微柱凝膠抗球蛋白法、凝聚胺法與固相凝集法檢測在臨床輸血中的應用價值

【摘要】目的 分析微柱凝膠抗球蛋白法（MGCT）、凝聚胺法及固相凝集法用于臨床輸血中的價值。方法 選取2022年9月至12月在東莞康華醫院進行輸血治療的2 071例患者。其中血小板輸注無效的106例患者通過固相凝集法測定血小板抗體，后對血小板抗體陽性的患者進行譜細胞檢測并以譜細胞檢測結果為金標準，分析固相凝集法和譜細胞檢測在血小板抗體測定中的陽性符合率；所有患者通過MGCT及凝聚胺法開展配血，比較兩種方法的交叉配血試驗不合檢出情況，并提出相應的解決方法。結果 血小板輸注無效的106例患者通過譜細胞法測定血小板抗體顯示：陽性30例，陰性76例；固相凝集法結果顯示：陽性29例，陰性77例，陽性符合率為96.67%。

2 017例受血者開展交叉配血試驗顯示64例存在交叉配血試驗不合的情況，其中MGCT顯示58例存在交叉配血試驗不合的情況，符合率為90.63％；凝聚胺法顯示50例存在交叉配血試驗不合的情況，符合率為78.13％。結論 固相凝集法應用到臨床輸血期間血小板抗體檢測中和譜細胞檢測的符合率較高，MGCT用于交叉配血試驗較凝聚胺法效果更為理想，能更好檢出交叉配血試驗不合的情況，值得應用。

【關鍵詞】凝聚胺法；固相凝集法；微柱凝膠抗球蛋白法；輸血；交叉配血試驗

中圖分類號：R446.6 文獻標識碼：A 文章編號：2096-2665.2023.20.0.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2023.20.040

輸血指的是血液經靜注方式輸入到患者體內的治療方式，主要包含紅細胞輸注、血漿輸注及血小板輸注等，能補充血容量，提升攜氧能力和血漿蛋白，改善循環和凝血功能[1]。對于各類危重疾病患者，輸血治療屬于臨床比較常用的一類急救治療技術，但不同血型抗原和抗體之間的匹配性能直接影響患者治療，因此，輸血前對患者開展血型鑒定和抗體測定是確保其輸血安全的關鍵措施，也是防止輸血后不良反應的基礎條件[2]。人類的血型復雜多樣，紅細胞中的血型抗原類型較多，但通常的血型測定只是檢測ABO及Rh血型系統中D抗原，對血小板抗體等不能開展有效測定[3]。目前臨床常見免疫抗體篩查技術包含微柱凝膠抗球蛋白法（MGCT）、凝聚胺法及固相凝集法等。據有關研究顯示[4-6]，MGCT、凝聚胺法及固相凝集法這三種方法均有著操作簡單、迅速、重復性佳、敏感度及特異度高等優點，但有關三種方法在輸血中的應用價值研究較少。基于此，本研究將固相凝集法用于血小板抗體測定，將MGCT及凝聚胺法用于交叉配血試驗，分析3種方法在臨床輸血中的應用價值，旨在為臨床選擇輸血期間有關檢測監測方法提供參考依據，現報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2022年9月至12月在東莞康華醫院進行輸血治療的2 071例患者。其中，男性1 189例，女性882例；年齡12～70歲，平均年齡（40.35±8.62）歲。本研究經東莞康華醫院醫學倫理委員會批準，同時患者已簽署知情同意書。納入標準：均符合輸血治療的指征。排除標準：①存在輸血有關禁忌證者；②血液系統疾病者；③存在認知障礙、重度心理或精神疾病者。

1.2 測定方法

1.2.1 血小板抗體測定 血小板輸注無效的106例患者進行譜細胞法檢測血小板抗體，并以此結果作為金標準。固相凝集法測定其血小板抗體，具體操作步驟如下：收集空腹狀態的血液樣本3 mL放入抗凝試管內，以3 000 r/min開展5 min離心處理，后選擇上清液待測，對于未能及時測定的標本需放在-20 ℃環境中。將血小板抗體有關篩檢細胞放在反應孔的底部位置（選擇離心固定方法），將受血者的血清加入同時放入血小板抗體（上海血液生物醫藥有限公司，批號：蘇械注準20192400533），開展離心處理，后對檢測結果進行評定。結果評定：陽性結果是紅細胞平鋪于反應孔的底部表面或者紅細胞僅結合至部分孔底；陰性結果是紅細胞于反應孔底部的中央位置產生紅細胞聚集。對于血小板抗體陽性者，需要進一步開展譜細胞檢測并以譜細胞檢測結果為金標準。

1.2.2 交叉配血方法 ①MGCT。選擇按照規定保存好的Coombs配血卡，先放入專用的離心機（長沙湘智離心機儀器有限公司，型號：TD5B）內開展15 min離心處理，后進行編號，在主側中加入25 μL的受血者血清，50 μL供血者0.8%～1.0%的紅細胞懸液，在次側中加入受血者0.8%～1.0%的紅細胞懸液及供血者血清50 μL，放入到37 ℃的孵育箱內15 min，以1 000 r/min離心2 min、以1 500 r/min離心3 min，后經肉眼方法觀察最終結果。將主側管與次側管紅細胞均勻沉到孔底評定成陰性，懸浮在微柱凝膠表面即為陽性。②凝聚胺法。于主側管加進受血者的血清2滴及供血者的紅細胞懸液1滴，在次側管加進獻血者的血清2滴及受血者的紅細胞懸液1滴。在各管內依次加進低離子介質液0.65 mL，充分混勻，在室溫內進行1 min靜置。各管中依次加進凝聚胺液2滴，充分混勻，以3 500 r/min進行10 s離心處理，將上清液棄去，輕輕搖動試管，注意觀察是否存在凝集，若不存在凝集，則需重新開展操作。最后加入懸浮液2滴加入管底，輕輕搖動，觀察試管內凝集有無散開，若散開則代表配血結果相合，相反則代表配血結果不合。

1.3 觀察指標 ①觀察固相凝集法和譜細胞檢測在血小板抗體測定中的陽性符合率，陽性符合率=固相凝集法檢測顯示為血小板抗體陽性的例數/譜細胞法檢測顯示為血小板抗體陽性的例數×100%；②通過MGCT及凝聚胺法開展配血，觀察兩種方法交叉配血試驗不合的檢出情況，并提出相應的解決方法。

1.4 統計學分析 經SPSS 23.0統計學軟件處理數據，計數資料以[例（%）]表示，行χ2檢驗；計量資料以（x±s）代表，行t檢驗。Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血小板抗體檢測結果 血小板輸注無效的106例患者通過譜細胞法測定血小板抗體顯示陽性30例，陰性76例；固相凝集法結果顯示陽性29例，陰性77例，陽性符合率為96.67％（29/30）。

2.2 MGCT和凝聚胺法的配血情況和解決措施 2 017例受血者開展交叉配血試驗顯示64例存在交叉配血試驗不合的情況，包含溶血性貧血13例，受血者存在不規則抗體18例，冷抗體陽性9例，供血者存在不規則抗體5例，A亞型生成抗-A13例，藥物抗體4例，非特異性凝集4例，脂血4例，高纖維蛋白原4例；MGCT顯示58例存在交叉配血試驗不合的情況，符合率為90.63％，包含溶血性貧血11例（84.62%），受血者存在不規則抗體16例（88.89%），冷抗體陽性8例（88.89%），供血者存在不規則抗體4例（80.00%），A亞型生成抗-A13例（100.00%），藥物抗體4例（100.00%），非特異性凝集4例（100.00%），脂血4例（100.00%），高纖維蛋白原4例（100.00%）；凝聚胺法顯示50例存在交叉配血試驗不合的情況，符合率為78.13%，包含溶血性貧血9例（69.23%），受血者存在不規則抗體15例（83.33%），冷抗體陽性7例（77.78%），供血者存在不規則抗體4例（80.00%），A亞型生成抗-A12例（66.67%），藥物抗體4例（100.00%），非特異性凝集2例（50.00%），脂血4例（100.00%），高纖維蛋白原3例（75.00%），見表1。

3 討論

輸血治療屬于臨床一類重要的搶救與治療措施，正常人血量在體重中占比為7%～8%。人體的失血量≤10%時，機體內的血液系統能自我恢復，當機體的失血量gt;20%時，機體的代償功能無法維持在正常血壓水平，會引起機體內部的血液循環障礙，這時就須開展輸血治療[7-8]。輸血期間的安全性始終是臨床關注的一個熱點話題，主要目的是避免給受血者輸注不匹配的血液，進而導致嚴重輸血反應[9]。

多數正常患者能觀察到抗血小板抗體，血小板抗體測定多針對的是免疫性血小板減少紫癜者，對于免疫性血小板減少紫癜具備一定診斷價值，且血小板測定能防止非溶血性發熱有關輸血不良反應[10]。固相凝集法屬于血小板抗體一項常見檢測技術，血小板懸液通過離心洗滌后能于微孔板反應孔的底部表面產生血小板單層，加入適當的血液樣本進行孵育，當血液內包含血小板抗體時，能和血小板單層相結合，評定呈陽性[11]。本次研究發現：血小板輸注無效的106例患者通過譜細胞法測定血小板抗體顯示陽性30例，陰性76例；固相凝集法結果顯示陽性29例，陰性77例，陽性符合率為96.67%，提示固相凝集法在測定血小板抗體中的診斷準確度較高。但需注意的是，固相凝集法的操作步驟比較復雜，指示細胞有效期短，通過肉眼評定結果存在局限性[12]。MGCT及凝聚胺法屬于交叉配血試驗期間的兩種常用方法，其中MGC是經生物血凝膠過濾技術，于充滿凝膠微株腔內，已經包含抗人球抗體，后加進紅細胞及血清。若血清內包含該紅細胞的特異抗體，則會產生紅細胞有關免疫復合物，在離心力的作用下，這種復合物不會經過凝膠間隙浮在凝膠表面或者懸浮在凝膠中；若血清內不存在特異抗體，則無法產生紅細胞有關免疫復合物，在離心力作用下，分散紅細胞能經凝膠間隙沉到微株腔的尖底部[13]。凝聚胺法的配血原理為通過低離子溶液使離子強度下降，加快分子運動，使紅細胞的靜電斥力減弱，紅細胞間距縮短，加快紅細胞抗原與血清內抗體結合產生非特異凝集，若附加假凝集清除液后非特異凝集散開，但抗原抗體反應生成的特異性凝集依舊存在[14]。因此，能檢測到完全或不完全抗體。有研究認為[15]，MGCT較凝聚胺法的靈敏度更高，且結構更加準確；血清操作較為標準化，結果平穩，重復性佳，易掌握，對操作經驗要求不高；自動化程度較高，標本使用量較少，能減少操作污染。本次研究發現：2017例受血者開展交叉配血試驗顯示64例存在交叉配血試驗不合的情況，MGCT顯示58例存在交叉配血試驗不合的情況，符合率為90.63%；凝聚胺法顯示50例存在交叉配血試驗不合的情況，符合率為78.13%。考慮原因是凝聚胺法在檢測期間會受到冷凝集及非特異性抗體影響，但MGCT不會受到這些因素干擾，因此，檢測結果更為準確，符合率更高。但MGCT成本高，耗時較長，應用到臨床有局限性。若具備條件，能將上述兩種方法聯合使用，給臨床提供出可靠度更高的診斷依據。

綜上所述，固相凝集法應用到臨床輸血期間血小板抗體檢測中和譜細胞檢測的符合率較高，MGCT用于交叉配血試驗較凝聚胺法效果更為理想，能更好檢出交叉配血試驗不合的情況，值得推廣應用到臨床。但本次研究依舊存在不足的地方，如樣本均來自一家醫院，且未對各種檢查方式的準確度、敏感度和特異度等指標進行分析，獲得的結果存在局限性，這些均需在日后研究中加以補充和完善，更進一步論證上述結論，指導臨床實踐。

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