規模雞場重組禽流感病毒三價滅活疫苗免疫效果評估

何 丹，楊銘芬，楊錦蘭，張 兵

（南寧市動物疫病預防控制中心，南寧 530001）

禽流感（Avian influenza，AI）是由禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的一種急性、高度接觸性人畜共患傳染病［1］。根據A 型流感病毒的血凝素（HA）與神經氨酸酶（NA）不同，已發現16 個HA 亞 型 和9 個NA 亞 型［2］。高 致 病 性 禽 流感 病毒（Highly pathogenic avian influenza virus，HPAIV）給養禽業帶來不可估量的經濟損失，嚴重威脅到人類身體健康。針對AIV 抗原變異性強、抗原性逐漸變異的特點，科研人員不斷研制出一系列疫苗在家禽中大規模使用，并取得了理想的防控效果［3，4］。2017年9月起，原農業部要求全國采用重組禽流感（H5+H7）疫苗對家禽進行強制免疫，各地對重組疫苗進行了一系列評估［5-7］。免疫抗體監測是了解疫苗免疫效果的有效方法，及時掌握疫苗使用效果非常必要。本試驗對南寧市轄區內4 個規模雞場的樣品進行HPAIV 抗體檢測，客觀評價疫苗臨床效果，以期制訂更合理的免疫程序，為禽流感綜合防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

分別從4 個規模雞場選擇14 日齡左右、同一批次的雞。

1.1.1 種雞 種雞A場5000羽（疫苗批號2020016），種雞B 場5000 羽（疫苗批號2020017）；對照組各100 羽。

1）免疫。試驗組首次免疫肌肉注射疫苗0.3 mL∕羽；21 d 后第二次免疫0.5 mL∕羽。對照組以相同劑量和方式注射生理鹽水。

2）采樣。首免前采樣，首免后第1、2、3 周及二免后第2、4、6 周，首免后5、6 個月采樣。每次隨機采集50 羽免疫雞和10 羽對照雞血清，及對應的喉頭、泄殖腔棉拭子。

1.1.2 肉雞 肉雞C 場（95 d 出欄）900 羽，肉雞D 場（70 d 出欄）900 羽，疫苗批號均為2020016；對照組各100 羽。

1）免疫。C 場試驗組接種方法同種雞；D 場試驗組肌肉注射疫苗0.5 mL∕羽；對照組分別以相同劑量和方式注射生理鹽水。

2）采樣。C 場首免前采樣，首免后第1、2、3 周及二免后第2、4、6 周采樣，直至出欄。D 場免疫前采樣，免疫后每周采樣，直至出欄。每次隨機采集50羽免疫雞和10 羽對照雞血清，及對應的喉頭、泄殖腔棉拭子。

1.2 疫苗與試劑

1.2.1 疫苗 重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗（H5N1 Re-11 株+Re-12 株、H7N9 H7Re-3 株），批號2020016、2020017，廣東永順生物制藥股份有限公司生產。

1.2.2 試劑 禽流感病毒H5 亞型（Re-11 株）血凝抑制抗原，批號20201218，哈爾濱國生生物科技股份有限公司生產；禽流感病毒H5 亞型（Re-12 株）血凝抑制抗原，批號20210105；禽流感病毒H7N9 亞型（Re-3 株）血凝抑制抗原，批號20210525。禽流感病毒H5 和H7 亞型雙重實時熒光RT-PCR 檢測試劑盒，批號AIV-H5＆H720210531P，北京世紀元亨動物防疫技術有限公司生產。

1.3 抗體檢測

采集的血清分別檢測H7N9 H7-Re3 株和H5N1 Re-11 株、H5N1 Re-12 株抗體，按照國家標準《GB∕T 18936—2020 高致病性禽流感診斷技術》中HA、HI試驗方法進行。HI 抗體滴度≥4log2 為免疫抗體合格，免疫合格個體數量占群體總數的70%（含）以上為免疫合格群體。

1.4 核酸檢測

喉頭、泄殖腔棉拭子按試劑盒方法進行禽流感病毒核酸檢測。

2 結果與分析

2.1 種雞

注射批號2020016 疫苗的A 場免疫后H7 效價產生較H5 緩慢；A 場首免后第2 周H5、H7 抗體合格率達70%以上，第3 周達90%以上；二免后第2 周能保持較高水平，平均效價均可達9log2 以上，第4 周效價有所回落，第6 周回升。注射批號2020017 疫苗的B 場抗體效價上升較A 場緩慢，二免后同樣在第4周有所回落而后又回升，但均能保持較高效價水平。A、B 場首免第5、6 個月抗體效價均有所回落，差異不大（表1）。

表1 種雞A、B 場抗體水平

2.2 肉雞

從表2、表3 可知，肉雞C 場和D 場H5 抗體產生快，首免第3 周合格率達100%，平均效價達8log2 以上；H7 抗體產生較慢，首免第3 周合格率雖上升至80%以上，但平均效價不高。C 場在二免后抗體水平穩定，第4 周效價回落，但直至出欄抗體合格率和平均效價均保持較高水平。D 場僅免疫1 次，平均效價穩步上升至9 log2 以上，在第6 周開始逐步下降，合格率均保持較高水平。

表2 肉雞C 場抗體水平

3 小結與討論

不同批次的該重組禽流感病毒三價滅活疫苗在免疫禽群后均能產生抗體，合格率可達到90%以上，二免后能保持一定水平。該疫苗首免后第3 周H5、H7 抗體均能達到較高水平，未出現臨床發病情況，說明該疫苗有效性較好，保護率較高。H5 抗體產生較H7 快且穩定，批號2020016 疫苗產生抗體比批號2020017 稍快，首免或二免后抗體合格率及效價出現短時間不同程度的回落現象，但很快又回升，可能跟疫苗批次、抗原濃度、水乳化程度及禽群種類、個體差異等有關。進行二免的禽群比只進行1次免疫的禽群抗體水平穩定，相應棉拭子樣品未檢測出H5 和H7 亞型禽流感病毒核酸陽性，未見試驗養殖場反映有禽只異常死亡及明顯應激現象，說明該疫苗安全性較好。試驗禽群H5 母源抗體都較高，疫苗抗原性可能受影響，對免疫效果有一定影響。疫苗免疫程序、接種日齡、接種次數、間隔時間及免疫操作規范性都會影響免疫效果，制定科學免疫程序并嚴格執行，能夠進一步提高免疫效果，建議對日齡較大（如120 日齡）出欄的禽群進行三免。