。

2 方法與結果

2.1 家兔皮膚刺激性實驗

取新西蘭家兔4只，給藥前24 h對其背部脊柱兩側脫毛，面積約為5 cm×10 cm（相當于家兔體表面積的10 %），隨機分組；采用同體左右側自身對比法，每只動物左側背部皮膚給予空白基質作為對照組，右側背部皮膚給予供試品作為供試品組。

將膏藥加熱，溫度適宜后，貼敷于備皮處，用紗布、膠帶固定。每只動物分籠飼養。空白對照組、供試品組均給藥4次，每周貼敷1次，1次貼敷7日，連續4周持續貼敷[1-3]。

實驗期間每周記錄動物體重情況。觀察給藥前，給藥1，2，3周去除殘留藥物后1 h，以及給藥4周去除殘留藥物后1，24，48，72 h的皮膚情況。肉眼觀察皮膚在各時間點的刺激反應包括：紅斑、水腫、色素沉著、出血、皮膚粗糙、皮膚菲薄，并對紅斑、水腫，按表1評分。計算每一觀察時間點各項分值，然后計算皮膚刺激強度分值，按表2評價刺激強度[2]。

表1 皮膚刺激反應評分標準

表2 皮膚刺激強度評價標準

實驗期間動物體重穩定增長（見表3），未見明顯毒副作用。在全光譜燈光下肉眼觀察皮膚反應。給藥前動物皮膚未見異常。給藥1，2，3周去除殘留藥物后1 h及給藥4周并去除殘留藥物后1，24，48，72 h，4只實驗兔均未見色素沉著、出血、皮膚粗糙、皮膚菲薄；去除殘留藥物后1 h可見輕度紅斑或水腫，癥狀不持久。停藥24，48，72 h后，空白基質組無刺激癥狀，供試品組皮膚癥狀恢復正常。供試品刺激強度積分為0.3125，該值介于無刺激判定標準0～0.49范圍，依據皮膚刺激強度評價標準，認為供試品對皮膚無刺激性，結果詳見表4、表5。

表3 實驗期間兔體重/kg

表4 空白對照組皮膚評分統計結果

表5 供試品組皮膚評分統計結果

2.2 大鼠皮膚刺激性實驗

取30只SD大鼠，隨機分為空白組、觀察組（完整皮膚組和破損皮膚組）, 每組10只。3組均于實驗前24 h將大鼠脊柱兩側毛用8 %硫化鈉淀粉糊脫凈，去毛面積約為體表面積的10 %。去毛24 h后，破損皮膚組大鼠用細砂紙在脫毛部位造成擦傷，以皮膚出現輕度密集滲血點為度。

空白組使用空白基質，供試品組局部貼敷紅花續斷膏，用紗布、膠帶固定，貼敷7 d，7 d后用麻油擦凈藥物，觀察藥物去除后1，24，48，72 h皮膚刺激反應，查看是否出現紅斑及紅腫，并觀察恢復情況。結果見表6。

表6 大鼠皮膚刺激反應實驗評分結果

大鼠皮膚刺激反應實驗結果顯示，空白組、供試品組（完整皮膚組和破損皮膚組）部分大鼠皮膚在1，24，48，72 h出現紅斑和水腫，刺激反應平均分值分別為0.30，0.37，0.43，0.30，表明供試品無刺激性。

2.3 大鼠皮膚過敏實驗

大鼠背部采取常規脫毛處理，局部碘伏消毒，保持皮膚完整，無損傷。剃毛面積3 cm×3 cm。取符合要求的大鼠30只，隨機分為空白組，DNCB組和供試品組，每組10只。各組大鼠分別用相應試藥進行去毛區皮膚致敏接觸和激發接觸[2-6]。

取空白基質、DNCB 0.2 ml和供試品，分別涂在空白組、DNCB組和供試品組的大鼠背部左側去毛區，用紗布、膠帶固定試藥留置6 h。第7，14 d各組大鼠以同樣的方法重復施用實驗試藥。

于末次致敏接觸實驗試藥后14 d，用與致敏接觸相同的方法，分別涂在相應組別大鼠右側去毛區，用紗布、膠帶固定試藥留置。6 h后用麻油擦去試藥，觀察并記錄擦去實驗試藥后0，24，48，72 h各組大鼠皮膚過敏反應情況。皮膚過敏反應評分標準見表7，藥物皮膚致敏性評價標準見表8，各組評分結果見表9。

表7 皮膚過敏反應評分標準

表8 皮膚致敏性評價標準

表9 大鼠皮膚過敏反應實驗評分結果

結果顯示空白組、供試品組及DNCB組大鼠皮膚72 h內均未出現水腫，其中空白組擦除試藥48 h后，有1只大鼠皮膚出現紅斑，72 h內未消失，無致敏性（致敏率為10 %）；供試品組擦除試藥48 h后，有1只大鼠皮膚出現紅斑，72 h內未消失，無致敏性（致敏率為10 %）；DNCB組擦除試藥24 h后，有1只大鼠皮膚出現紅斑，48 h后有2只大鼠皮膚出現紅斑，72 h內未消失，輕度致敏（致敏率為30 %）。研究表明紅花續斷膏對大鼠皮膚致敏性與空白組相當，DNCB有輕度致敏性。

3 結論

研究結果顯示，紅花續斷膏對兔皮膚無刺激性（評分＜0.49），對大鼠皮膚無刺激性（評分＜0.49）。紅花續斷膏對大鼠稍有致敏作用（致敏率為10 %），停藥后致敏反應消失，皮膚恢復正常。研究顯示紅花續斷膏皮膚局部用藥有較好的安全性。