多指標綜合加權評分法結合正交試驗優選參仁安神無糖顆粒的制備工藝

陳 程，東泳杉，閆夢茹，羅國平，李偉澤,

（1. 西安醫學院 藥學院，陜西 西安 710021；2. 江蘇微納醫藥科技有限公司，江蘇 揚中 212218）

參仁安神顆粒（Shenren Anshen Granules，SRG）來源于臨床經驗方劑，由西洋參、酸棗仁、蓮子心、甘草四味藥材組成，方中君藥為西洋參，臣藥為酸棗仁，具有補氣養陰、寧心安神的功效。該方以湯劑長期應用于臨床，效果良好。但湯劑存在一定的不足之處，一是臨時煎煮使用不便，二是口感差，三是質量不穩定不易保存[1-3]。因此擬開發為顆粒劑，可保持傳統湯劑的特點，且服用量減小，安全有效，質量可控[4-6]。本文將方中西洋參全粉入藥，酸棗仁、蓮子心、甘草三味藥采用煎煮法進行提取，選取煎煮時間、煎煮次數、加水倍量為考察因素，以酸棗仁總皂苷含量和干膏得率為評價指標，采用正交試驗法優選提取工藝。按優選提取工藝條件得到煎煮液，將煎煮液濃縮至浸膏，將方中西洋參細粉加入得到稠膏。以藥輔比例（稠膏:輔料）、混合輔料比例、乙醇濃度為考察因素，以外觀評價、顆粒合格率、顆粒休止角、顆粒吸濕性和顆粒堆密度為評價指標，采用正交試驗法優選成型工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-2012PSC型紫外可見分光光度計（尤尼柯儀器有限公司）；ACC22104電子天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司）；DZKW-D-2型水浴箱（北京市永光明醫療儀器廠）；KQ3200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；DHG9140B型電熱鼓風干燥箱（上海安亭科技儀器有限公司）。

1.2 試藥

處方中藥材均購自陜西誠合藥業有限公司并由中藥教研室教師鑒定；酸棗仁皂苷A對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號：20210433）；淀粉，糊精（安徽山河藥用輔料有限公司）；木糖醇（山東福田藥業有限公司）；乙醇（食品級）；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 酸棗仁總皂苷的含量測定

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取酸棗仁皂苷A 2.5 mg，置于10 ml量瓶，加甲醇配制成濃度為0.25 mg/ml的對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 稱取處方量酸棗仁、蓮子心和甘草，加適量水，煎煮，將水煎液濃縮至50 ml，采用水飽和正丁醇多次萃取，合并正丁醇層，用甲醇定容至10 ml，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.3 標準曲線的繪制 精密吸取對照品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 ml，分別置于10 ml量瓶中，水浴揮干溶劑，分別加入5 %香草醛冰醋酸溶液0.2 ml，再加入高氯酸溶液0.8 ml，60 ℃水浴加熱15 min，取出，立即冰浴冷卻10 min，加冰醋酸5 ml，搖勻，隨行試劑為標準空白，采用紫外分光光度計于540 nm處測定吸光度。以對照品量（X）為橫坐標，吸光度（Y）為縱坐標繪制標準曲線，計算回歸方程：Y=0.974X+0.1112（r=0.9996），結果表明酸棗仁總皂苷在0.025～0.125 mg范圍內線性關系良好。

2.1.4 樣品含量測定 準確吸取適量供試品溶液，按2.1.3項下方法操作，測定吸光度值，并計算酸棗仁總皂苷含量（mg/g）。

2.2 干膏得率的測定[7]

按處方量稱取藥材，采用水煎煮法提取，將水煎液濃縮至50 ml，精密吸取濃縮液10 ml至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干并于105 ℃干燥6 h，將其置于干燥器中冷卻1 h，迅速稱重，按下式計算干膏得率。

式中，W為浸膏質量，M為藥材質量。

2.3 提取工藝的考察[8-10]

根據預實驗結果和文獻資料，本次試驗中以加水倍數（A）、煎煮次數（B）、煎煮時間（C）為考察因素，分別選取3個水平，按L9（34）正交表進行試驗。因素水平表見表1，正交試驗結果見表2，方差分析見表3。

表1 因素水平表

表2 L9（34）正交表及試驗結果

表3 方差分析

由正交試驗結果和方差分析可知，影響因素主次為B＞C＞A，其中B（煎煮次數）、C（煎煮時間）因素對試驗結果有顯著性影響。綜合考慮，確定最佳組合為A1B2C3，即6倍量水煎煮2次，每次90 min。稱取處方量藥材，按最佳組合提取3份，經計算平均酸棗仁總皂苷含量為19.11 mg/g，干膏得率為15.32 %（n=3）。

2.4 成型工藝的研究

2.4.1 顆粒的制備 按上述最優提取工藝，稱取處方量酸棗仁、蓮子心和甘草，煎煮，煎煮液濃縮至相對密度1.12～1.15（80 ℃）浸膏，將西洋參粉碎過80目篩，加入浸膏中混合均勻，即得稠膏，備用。按試驗設計稱取各物料，混合，過14目篩制濕顆粒，60 ℃烘干2 h，整粒，即得。

2.4.2 顆粒評價指標 查閱文獻[11-13]，選取外觀評價、顆粒合格率、顆粒休止角、顆粒吸濕性和顆粒堆密度5個參數，采用多指標綜合加權法進行顆粒成形工藝的評價，權重系數分配和綜合評分計算結果見表4。

表4 顆粒評分標準

2.4.2.1 外觀評價 以10分制為標準對顆粒的均勻度、色澤進行外觀評價。

2.4.2.2 顆粒合格率 按《中國藥典》2020年版四部[14]0104顆粒項下粒度檢查方法測定，篩選合格顆粒（能通過1號篩而不通過5號篩的顆粒為合格顆粒）。合格率（%）=合格顆粒質量/總顆粒質量×100。

2.4.2.3 顆粒休止角 采用固定漏斗法[15]進行測定，計算休止角（α）。

2.4.2.4 顆粒吸濕性（率） 取干燥且恒定質量的稱量瓶，置于盛有NaCl過飽和溶液的干燥器中。取約0.5 g樣品顆粒，精密稱定（M1）后平鋪于扁形稱量瓶。稱量瓶蓋打開放于干燥器，恒溫恒濕（25 ℃，相對濕度 75 %）條件下吸濕至質量不變時，稱定顆粒質量M2。吸濕性=（M2-M1）/M1。

2.4.2.5 顆粒溶化率 取合格顆粒5 g，加熱水100 ml，攪拌5 min，離心5 min，取上清20 ml，置于恒定質量蒸發皿中，水浴蒸干，60 ℃真空干燥至恒定質量，稱重并計算溶化率，溶化率=溶化顆粒質量/顆粒質量。

2.4.3 成型工藝的考察[16]以藥輔比例（A，稠膏:輔料）、混合輔料比例（B，木糖醇:糊精）、乙醇濃度（C）為考察因素，根據預試驗結果分別選取3個水平，按L9（34）正交表進行試驗。因素水平見表5，正交試驗結果見表6，方差分析見表7。

表5 因素水平表

表6 L9（34）正交表及試驗結果

表7 方差分析

由正交試驗結果和方差分析可知，影響因素主次為B＞A＞C，即其中A（藥輔比例）、B（混合輔料比例）因素對試驗結果有顯著性影響。綜合考慮，確定最佳組合為A3B2C1，即藥輔比例（稠膏:輔料）1:2，混合輔料比例（木糖醇:糊精）1:1.3，以75 %乙醇為潤濕劑制軟材（手握成團，觸之即散），過14目篩制濕顆粒，60 ℃烘干2 h，整粒。按最佳組合制備顆粒3份。本品為淡黃色顆粒，色澤一致，顆粒大小均勻，無吸潮結塊現象，經計算平均顆粒合格率為92.1 %，吸濕率為7.88 %，休止角30.12°（n=3），顆粒熔化率為92.28 %。

3 討論

參仁安神顆粒以湯劑長期應用于臨床，但存在一定的不足之處，因此擬開發為顆粒劑。從方中各藥味的理化性質、藥理作用和節省輔料等方面考慮，本研究將方中君藥西洋參全粉入藥，其余3味藥水煎煮并濃縮至浸膏，采用部分藥材細粉與稠浸膏混合濕法制粒。酸棗仁為本方臣藥，考慮到中藥成分多、靶點多的特點，選取酸棗仁總皂苷和干膏得率為提取工藝的評價指標。顆粒劑的成型工藝考察，立足于該疾病發病的年齡特點，考慮該人群可能存在高血糖癥，故選擇無糖型輔料；另本文充分考慮到單一采用顆粒合格率作為成型工藝評價指標的缺點，選擇顆粒合格率、顆粒休止角、顆粒吸濕性和顆粒堆密度物理屬性參數作為評價指標，采用多指標綜合加權法對成型工藝進行評價。