AFP聯合熱休克蛋白90α在肝癌早期診斷中的研究

李亞東 ，郭家鼎，李洋 ，王揚陽 ，隋賀松，關榮春

1.齊齊哈爾醫學院附屬第三醫院檢驗科，黑龍江齊齊哈爾 161000；2.齊齊哈爾市藥品檢驗中心，黑龍江齊齊哈爾 161000；3.齊齊哈爾建華醫院骨外二科，黑龍江齊齊哈爾 161000

原發性肝癌（primary liver cancer, PLC）是目前世界上致死率最高的惡性腫瘤之一，在全世界范圍內發病率有逐年上升的趨勢。由于早期無癥狀或臨床癥狀不明顯，進展迅速，確診時已達局部晚期或發生轉移，預后差。因此，肝癌的早期篩查和監測非常重要。良好的腫瘤標志物在高危篩查、早期診斷、指導治療等方面發揮著關鍵作用[1]。甲胎蛋白（AFP）作為目前臨床上診斷肝細胞癌應用最廣泛的腫瘤標志物，其敏感性及特異性有待提高，肝硬化結節、脂肪浸潤等肝臟良性病變均可發生AFP升高[2]，因此，在臨床實踐中需要一種新的指標來補充AFP，以提高肝癌的早期診斷率、治療效果和預后。熱休克蛋白90α（90α, Hsp90α）是一種進化上高度保守的細胞內分子伴侶，通常在細胞應激反應中被誘導產生，并被癌細胞分泌到細胞外空間，細胞外Hsp90α可促進多種癌細胞的細胞侵襲和上皮間質轉化過程[3-4]，一項臨床試驗數據表明，Hsp90α與肝癌的發生發展有關，Hsp90α水平的動態變化有助于監測治療效果[5]，基于此，本研究納入2021年8月—2022年8月齊齊哈爾醫學院附屬第三醫院收治的110例肝癌患者，探討AFP聯合Hsp90α在PLC診治中的作用。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取因肝病在本院住院的65例PLC患者（肝癌組）和54例肝硬化患者（良性肝病組），再選取同時期的60名健康體檢者作為對照組。肝癌組男35例，女30例；年齡25~85歲，平均（53.48±7.69）歲。良性肝病組男30例，女24例；年齡27~84歲，平均（54.12±7.22）歲。對照組男33例，女27例；年齡22~85歲，平均（53.01±8.35）歲。3組研究對象一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究經本院醫學倫理審查委員會批準，所有參與者已簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標準

肝病患者納入標準：①患者通過磁共振成像、腹部B超及生化檢測確診，并通過組織病理學進一步確診；②患者年齡18~85歲。排除標準：①患者接受過手術、放化療、靶向治療等抗腫瘤治療措施；②患者合并嚴重心、肺、腎功能障礙或其他嚴重系統疾病；③合并其他實體瘤者。

對照組納入標準：影像學檢查沒有肝臟及其他系統疾病者，且肝功能相關生化指標處于正常范圍內；患者自愿參與研究，且配合臨床檢查。排除標準：合并有黃疸性溶血癥、高脂血癥等肝代謝異常疾病者。

1.3 方法

收集所有參與者的外周血樣本置于EDTA-K2抗凝管中，3 000 rpm離心10 min，然后將血漿儲存在-20℃下備用。使用AFP化學發光免疫分析試劑盒（煙臺普羅吉生物科技發展有限公司）測量血清AFP水平，使用人HSP 90α蛋白ELISA試劑盒（煙臺普潤生物科技發展有限公司）測定血漿Hsp90α水平，所有操作均按照試劑盒說明書進行。

1.4 觀察指標

①比較3組受試者血漿熱休克蛋白90α（heat shock protein 90α, Hsp90α）、甲胎蛋白（alpha fetopro?tein, AFP）水平；②通過受試者工作特征（receiver operating characteristic, ROC）曲線分析血漿Hsp90α、AFP及聯合檢測的診斷價值。

1.5 統計方法

采用SPSS 19.0統計學軟件處理數據，計量資料以（±s）表示，符合正態分布，采用獨立樣本t檢驗或多樣本ANOVA檢驗；計數資料以例數或（%）表示；構建ROC曲線以評估靈敏度、特異性和各自的曲線下面積（area under curve, AUC）以及95%置信區間（CI），評估血漿Hsp90α與AFP聯合診斷在PLC患者中的診斷性能；通過Logistics邏輯回歸模型擬合后，對新變量預測概率（P）進行ROC分析，AUC的比較采用Z檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組患者血漿Hsp90α、AFP水平比較

肝癌組患者血漿Hsp90α、AFP水平均高于良性肝病組、對照組，且良性肝病組患者血漿Hsp90α、AFP水平均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

表1 3組患者血漿Hsp90α、AFP水平比較 [(±s),ng/mL]

表1 3組患者血漿Hsp90α、AFP水平比較 [(±s),ng/mL]

注：與對照組相比，*P<0.05；與良性肝病組相比，#P<0.05

組別對照組（n=60）良性肝病組（n=54）肝癌組（n=65）F值P值Hsp90α 38.73±5.38（99.73±17.04）*（133.24±36.89）*#239.822<0.001 AFP 7.95±1.25（180.95±50.40）*（209.05±42.55）*#505.063<0.001

2.2 血漿Hsp90α、AFP單獨及聯合檢測的診斷價值

ROC曲線分析結果顯示，Hsp90α、AFP單獨檢測的AUC分別為0.890、0.826，均明顯低于聯合檢測的0.951，差異有統計學意義（Z=2.155，P=0.031；Z=3.727，P=0.001）。見表2、圖1、圖2。

表2 Hsp90α、AFP單獨及聯合檢測的診斷效能分析

圖1 Hsp90α、AFP聯合檢測的ROC曲線

圖2 Hsp90α、AFP單獨檢測的ROC曲線

3 討論

PLC作為全球第五大常見的腫瘤，每年可導致約745 500例癌癥患者死亡，其中超過50%病例的死亡發生在中國，盡管近年來肝細胞癌治療取得了巨大進展，但由于復發和轉移的發生率高，五年生存率仍低于12%[6]，但如果在早期發現肝細胞癌，五年生存率可達到50%以上。根據巴塞羅那臨床肝癌分期系統，只有早期PLC患者才有資格接受治療。因此，盡早準確診斷對肝癌治療效果具有非常重要的意義。目前，PLC的篩查基于腫瘤標志物、成像技術和組織學，然而對于<1 cm的肝內結節，影像學檢測缺乏足夠的敏感性和特異性[7-8]。此外，盡管組織活檢可以做出準確的判斷，但這是一種侵入性手術，還可能會增加針道轉移風險。因此，迫切需要非侵入性和更有效的肝癌生物標志物。

AFP是肝癌患者篩查和臨床診斷中最常用的腫瘤標志物，盡管AFP檢測廣泛可用、價格低廉且易于實施[9]，但作為早期檢測PLC的血清學檢測，其準確性較差，本研究顯示AFP診斷肝癌的準確度僅為73.74%，與相關研究結果一致[10]，分析原因與炎癥和再生的病理生理變化有關，AFP水平不僅在PLC患者中增加，而且在活動性肝炎、無肝癌的肝硬化或潛在肝病惡化的患者中也增加；這意味著AFP檢測在風險人群中可能具有較低的特異性。有研究發現在11%~58%的高危肝病患者中也可以觀察到血清AFP顯著增加。因此，臨床上需要使用多項腫瘤標志物來提高對PLC診斷的準確度[11-12]。

Hsp90α是一種分子伴侶，參與多種生理和病理信號通路[13-14]。它在多種腫瘤中過度表達，如肝癌、結直腸癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等[15]。臨床研究顯示Hsp90α在肝癌細胞、血清和組織中過度表達，并與癌細胞轉移行為和癌癥相關信號通路相關[16]。隨著臨床階段的進展，肝癌患者血漿Hsp90α水平呈顯著上升趨勢，特別是Ⅰ期和Ⅱ期肝癌患者的Hsp90α水平顯著低于Ⅲ期和Ⅳ期肝癌患者，并且顯著高于良性肝病患者[17]。本研究結果也發現肝癌患者血漿Hsp90α水平顯著高于良性肝病患者和健康者（P<0.05），這與上述研究結果一致，這意味著Hsp90α有可能檢測出早期肝癌，而目前的成像方法無法檢測到。因此，它可以在高危人群的篩查和隨訪中發揮一定作用，以提高肝癌的早期診斷率，之前的一項臨床研究結果顯示，血漿Hsp90α對肝癌的診斷特異性和敏感性分別為90.0%和58.4%[18]，本研究結果顯示Hsp90α單獨診斷肝癌的特異性和靈敏度分別為98.20%和64.60%，這與上述研究基本一致，這說明Hsp90α可以提高肝癌診斷的特異性，考慮到使用單一蛋白作為生物標志物具有敏感性和特異性的局限性，Hsp90α、AFP的組合可能會提高PLC的診斷效率。

綜上所述，Hsp90α可以通過提高PLC的診斷特異性來輔助AFP診斷肝癌，與二者單獨檢測相比，二者結合可進一步提高肝癌的診斷準確度，因此，在臨床實踐中，通過Hsp90α聯合AFP對PLC進行診斷更為經濟、合適。