八珍袋泡茶質量標準提升研究

韋開聽，羅朝亮，蔣 莉，龍立活，鄧秀芝，蘇煉礽，吳芳芳，陳 路

（廣西壯族自治區藥用植物園 西南瀕危藥材資源開發國家工程實驗室，廣西 南寧 530023）

八珍袋泡茶原方出自明代醫家薛己所著的《正體類要》，是由黨參、炒白術、茯苓、甘草、當歸、白芍、川芎、熟地黃八味中藥材組成，都具有補氣益血之功效[1]，適用于氣血兩虛，面色萎黃，四肢乏力等癥狀。其中當歸補血活血，調經止痛，潤腸通便；茯苓清利濕熱，利膽退黃；甘草瀉水逐飲，消腫散結；川芎活血行氣，祛風止痛；白芍養血調經，斂陰止汗，柔肝止痛，平抑肝陽，諸藥合用具有補氣益血之功效[1]，適用于氣血兩虛，面色萎黃，四肢乏力等癥。茯苓、白芍、甘草中分別含茯苓多糖、芍藥苷、甘草酸成分，均具有免疫調節作用[2-4]。當歸、川芎為臨床常用的養血活血藥[5]，其有效成分藁本內酯對婦科疾病[6]、心血管系統[7]有較強藥理活性，在治療循環系統疾病過程中，能擴張血管、增加冠脈流量[8]。

1991年出版的《衛生部藥品標準》收錄八珍袋泡茶的質量標準，迄今逾三十多年仍在收錄范圍內，但其完善與提高的空間很大，目前有關八珍袋泡茶中的同時測定不同成分的含量和薄層色譜（TLC）定性鑒別相對較少，八珍袋泡茶方中藥材多，單個藥材成分的鑒定和含測較為復雜，本研究在現在有文獻報道的基礎上，結合《中國藥典》2020版中當歸、川芎、茯苓、甘草質量標準有關方法，采用TLC同時對當歸和川芎，茯苓和甘草進行定性鑒，以高效液相法（HPLC）同時測定芍藥苷和藁本內酯的含量，以期為質量標準提高提供實驗數據，對保證其質量標準的完善和提高具有重要意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

VARIAN 210型高效液相色譜儀（美國瓦里安公司）；MS 205 DU型十萬分之一電子天平（瑞士Mettle-Toledo有限公司）；BSA124S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；SB-5200D型超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份公司，功率為200 W，頻率為40 kHz）；UV-1240型紫外可見分光光度計（日本Shimadzu UV公司）；ZF-8型暗箱式四用紫外分析儀（上海嘉鵬科技有限公司）。

1.2 試藥

當歸對照藥材（批號：120927-201617），川芎對照藥材（批號：120918-201813），茯苓對照藥材（批號：121117-201910），甘草對照藥材（批號：120904-202021），芍藥苷對照品（批號：110736-202044，含量以96.8 %計）均購自中國食品藥品檢定研究院；藁本內酯對照品（上海麥克林生化科技有限公司，批號：Z812557，含量≥99 %）；乙腈、磷酸為色譜級試劑，水為超純水，其余試劑均為分析純試劑；八珍袋泡茶共3批（廣西藥用植物園制藥廠生產，批號分別為：210101，210102，210401，規格：2.4 g/袋）。

2 方法與結果

2.1 TLC鑒別

2.1.1 當歸、川芎的鑒別 取本品2袋，加入30 ml石油醚，超聲處理30 min，取出，濾過，濾液揮干，殘渣加1 ml環己烷使溶解，作為供試品溶液；取當歸、川芎對照藥材粉各1 g，分別同法制成對照藥材溶液；按八珍袋泡茶處方取缺當歸、川芎的其余藥材按工藝制成缺當歸、川芎陰性樣品，同法制成陰性對照溶液。按2020年版《中國藥典》（四部）通則0502 薄層色譜法[9]，吸取上述4種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板，以環己烷-乙酸乙酯（9:1）為展開劑，飽和30 min，展開，取出，晾干后置于365 nm紫外光下檢視。結果顯示，在與對照藥材色譜相應的位置上供試品色譜顯相同顏色的熒光斑點，且陰性對照無干擾，見圖1A。

2.1.2 茯苓、甘草的鑒別 按2.1.1項下方法制備供試品溶液；取茯苓、甘草對照藥材粉各1 g，加入30 ml石油醚，超聲處理30 min，取出，濾過，濾液揮干，殘渣加1 ml環己烷使溶解，分別制成對照藥材溶液；按八珍袋泡茶處方取缺茯苓、甘草的其余藥材按工藝制成缺茯苓、甘草陰性樣品，同法制成陰性對照溶液。按2020年版《中國藥典》（四部）通則0502 薄層色譜法[9]，吸取上述4種溶液各10 μl，分別點于同一硅膠G薄層板，以環己烷-氯仿-丙酮（10:2:0.7）為展開劑，飽和30 min，展開，取出，晾干后噴10 %硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點清晰，放置10 min，紫外光（365 nm）下檢視。結果顯示，在與對照藥材色譜相應的位置上供試品色譜顯相同顏色的熒光斑點，且陰性對照無干擾，見圖1B。

圖1 TLC色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 Kromasil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈（A）-0.1 %磷酸水溶液（B），梯度洗脫（程序見表1）。檢測波長：0～15 min：230 nm（檢測芍藥苷），15～30 min：280 nm（檢測藁本內酯）；流速：1.0 ml/min；柱溫：30 °C；進樣量：10 μl；理論塔板數以芍藥苷峰、藁本內酯峰計算，都不低于4000。

表1 梯度洗脫程序

2.2.2 對照品溶液制備 精密稱取芍藥苷對照品、藁本內酯對照品適量，加70 %乙醇制成芍藥苷濃度為0.1588 mg/ml、藁本內酯濃度為0.1400 mg/ml的混合對照品儲備液，精密量取上液5 ml，置10 ml棕色量瓶中，即得混合對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備 精密稱取八珍袋泡茶樣品1 g，置50 ml具塞瓶中，精密加入70 %乙醇25 ml，稱重并浸泡1 h，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱定重量，用70 %乙醇補足減失重量，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液制備 按八珍袋泡茶處方比例，取缺白芍、當歸、川芎的其余藥材，按工藝制成缺白芍、當歸、川芎陰性樣品，并按2.2.3項下方法制備陰性樣品溶液，即得。

2.2.5 專屬性試驗 分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μl，按2.2.1項下色譜條件注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖2。結果顯示，供試品中芍藥苷、藁本內酯與混合對照品在相同的保留時間處有相應的色譜峰，峰形良好，與其他色譜峰分離度大于1.5，且陰性對照無干擾，表明方法具有良好的專屬性。

圖2 高效液相色譜圖（0～15 min：230 nm；15～30 min：280 nm）

2.2.6 線性關系考察 分別精密量取2.2.2項下混合對照品溶液儲備液1，2，3，4，5，6，7，8 ml，分別置于10 ml量瓶中，加入70 %乙醇定容到刻度，搖勻。按2.2.1項下色譜條件測定，記錄峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標，進樣量（X，μg）為橫坐標繪制標準曲線，計算回歸方程，得芍藥苷、藁本內酯回歸方程分別為：Y=33.7046X+35.8124，r=0.9998；Y=6.5671X+4.8128，r=0.9996。結果表明，芍藥苷、藁本內酯濃度分別在15.9～127.1 μg/ml、14.0～112.0 μg/ml范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.2.7 精密度試驗 取混合對照品溶液適量，按2.2.1項下色譜條件連續重復進樣測定6次，記錄峰面積并計算RSD值，考察芍藥苷、藁本內酯混合對照品峰面積的變化情況。結果表明，芍藥苷、藁本內酯峰面積RSD分別為0.71 %，0.82 %，表明該儀器精密度良好。

2.2.8 穩定性試驗 精密稱取八珍袋泡茶（批號：210101）樣品1 g，按2.2.3項下方法制備樣品溶液，再按2.2.1項下色譜條件進樣測定，分別在0，1，2，4，8，12，24 h進樣測定，記錄峰面積并計算RSD值，考察八珍袋泡茶供試品溶液室溫下放置不同時間峰面積變化情況。結果表明，供試品溶液中芍藥苷、藁本內酯峰面積RSD分別為1.18 %，1.55 %，表明該供試品溶液在24 h內相對穩定。

2.2.9 重復性試驗 精密稱取八珍袋泡茶（批號：210101）樣品1 g，共6份，按2.2.3項下方法制備樣品溶液，再按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄6份芍藥苷、藁本內酯的峰面積以計算含量。結果表明，芍藥苷、藁本內酯平均含量分別為1.9076，1.1873 mg/g，RSD分別為0.94 %，1.09 %。說明方法重復性良好。

2.2.10 加樣回收試驗 精密稱取芍藥苷對照品0.0130 g、藁本內酯對照品0.0078 g，置25 ml量瓶中，加70 %乙醇溶解并稀釋至刻度，配成含芍藥苷0.5034 mg/ml、藁本內酯0.3120 mg/ml的混合對照品溶液；精密稱取八珍袋泡茶（芍藥苷含量為1.9076 mg/g，藁本內酯含量為1.1873 mg/g）樣品0.5 g，共9份，依次精密加入混合對照品溶液（芍藥苷濃度 0.5034 mg/ml，藁本內酯濃度0.3120 mg/ml）1，2，3 ml，各3份，按2.2.3項下方法制備樣品溶液，再按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率。結果芍藥苷、藁本內酯平均回收率分別為98.64 %，98.34 %，其RSD分別為1.36 %，1.64 %，結果見表2。

表2 加樣回收試驗（n=9）

2.2.11 樣品含量測定 精密稱取八珍袋泡茶3批不同批號的樣品，每批各1 g，按2.2.3項下方法制備樣品溶液，再按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄芍藥苷、藁本內酯峰面積并計算含量，結果見表3。

表3 樣品含量測定結果（n=3）

3 討論

八珍袋泡茶方中藥材種類較多，為了更有效地控制其質量，本研究對處方中的藥材開展薄層鑒別，采用HPLC對有效成分進行定量測定。根據《中國藥典》2020年版一部藥材項下的相關方法并結合近年發表的研究成果[10-12]，采用薄層色譜法分別同時對當歸和川芎進行鑒別，對茯苓和甘草進行鑒別，相較于現有的單個藥材鑒別方法，該方法更加高效且可行。藁本內酯是當歸、川芎的主要活性成分之一[13-14]，在以HPLC測定芍藥苷含量的基礎上，通過不斷考察不同流動相梯度洗脫方法[15-17]，最終以乙腈-0.1 %磷酸為梯度洗脫流動相，建立了同時測定藁本內酯和芍藥苷含量的測定方法。

八珍袋泡茶療效明顯，臨床應用廣泛，但其質量標準不夠完善，現有的標準僅對單個藥材進行定性和定量分析，不能很好地控制產品質量。本研究提升了八珍袋泡茶的質量標準，對現有較為復雜的研究方法進行了優化，節約了檢測成本。此外，通過標準的提升，進一步保證了用藥安全。研究結果表明，建立的檢測方法簡便可行，對批量生產的成品檢測具有指導意義。