GeneXpertMTB/RIF 對結核病的診斷價值及復治患者群體特征研究

劉乃剛，高迎春

(1.寶應縣人民醫院檢驗科，江蘇 寶應 225800；2.寶應縣疾病預防控制中心檢驗科，江蘇 寶應 225800)

結核病（tuberculosis）是由于結核桿菌引起的一種慢性傳染病，結核菌會對人體器官造成損傷，其中肺部最容易受到侵犯，故肺結核是結核病的主要類型[1]。相關研究顯示[2，3]，結核病患者人群中，80%以上的患者存在肺部癥狀，由于呼吸道是結核病患者的主要傳播方式，特別是隨著近年來經濟發展快速，環境污染嚴重，結核病發病率呈逐年上升趨勢。因此，準確診斷、及時有效治療是關鍵。目前，診斷結核病的方法較多，其中常規抗酸染色陽性率低，而培養耗時長，均不能滿足臨床對結核病早期診斷、治療需求[4]。GeneXpertMTB/RIF 屬于分子診斷技術，具有操作簡單、耗時短的優勢。但是對結核病的診斷效能尚無統一定論，其診斷價值還需要臨床不斷探究證實[5]。本研究結合2021 年6 月-2022 年1 月在寶應縣人民醫院診治的126 例疑似結核病患者臨床資料，研究GeneXpertMTB/RIF 對結核病的診斷價值及復治患者群體特征，為臨床結核病診斷以及預防和控制復治提供一定的參考依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021 年6 月-2022 年1 月在寶應縣人民醫院診治的126 例疑似結核病患者，其中男92 例，女34 例；年齡17～78 歲，平均年齡（45.19±5.10）歲；其中復治患者28 例。患者自愿參加本研究，并簽署知情同意書。

1.2 納入和排除標準 納入標準：①均合并不同程度咳嗽、咳痰、痰中帶血或咯血[6]；②未接受免疫抑制劑治療患者以及并發糖尿病患者；③認知、交流正常。排除標準：①合并肝、腎、心、腦血管系統等嚴重疾病者；②依從性較差，不能配合者；③隨訪資料不完善者。

1.3 方法

1.3.1 痰涂片染色 采用接種環取痰液樣本中干奶酪樣壞死血塊，制成厚涂片，并快速干燥固定，制定結束后將涂片用石碳酸復紅溶液染色，下部火焰加熱5 min，流水沖洗，然后用3%鹽酸乙醇將紅色圖片脫色1 min，流水沖凈，再用亞甲藍溶液將厚涂片染色30 s[7]。制備完成后在油鏡下觀察，出現駝色細菌或染色片呈紅色現象，提示體內細菌具有抗酸性，如果出現藍色且駝色現象提示體內細菌呈非抗酸性[8]。

1.3.2 改良羅氏培養法 將痰液標本采用4%的氫氧化鈉溶液進行處理，通過無菌操作的方法將標本在改良羅氏培養基斜面上進行接種，在37 ℃的條件下分別培養3 d 和7 d 后進行觀察，然后再每周觀察1次，對生長情況進行詳細記錄，直至培養出陽性結果；如果60 d 后無生長，則判斷為陰性[8，9]。

1.3.3 GeneXpertMTB/RIF 檢測 在痰液標本中以1∶2比例加入處理液，然后放置于渦旋振蕩器上渦旋15～30 s，然后室溫孵育10 min，在渦旋震蕩15～30 s，室溫孵育5 min，待標本完全液化，加入樣品盒。將樣品盒放入由美國Cepheid 公司生產的GeneXpertMTB/RIF 核酸擴增儀中，2 h 后讀取結果。探針循環閾值≤38 時表示樣本為陽性,早、晚期閾值差值≤3.5 表示利福平敏感[10，11]。

1.4 觀察指標 觀察不同檢測方法（痰涂片染色、改良羅氏培養法、GeneXpertMTB/RIF）對結核病診斷效能、分枝桿菌利福平藥敏性以及復治患者群體特征。

1.4.1 診斷效能[12]靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%；特異度=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100%。

1.4.2 癥狀和體征評分[13]包括咳嗽、咳痰、咯血、胸痛、呼吸困難、乏力，依據嚴重程度分為無癥狀、輕度、中度、重度，依次記為0、1、2、3 分，評分越高癥狀越嚴重。

1.5 統計學方法 采用統計軟件包SPSS 21.0 版本對本研究的數據進行統計學處理，采用（P＜0.05 說明差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同檢測方法陽性率比較 GeneXpertMTB/RIF檢測陽性率高于痰涂片染色、改良羅氏培養法檢測陽性率（P＜0.05），見表1。

表1 不同檢測方法陽性率比較[（%）]

表1 不同檢測方法陽性率比較[（%）]

注：與痰涂片染色、改良羅氏培養法比較，*P＜0.05

2.2 不同檢測方法診斷效能比較 3 種方法聯合檢測敏感度均高于GeneXpertMTB/RIF、痰涂片染色、改良羅氏培養法（P＜0.05），特異度小于改良羅氏培養法、GeneXpertMTB/RIF、痰涂片染色（P＜0.05），且GeneXpertMTB/RIF 特異度小于改良羅氏培養法（P＜0.05），見表2。

表2 不同檢測方法診斷效能比較（,%）

表2 不同檢測方法診斷效能比較（,%）

注：與3 種方法聯合比較，P＜0.05；與痰涂片染色、GeneXpertMTB/RIF、3 種方法聯合比較，**P＜0.05

2.3 GeneXpertMTB/RIF 檢測方法與改良羅氏培養法結果一致性 GeneXpertMTB/RIF 檢測利福平結核枝桿菌藥敏結果與改良羅氏培養法結果一致性良好（Kappa=0.722，=0.001）。

2.4 復治患者單因素分析 復治患者單因素分析顯示，不同地區、職業、結核病接觸史、治療前癥狀和體征評分、既往治療次數、既往用藥種類、既往用藥不良反應比較，差異有統計學意義（P＜0.05），而不同年齡、性別比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 復治患者單因素分析（,%）

表3 復治患者單因素分析（,%）

2.5 多因素Logistic 回歸分析復治患者獨立危險因素 治療前癥狀及體征評分≥6 分、既往治療＞2 次、農村、農民是復治患者發生的獨立危險因素（P＜0.05），見表4。

表4 多因素Logistic 回歸分析復治患者獨立危險因素

3 討論

結核病傳統痰涂片鏡檢和結核分枝桿菌培養在臨床應用均具有一定的局限性[14，15]。本研究選擇的GeneXpertMTB/RIF 技術是一種全新的體外診斷技術，可實現定量聚合酶鏈式反應（PCR）擴增和熒光擴增于一體，采用一次性試劑盒，可自動完成檢測，相對可減少檢測過程中的干擾因素，且檢測時間僅為2 h，從理論基礎上分析可滿足早期結核病診斷和治療需求[16，17]。基于以上優點，GeneXpertMTB/RIF技術可作為結核病診斷首選方式。但是目前關于GeneXpertMTB/RIF 對結核病診斷敏感度、特異度相關研究存在差異[18]。

本研究結果顯示，GeneXpertMTB/RIF 檢測陽性率高于痰涂片染色、改良羅氏培養法檢測陽性率（＜0.05），與常規結核病檢測方法比較，GeneXpertMTB/RIF 可提高檢測陽性率，可對人群進行篩查，有效縮小篩查范圍，確定高危人群，該結論與張玉等[19]的研究結果基本一致。同時研究結果顯示，3 種方法聯合檢測敏感度均高于GeneXpertMTB/RIF、痰涂片染色、改良羅氏培養法（P＜0.05），特異度小于改良羅氏培養法、GeneXpertMTB/RIF、痰涂片染色（P＜0.05），且GeneXpertMTB/RIF 特異度小于改良羅氏培養法（P＜0.05），提示3 種方法比較GeneXpertMTB/RI 具有較高的診斷敏感度，但是改良羅氏培養法對診斷特異度極高，與涂陰結核臨床診斷一致性良好。雖然3 種方法聯合診斷可提高敏感度，但特異度卻降低。因此，對于結核病患者，GeneXpertMTB/RI 檢測方式是最佳的診斷方法，但是為了進一步提高診斷敏感度和特異度，可采用3 種檢測方法聯合，以獲得更準確的診斷效果。GeneXpertMTB/RIF 檢測利福平結核枝桿菌藥敏結果與改良羅氏培養法結果一致性良好（Kappa=0.722，P＜0.05），該結論提示GeneXpertMTB/RI 檢測和改良羅氏培養法藥敏試驗具有較高的一致性，可見該方法診斷結核病可獲得良好的診斷效能，尤其是其與藥敏試驗較高一致性可為復治結核病患者治療提供可靠的參考，并有利于減少耐藥結核病的傳播。此外，對復治患者進行單因素分析，發現不同地區、職業、結核病接觸史、治療前癥狀和體征評分、既往治療次數、既往用藥種類、既往用藥不良反應比較，差異有統計學意義（P＜0.05），而不同年齡、性別比較，差異無統計學意義（P＞0.05），提示復治結核病患者具有一定的群體特點，與職業、所在地域、結核病接觸史、治療前癥狀評分、既往治療次數和用藥種類以及用藥不良反應密切相關。分析認為可能與農村生活環境差，農民文化程度相對較低，對疾病相關預防知識了解及重視少，從而容易造成結核病感染和傳播，從而增加再次感染的風險[20]。同時臨床治療前癥狀評分越高，病情越嚴重，且治療次數、用藥種類越多，耐藥風險越高，從而增加健康人群的感染，提高復治率。多因素Logistic 回歸分析，農村、農民治療前癥狀及體征評分≥6 分、既往治療＞2 次是復治患者發生的獨立危險因素（p＜0.05），表明農村、農民、治療前癥狀及體征評分≥6 分、既往治療＞2 次是結核病復治患者高危人群。因此，加強對農村、農民結核病患者健康宣教，尤其對治療癥狀評分較高患者，在治療過程進行密切監測，從而有效控制以上風險因素，降低結核病復治發生率，提高臨床結核病初始治愈率。

綜上所述，GeneXpertMTB/RIF 對結核病具有較高的診斷價值，且可獲得與改良羅氏培養法結果一致的利福平結核枝桿菌藥敏結果。臨床依據GeneXpertMTB/RIF 診斷結果，并結合結核病復治患者群體特征（農村、農民、治療前癥狀及體征評分≥6分、既往治療＞2 次），加強對高危群體監測和防控，從而減少結核病的復發和傳播。