白帶凈膠囊質量標準研究

梅婕,閆海霞,傅欣彤,杜小偉△ （1.北京市藥品檢驗研究院（北京市疫苗檢驗中心）;2.國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室;3.中藥成分分析與生物評價北京市重點實驗室 北京 102206）

白帶凈膠囊是現代臨床外用（陰道用）中成藥，具燥濕、止帶、殺蟲的功效。用于濕熱蘊結型帶下證。由白礬、滑石、雄黃、硼砂、兒茶、冰片六味中藥組成。該品種現行標準混亂，兩個標準分別為《衛生部藥品標準》新藥轉正標準第四十一冊頒布件（2002）國藥標字Z-189號，標準號WS3-369（Z-048）-2002（Z），生產單位為A公司；國家食品藥品監督管理局國家標準頒布件（2015）國藥標字Z-0502號，標準號WS3-369（Z-048）-2002Z-1，生產單位為B公司。兩份標準檢測項目一致。檢測項主要涉及顯色反應、沉淀反應、冰片的薄層色譜鑒別、三氧化二砷、重金屬、溶散時限檢查等，并收載有滴定法測定白礬中硫酸鋁鉀的含量。本研究針對易揮發貴細藥材冰片、兒茶等展開研究，以便較好地控制產品質量。

1 儀器、材料及樣品

1.1 材料、儀器 硅膠G薄層板：MERCK-預制板TLC Silica gel 60，批號HX117107、MN-SIL G-25；批號412351、煙臺化工研究所。

儀器：Agilent7890B氣相色譜儀、7683B自動進樣器、FID檢測器、DTC-27J超聲波清洗器，湖北鼎泰恒勝科技設備有限公司生產。

對照品：樟腦（批號110747-200507，純度99%）；龍腦（批號110881-200706，純度99.2%）；異龍腦（批號1512-200207，純度99%）；兒茶（批號121180-200604）；來源：中國食品藥品檢定研究院。

試液：乙酸乙酯、甲醇、乙醇為分析純，來源：國藥集團化學試劑有限公司。水為超純水，來源：自制。

1.2 樣品 樣品來自于同一企業，批號：A、B、C、D。

2 方法與結果

2.1 兒茶薄層色譜鑒別 此方法為文獻已收載方法[1-2]。取本品內容物2.5g，加乙醚30ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使其溶解，作為供試品溶液。另取兒茶對照藥材0.1g，同法制成對照藥材溶液。按處方中藥味比例，配制不含兒茶的群藥，按其制法制成兒茶陰性樣品制劑，按照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5-10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（30∶25∶4）為展開劑展開，展距15cm，取出，晾干，噴以3%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。實驗結果表明，薄層色譜斑點清晰，重現性較好，空白無干擾。薄層色譜圖見圖1。

圖1 兒茶薄層色譜圖（溫度：25℃，濕度：20%）。1.兒茶陰性樣品；2-4.白帶凈膠囊樣品；5.兒茶對照藥材

2.2 冰片含量及樟腦限量檢查 前期閱讀資料[3-7]，樟腦、龍腦和異龍腦可以在同一色譜條件下分離檢測，故在此條件下進行實驗研究。

2.2.1 色譜條件 采用Agilent J＆W scientific DB-NOWAX（30m×0.25mm，0.5μm 123-7033）聚乙二醇毛細管柱；柱溫為130℃；分流進樣，分流比6∶1；FID檢測器；進樣口溫度220℃；檢測器溫度230℃。理論板數按龍腦峰計算應不低于5000，各色譜峰與其相鄰色譜峰分離度均大于1.5。

2.2.2 對照品溶液的制備 取龍腦、異龍腦對照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1ml含龍腦0.6mg、含異龍腦0.3mg的混合溶液，即得。取樟腦對照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1ml含20μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品內容物，混勻，研細，取0.45g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯25ml，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.2.4 樟腦限量檢查 本品每粒理論含冰片25mg，按照《中國藥典》2020年版冰片（合成龍腦）項下規定，冰片（合成龍腦）中含樟腦（C10H16O）不得過0.50%計算，則樟腦含量理論不得超過0.13mg/粒（即0.278mg/g）。

將樟腦對照品稀釋，取10.748mg，用乙酸乙酯稀釋至25ml，再稀釋500倍，進樣1μl，注入色譜儀分析，以信噪比法測定樟腦定量限為0.86μg/ml。再取3ml，置10ml量瓶，用乙酸乙酯稀釋至刻度，精密量取1μl，注入色譜儀分析，以信噪比法測定檢出限為0.287μg/ml。

2.2.5 線性關系考察 取濃度為每1ml中含異龍腦247.4μg、龍腦303.2μg的混合對照品溶液、每1ml中含樟腦10.748μg的對照品溶液，分別吸取0.1μl、0.2μl、0.5μl、1μl、2μl、5μl，注入氣相色譜儀，記錄峰面積，以各對照品進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結果異龍腦、龍腦進樣量分別在2.474×10-2-1.237μg、3.032×10-2-1.516μg范圍內線性關系良好，回歸方程分別為Y=1.848×103X+4.099×101（相關系數γ=0.9997）、Y=1.852×103X+6.350×101（相關系數γ=0.9998）；樟腦在1.075×10-3-5.374×10-2μg范圍內線性關系良好，回歸方程分別為Y=1.815×103X +2.493×101（相關系數γ=0.9997 ），見表1。

表1 3種對照品的回歸方程和線性范圍

2.2.6 精密度考察 取同一批樣品，于配制后連續進樣6次，測定峰面積，結果樟腦、異龍腦、龍腦三者RSD分別為0.91%、0.68%、0.65%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 專屬性考察 自配不含冰片的空白制劑，按供試品溶液同法制成空白溶液，依法測定，結果顯示冰片陰性溶液在與龍腦、異龍腦、樟腦相應的位置上未見色譜峰，表明陰性無干擾，本方法測定專屬性較好，色譜圖見圖2。

圖2 龍腦對照品溶液/A、異龍腦對照品溶液/B、樟腦對照品溶液/C、龍腦異龍腦混合對照品溶液/D、無冰片樣品溶液/E、白帶凈樣品溶液/F。1-龍腦、2-異龍腦、3-樟腦

2.2.8 穩定性試驗 取同一批樣品，于配制后放置0小時、4小時、8小時、16小時、24小時測定峰面積，結果表明，供試品溶液在24小時內測定峰面積，結果樟腦、異龍腦、龍腦三者RSD分別為0.92%、0.87%、0.79%，峰面積基本穩定。表明供試品溶液在24小時內測定，峰面積基本穩定。

2.2.9 重復性試驗 取同一批樣品，按照2.2.3供試品溶液的制備，2.2.1色譜條件進行測定，樟腦、異龍腦、龍腦的平均含量分別為1.191mg·g-1、17.01mg·g-1、28.95mg·g-1，RSD 分別為0.79%、1.05%、1.02%。

2.2.10 回收率考察（準確度） 采用加樣回收法，取已知含量的同一批樣品（樟腦含量為1.191mg/g；異龍腦含量為17.01mg/g，龍腦含量為28.95mg/g），研細，分別取約0.45g、0.25g，0.12g，精密加入混合對照品溶液的乙酸乙酯溶液，按照2.2.3供試品溶液的制備，2.2.1色譜條件進行測定，結果見表2。

表2 龍腦、異龍腦、樟腦回收率測定結果

2.2.11 本品冰片投料量為25mg/粒，根據上述測定結果，結合《中國藥典》2020年版規定，龍腦含量不得少于55.0%。以投料理論值的80.0%-120.0%制定本品冰片含量限度，故暫定本品每粒含冰片以龍腦（C10H18O）和異龍腦（C10H18O）的總量計，應為20-30mg；且龍腦（C10H18O）含量應為11-16.5mg。

3 討論

3.1 提取溶劑的選擇 試驗考察乙醚、乙醇、乙酸乙酯作為溶劑，結果表明乙醇在提取異龍腦時，與乙酸乙酯和乙醚提取效果有明顯差異，乙酸乙酯和乙醚提取三種成分效果相近，但考慮到操作性及乙醚的安全性，故選擇乙酸乙酯作為測定樣品的提取溶劑。

3.2 提取方法及提取時間的選擇 試驗考察提取方法分別采用加熱回流提取20分鐘，超聲提取10分鐘、15分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘。結果表明超聲處理20分鐘即可將三種成分提取完全，故選擇超聲處理20分鐘作為測定樣品的提取方法。

3.3 中國藥典2020版一部中對兒茶的薄層鑒別中，選用的為纖維素板，在日常檢驗中使用頻率不高，故在制定此標準時選擇了使用更普遍的硅膠G板，在重現性考察、專屬性考察和加速試驗中結果均良好。

3.4 由于冰片易揮發，在供試品取樣過程中應快速，避免高溫，減少取樣過程中因為人為原因造成的誤差。

3.5 樟腦是冰片合成過程中的產物，文獻報道樟腦具有毒性，表現在對卵巢、睪丸、神經、肝臟、心臟及胎兒和孕婦中，對腎臟泌尿系統有潛在毒性和較小遺傳毒性[8]。白帶凈膠囊為陰道婦科用藥，故更需要對樟腦含量進行嚴格限制。