液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析雞爪風(fēng)化學(xué)成分

蒙雪雁，王成海

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南寧 530200；2.廣東省東莞國(guó)藥集團(tuán)常平醫(yī)藥公司，廣東 東莞 523560）

雞爪風(fēng)（Desmos chinensislour.）為番荔枝科（Annonaceae）假鷹爪屬（Desmoslour）植物，又名碎骨王、雞香木、雞爪木、假鷹爪、酒餅藤，主要分布在廣東、廣西、云南和貴州等地。其莖作為民間習(xí)用藥材具有悠久歷史，記載于《嶺南采藥錄》，其味辛、性溫、有小毒、歸脾、肝經(jīng)；行氣消滯、祛風(fēng)止痛、殺蟲；用于治療消化不良、產(chǎn)后腹痛、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、瘧疾、水腫、魚骨梗喉、疥癬等［1-3］。雞爪風(fēng)主要化學(xué)成分為黃酮類、揮發(fā)油類及生物堿類等［4］。現(xiàn)代藥理研究表明，雞爪風(fēng)具有抗腫瘤、抗艾滋病毒（HIV）、抗氧化、抗菌、強(qiáng)心、抑制芳香酶和脂肪氧化酶、抑制活化T細(xì)胞核因子（NFAT）轉(zhuǎn)錄等多種生物活性［5］。 本研究通過(guò)UPLC-Q-TOF-MS∕MS 技術(shù)對(duì)雞爪風(fēng)莖甲醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，旨在為闡明雞爪風(fēng)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器

Sciex X500R Q-TOF 液質(zhì)聯(lián)用儀，美國(guó)Sciex 公司，配有ESI 源和Sciex OS 數(shù)據(jù)處理軟件；Waters Acquity Arc 超高效液相色譜儀，四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、2998PDA 檢測(cè)器、Waters 工作站，沃特世科技（上海）有限公司；SB-800DTD 型超聲波清洗機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司；SQP 型十萬(wàn)分之一電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用雞爪風(fēng)藥材采集于廣西壯族自治區(qū)貴港市；乙腈（HPLC 級(jí)，德國(guó)Merck 集團(tuán)）；甲酸（LC∕MS 級(jí)，賽默飛世爾科技公司）；甲醇（分析純，成都市科隆化學(xué)品有限公司）；水為超純水。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 色譜及質(zhì)譜檢測(cè)條件 色譜柱為Thermo scientific Accucore C18柱（100 mm×2.1 mm，2.6 μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水，梯度洗脫：0～1 min，5%乙腈；1～5 min，5%～27%乙腈；5～15 min，27%～70%乙腈；15～18 min，70%～95%乙腈；18～20 min，5%～95%乙腈；體積流量0.4 mL∕min；柱溫40.0 ℃；進(jìn)樣量3 μL。

質(zhì)譜條件，電噴霧電離源（ESI），正、負(fù)離子模式，掃描范圍m∕z 100～2000；碰撞能量35 eV；離子源溫度為600 ℃；噴霧電壓5500 V。通過(guò)一級(jí)質(zhì)譜信息確定精確相對(duì)分子質(zhì)量，二級(jí)質(zhì)譜獲得裂解信息，搜索數(shù)據(jù)庫(kù)和查閱文獻(xiàn)推測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)式信息。

1.3.2 供試品溶液的制備 取干燥雞爪風(fēng)莖粗粉0.0593 g，加甲醇至2 mL，超聲30 min。取適量提取物溶于甲醇，配制成1 mg∕mL 樣品溶液，用0.22 μm濾膜過(guò)濾，裝于液相小瓶?jī)?nèi)，待用。

2 結(jié)果與分析

采用UPLC-Q-TOF-MS∕MS 對(duì)雞爪風(fēng)莖甲醇提取物進(jìn)行分析，選擇正、負(fù)離子模式分別對(duì)供試品溶液進(jìn)行掃描，總離子流（Total ions current，TIC）見(jiàn)圖1和圖2。通過(guò)SCIX OS 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)查找質(zhì)譜響應(yīng)較高成分的精確相對(duì)分子質(zhì)量，與天然產(chǎn)物高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)（natural procducts HR- MSMS 2.0）進(jìn)行比對(duì)，獲得候選化合物，然后通過(guò)二級(jí)碎片離子及母離子可能的斷裂規(guī)律來(lái)確定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示，從雞爪風(fēng)中鑒定出27 個(gè)化學(xué)成分，各化學(xué)成分的保留時(shí)間、質(zhì)譜信息見(jiàn)表1。通過(guò)UPLC-Q-TOF-MS∕MS聯(lián)用技術(shù)，并通過(guò)對(duì)比參考文獻(xiàn)對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行了初步鑒定，發(fā)現(xiàn)所含成分可分為氨基酸及其衍生物、有機(jī)酸、黃酮類、核苷類及其他5 大類成分。

表1 雞爪風(fēng)化學(xué)成分的UPLC-Q-TOF-MS/MS 鑒定結(jié)果

圖1 雞爪風(fēng)莖甲醇提取物正離子總離子流

2.1 氨基酸及其衍生物類

在雞爪風(fēng)中共鑒定出3 個(gè)氨基酸及其衍生物（序號(hào)1、6、7）。在正離子模式下，化合物1 產(chǎn)生m∕z 266.1236［M+H］+的準(zhǔn)分子離子峰，對(duì)應(yīng)分子式C10H19NO7；其 主 要 的 二 級(jí) 碎 片 有m∕z 98.0601，194.0819，230.1023，結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)匹配及其碎片信息并參考文獻(xiàn)［6］，鑒定為γ-氨基丁酸葡萄糖苷。化合物6 在正離子模式下產(chǎn)生294.1549［M+H］+的準(zhǔn)分子離子峰，對(duì)應(yīng)的分子式為C12H23NO7。其主要的二級(jí)碎片有m∕z 86.0970，230.1403，276.1454，結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)匹配及碎片信息并參考文獻(xiàn)［7］數(shù)據(jù)，推測(cè)為異亮氨酸果糖苷。化合物7 在正離子模式下產(chǎn)生166.0863［M+H］+的準(zhǔn)分子離子峰，對(duì)應(yīng)的分子式為C9H11NO2。其主要的二級(jí)碎片有m∕z 103.0549，120.0814，結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)匹配及碎片信息并參考文獻(xiàn)［7］數(shù)據(jù)，推測(cè)為苯丙氨酸。

2.2 有機(jī)酸類

在雞爪風(fēng)中共鑒定出11 個(gè)有機(jī)酸類成分（序號(hào)分別為2、3、8～13、20、22、24、25），該類成分的二級(jí)質(zhì)譜裂解特征通常易失去H2O、CO、CO2、CH2等中性碎片。以化合物20 為例，在正離子模式下產(chǎn)生149.0599［M+H］+的準(zhǔn)分子離子峰，對(duì)應(yīng)的分子式為C9H8O2。其主要的二級(jí)碎片有m∕z 103.0555，149.0245，結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)匹配及碎片信息并參考文獻(xiàn)［10］數(shù)據(jù)，推測(cè)為肉桂酸，其可能裂解途徑如圖3 所示。肉桂酸在癌癥干預(yù)中有潛在的用途，其對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、肺癌細(xì)胞均有抑制作用［22］。

圖3 肉桂酸可能的裂解途徑

2.3 黃酮類

黃酮類化合物是中草藥常見(jiàn)的有效成分，本研究共鑒定出雞爪風(fēng)中4 個(gè)黃酮類成分（序號(hào)分別為14～16、21）。黃酮類成分能夠減輕關(guān)節(jié)炎程度，保護(hù)關(guān)節(jié)組織，減少滑膜增生，血管翳形成，軟骨破壞和骨侵蝕改善關(guān)節(jié)組織關(guān)節(jié)翳形成，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和骨侵蝕［23］。根據(jù)其二級(jí)碎片離子和相應(yīng)文獻(xiàn)，分別鑒定為柚皮素、柚皮苷或異構(gòu)體、槲皮素及芒柄花素。

2.4 核苷類

在雞爪風(fēng)莖甲醇提取物中共鑒定出2 個(gè)核苷類成分（序號(hào)分別為4、5）。化合物4 在正離子模式下產(chǎn)生m∕z 268.1034［M+H］+的準(zhǔn)分子離子峰，對(duì)應(yīng)分子式C10H13N5O4；其主要的二級(jí)碎片離子m∕z 136.0618 分子組成與腺嘌呤堿基一致。結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)匹配和二級(jí)碎片并參考文獻(xiàn)［7］數(shù)據(jù)，鑒定為腺苷。化合物5 在負(fù)離子模式下產(chǎn)生m∕z 282.0886［M-H］-的準(zhǔn)分子離子峰，對(duì)應(yīng)分子式C10H13N5O5；其主要的二級(jí)碎片離子m∕z 150.0440，其可能裂解過(guò)程見(jiàn)圖4。

圖4 鳥苷可能的裂解途

2.5 其他類

在人參配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)湯劑中共鑒定出6 個(gè)其他類成分（序號(hào)分別為12、17～19、23、27）。其中，化合物17 在負(fù)離子模式下產(chǎn)生m∕z 623.1640［M-H］-的準(zhǔn)分子離子峰，對(duì)應(yīng)分子式C29H36O15，結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)匹配并參考文獻(xiàn)［6］，離子m∕z 315.0532 是由分子離子依次脫去咖啡酰基、鼠李糖殘基產(chǎn)生，再繼續(xù)丟失一分子葡萄糖并脫水后得到，鑒定為毛蕊花糖苷。

3 小結(jié)

本研究鑒別出的有機(jī)酸類化合物較多，可能與提取方法有關(guān)。中藥有機(jī)酸類成分藥理作用廣泛，如抗炎癥反應(yīng)，抑制血小板聚集、抗血栓，抗氧化，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等［24］。本研究通過(guò)UPLC-QTOFMS∕MS 分析，鑒定雞爪風(fēng)莖潛在的主要成分，并查閱相關(guān)報(bào)道了解這些化合物的主要藥理活性，發(fā)現(xiàn)存在抗癌、抗炎等活性成分，與雞爪風(fēng)傳統(tǒng)藥理作用一致，為以后提取分離條件提供重要參考以及后期的抗炎活性研究提供依據(jù)。