CD10在乳腺癌中的表達及其與患者預后關系的生物信息學分析及驗證

陳復喜,吳本娟,馬秋晟（.天津市北辰醫院,天津 300400;.天津市第一中心醫院,天津 3009）

有關腫瘤發生率的流行病研究顯示，乳腺癌已成為女性發病率最高的惡性腫瘤，全球每年大約有118萬乳腺癌新發病例[1-2]。2013年乳腺癌被劃分為四種分子亞型：LuminiaA型、LuminiaB型、HER-2過表達型、Basal-like型。不同分子分型的乳腺癌預后明顯不同。

CD10是一種鋅依賴型金屬蛋白酶，由肌成纖維細胞產生，又稱為急性淋巴母細胞白血病或淋巴瘤抗原。CD10蛋白可引起ECM降解，具有類似于基質金屬蛋白酶的活性。CD10在腎和肺組織中高度表達，在小腸、胎盤、脈絡叢、性腺、腎上腺皮質和白細胞中均有表達，同時CD10在正常乳腺組織的間質肌上皮細胞中被發現。CD10陽性細胞也出現在各種惡性腫瘤的間質中，包括胃癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌和結直腸癌。多項研究表明，基質細胞中CD10的表達與更具生物學攻擊性的腫瘤相關[3-4]。本研究旨在評估乳腺癌中CD10的表達與一些臨床病理參數和患者預后的關系。

1 材料與方法

1.1 CD10基因在不同組織中的表達情況 分別檢索TCGA和Oncomine數據庫中CD10基因的表達情況，檢索物種為人類，檢索基因為TAGLN2基因。比較乳腺癌患者腫瘤組織與正常腦組織中CD10基因表達水平是否存在差異，條件為（|Log2FC|＞1），P＜0.05。

1.2 蛋白網絡構建 選擇蛋白-蛋白作用數據庫（STRING）[6]對相關基因編碼蛋白作用關系進行富集分析。篩選條件為：①相互作用來源：Textmining，Co-expression，Neighborhood，Gene Fusion和Co-occurrence；②相互作用數值＜50；③置信度為0.4。

1.3 免疫組化 選取我院手術治療的58例乳腺癌患者進行回顧性分析，采用免疫組化測定58例患者CD10的表達，并探討其與患者病理特征的關系。將各組染色切片在光鏡下觀察評分并進行病理圖像采集。間質CD10表達于癌巢周圍的間質細胞及細胞外基質。選取5個有代表性的不同區域，觀察5個400倍高倍視野評定陽性細胞百分率和顯色強度。

1.4 統計學處理 采用SAS12.0統計軟件及各個數據庫在線分析軟件進行數據分析，計量資料應用±s表示，應用t檢驗；計數資料采用率表示，應用chi-square檢驗，生存分析采用Cox回歸模型，log-rank檢驗，P＜0.05表示存在統計學差異。

2 結果

2.1 CD10表達水平 分析TCGA和Oncomine數據庫顯示，CD10基因表達水平在不同腫瘤及對應正常組織中存在明顯差異，在大多數腫瘤組織中CD10呈現低表達；在乳腺癌患者中，癌組織中CD10基因表達水平顯著低于癌旁正常乳腺組織（P＜0.05）。Oncomine數據庫中，關于CD10在乳腺癌中表達的研究顯示，全部17項研究均證實CD10在乳腺癌組織中的表達水平低于正常乳腺組織。但CD10表達水平與乳腺癌患者臨床分期并無明顯相關性（見圖1）。

圖1 CD10在乳腺癌不同分期患者中的表達水平比較

2.2 突變分析 應用cBioPortal在線分析工具對TCGA數據庫中乳腺癌CD10（MME）基因突變情況進行了分析，結果顯示，有2.8%的組織標本中呈現CD10基因拷貝數的突變，不同突變類型基因拷貝數情況見圖2。

圖2 CD10基因在乳腺癌不同突變類型基因中的拷貝數情況

2.3 蛋白-蛋白相互作用網絡分析 應用在線蛋白-蛋白相互作用數據庫String分析與CD10蛋白相互作用的蛋白，條件為p=2E-15，作用分數＞0.9。PPI節點數共50個，關系453個，聚類分值為0.77，富集顯著（P＜0.05）。

2.4 生存分析 依據CD10在乳腺癌表達水平分為高、低表達組。采用logrank檢驗比較高低表達組是否存在生存期差異。結果顯示，CD10高低表達組患者無疾病進展生存（HR=0.85，P=0.40）和總生存（HR=1.1，P=0.73）均無統計學差異。

2.5 CD10間質表達與患者臨床病理特征關系 乳腺癌間質巢周圍（包括細胞外基質和間質細胞）CD10陽性表達著色呈均勻棕黃色顆粒。58例乳腺癌組織中CD10陽性表達者30例，陰性表達者28例。CD10表達與乳腺癌患者臨床病理特征分析顯示，CD10陽性表達與患者病理特征無相關性。見表1。

表1 間質CD10的表達及其與病理學特征的關系

3 討論

2015年《St Gallen國際早期乳腺癌治療專家共識》[7-8]提出將乳腺癌劃分為四種分子亞型：LuminiaA型、LuminiaB型、HER-2過表達型、Basal-like型。不同分子分型乳腺癌預后明顯不同。LuminiaA型細胞分化好，內分泌治療有效，遠處轉移幾率不高，預后效果好；LuminiaB型，給予內分泌治療結合化療的方案，治療效果較好；HER-2過表達型惡性程度較高，復發轉移較早，預后較差；Basal-like型即為三陰乳腺癌，瘤體較大，侵襲力強，臨床分期晚，預后差，臨床治療多采用化療，但是相對于其他分子分型，其局部復發、肺腦肝等遠處轉移的幾率較高，目前缺乏有效統一的治療方案。

CD10大多表達于間質細胞并可通過對細胞周圍環境的改變而促進其惡性變化，如增殖、轉移等，同時在復發過程中發揮重要作用[9-10]。研究發現CD10與胰腺癌、結腸癌及食管鱗狀細胞癌、乳腺癌發生發展密切相關[5,11]。因此檢測CD10的表達水平有可能成為評估乳腺癌預后及提供精準化治療的重要手段。CD10屬于金屬蛋白酶家族中的一個成員，其結構與MMP和間質溶解素相似，腫瘤細胞通過產生可溶性因子誘導間質細胞分泌CD10，從而促進自身的增殖[9]，同時也可通過降解基底膜及基質促進腫瘤細胞向癌巢周圍浸潤。Huang[12]的研究結果提示間質CD10高表達胃癌患者遠處轉移風險增高。已有研究認為CD10可促進惡性黑色素瘤的轉移[13-14]。然而關于CD10在乳腺癌中的表達及其與患者臨床病理特征和預后關系鮮有報道。

在本研究中，筆者發現在乳腺癌患者中，癌組織中CD10基因表達水平顯著低于癌旁正常乳腺組織（P＜0.05），TCGA數據庫中2.8%的乳腺癌組織標本中呈現CD10基因拷貝數的突變。Logrank檢驗顯示，CD10高低表達組患者無疾病進展生存（HR=0.85，P=0.40）和總生存（HR=1.1，P=0.73）均無統計學差異。同時免疫組化顯示，CD10陽性表達與患者病理特征無相關性（P＞0.05）。因此，CD10在乳腺癌患者腫瘤組織中呈現明顯的低表達，但CD10表達水平與乳腺癌理特征及生存期并無明顯相關性。結果提示CD10可能并不適合作為乳腺癌分子分期及預后的分子標志物。